湖北省不同地区汉坦病毒M片段的分析研究

参考汉坦病毒(HV)的基因文库软件设计M片段G1区型特异性引物,以HV 76/118、H-114、A9及R22株RNA为阳性模板,建立HV的分型方法--逆转录一半巢式聚合酶链反应(RT-heminested PCR),对湖北省不同地区分离的30株HV进行分型.结果显示(1)建立的RT-heminested PCR分型方法对HV两型的代表株76/118(HTN)、A9(HTN)、H-114(HTN)及R22(SEO)RNA进行了特异性扩增,其大小与理论值一致;此法只能检测HVRNA,不能检测其它病毒RNA.(2)分离于湖北省不同地区的30株HV的分型结果为汉滩型21株、汉城型9株,其中长江以南汉滩型12株、汉城型2株;长江以北汉滩型9株、汉城型7株.这表明建立的RT-heminested PCR用于HV的检测特异性好;分析湖北省不同地区分离的30株HV,显示湖北省HFRS流行为混合疫区;且在湖北地区具有一定的地理聚集性.     

应用反转录——套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病…

采用５’端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍－酚一步法（胍酚法）提了病毒ＲＮＡ,进行反转录－套式ＰＣＲ,检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个ＰＦＵ病毒的ＲＮＡ〉比磁珠法敏感１０倍,整个检测过程在５小时完成。应用该方法对１３７份汉滩型和汉城型ＨＦＲＳ病人血清进行检测分型,总阳性率达６０．５０％。其中,病程在７日以内（急性期）的从血清仍     

吉林地区HFRS病原体基因型分析

为调查吉林地区褐家鼠中汉坦病毒病原体基因型及其分布情况,采用免疫荧光法检测吉林市区及吉林市所属各县市收集的鼠肺标本,对汉坦病毒抗原阳性标本以巢式RT-PCR法扩增S基因片段上的核苷酸序列并测序,将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒序列进行同源性分析及系统进化树分析.序列分析发现吉林地区褐家鼠携带的汉坦病毒均为汉城病毒,S3...     

汉坦病毒的基因分型及其序列分析

为了探讨从核苷酸水平耐汉坦病毒进行分型,设计两对型特异性引物,采用反转录和聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,对亚太地区１８株汉坦病毒进行了扩增鉴定,并对其中７株汉坦病毒的ＰＣＲ产物进行了测序分析。ＰＣＲ的分型结果表明,Ⅰ型引物只能扩增血清Ⅰ型病毒的ｃＤＮＡ;Ⅱ型引物也只能扩增血清Ⅱ型病毒,其间无交叉反应。采用巢式ＰＣＲ和限制性内切酶验证了ＰＣＲ产物的特异性。序列分析结果表明,Ｒ３６Ｍ片段Ｇ１区的核苷酸序列与血清Ⅰ型病毒代表株７６－１１８的同源性为７８．４％,而与血清Ⅱ型病毒Ｒ２２的同源性为６８．１％;Ｒ３６与汉坦病毒序列同源性的成对比较结果也表明,Ｒ３６与血清Ⅰ型病毒的同源性均高于血清Ⅱ型病毒;Ｌｅａｋｅｙ虽然能被Ⅱ型引物扩增,但其序列与血清Ⅱ型病毒Ｒ２２的同源性仅为４４．９％,故不属于血清Ⅱ型病毒。上述研究结果表明,反转录聚合酶链反应能对多数汉坦病毒准确分型,但最终结果尚有赖于序列分析。     

汉坦病毒空气传播感染的实验室和野外采样研究

本项研究是通过动物实验和现场采样研究汉坦病毒气溶胶传播感染。用感染的黑线姬鼠排泄物自然形成的病毒气溶胶进行实验。黑红姬鼠感染后第5天放入离乳小鼠和乳小鼠,暴露10d,检测不到抗体,感染后第7天,放 乳小鼠和乳小鼠,暴露10d,可以检测出抗体;黑线姬鼠在暴露15d时,可以检测出抗体,可见黑线姬鼠感染后,第4天可能是它向体外排毒的一个时间标志,且形成的病毒气溶胶具有感染性。对现场采集的空气样品和收集的打谷者佩戴的口罩样品的研究发现,在稻田堆放的稻捆根部和鼠栖息的草窝的空气中每350L空气中和打谷场脱粒机附近每96L空气中,含有至少一个具有生物活性的汉坦病毒粒子,结合流行病学调查结果,可以判定,汉坦病毒经空气传播吸入感染可能是秋冬季节肾综合征出血热发病的主要传播途径。     

RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿（ＡＧＰＣ）一步法提取病毒ＲＮＡ,并依据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＦＲＳＶＲＮＡ方法,应用此法对ＨＦＲＳＶ感染的ＶｅｒｏＥ６细胞培养液及ＨＦＲＳ患者血清中的病毒ＲＮＡ进行检测。结果显示,感染细胞培养液及３５例ＨＦＲＳ患者血清均为阳性,正常的ＶｅｒｏＥ６     

浙江省汉坦病毒基因分子进化分析

为了分析浙江省汉坦病毒分子流行病学的特点,本文应用分子生物学软件对1981～2007年从浙江省不同地区不同宿主分离的12株汉坦病毒的S、M基因序列进行分子进化分析,结果显示:浙江省属汉滩(HTN)型和汉城(SEO)型的混合型疫区,病毒的基因差异和亲缘远近关系主要表现在地区性,而与病毒分离的年代与宿主关系并不大,表现出明显的地理聚集现象,该现象在HTNV中的表现尤为明显,同一地区分离的病毒表现为较高的基因同源性,系统进化树上分布于同一或临近分支。另外发现分离自浙江省建德地区的Gou3和ZJ5株在SEOV进化枝中构成一独立分支,而且与国内外SEOV其他毒株的基因差异均较大,在浙江省建德地区存在着SOEV的特殊亚型病毒。     

汉坦病毒空气传播感染的实验室和野外采样研究

本项研究是通过动物实验和现场采样研究汉坦病毒气溶胶传播感染。用感染的黑线姬鼠排泄物自然形成的病毒气溶胶进行实验。黑线姬鼠感染后第5天放入离乳小鼠和乳小鼠,暴露10?d,检测不到抗体,感染后第7天,放入离乳小鼠和乳小鼠,暴露10?d,可以检测出抗体;黑线姬鼠在暴露15?d时,可以检测出抗体。可见黑线姬鼠感染后,第7天可能是它向体外排毒的一个时间标志,且形成的病毒气溶胶具有感染性。对现场采集的空气样品和收集的打谷者佩戴的口罩样品的研究发现,在稻田堆放的稻捆根部和鼠栖息的草窝的空气中每350L空气中和打谷场脱粒机附近每96L空气中,含有至少一个具有生物活性的汉坦病毒粒子。结合流行病学调查结果,可以判定,汉坦病毒经空气传播吸入感染可能是秋冬季节肾综合征出血热发病的主要传播途径。     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

肾综合征出血热 (Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属 (Hantavirus,HV)中的病毒引起的急性传染病,该病的病死率较高,早期诊断和治疗尤为重要.     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

To establish a rapid, sensitive and specific diagnostic assay for Hantavirus with microarray techniques, specific primers and probes were designed according to the conservative and specific DNA sequence of 76-118 strain and R22 strain. The probes were spotted on glass slides to form microarrays.The Cy3-1abled single stranded DNA fragments prepared by dissymmetical PCR were hybridized with the probes on the glass slides. The microarrays were scanned and analyzed with a scanner. The results showed that the DNA microarray could detect the different typed DNA of HTN and SEO with adequate specificity and sensitivity. The developed DNA microarray and techniques might be a very useful method for diagnosis and prevention, and could be widely applied in specific pathogens detection ofinfectious diseases such as hemorrhagic fever with renal syndrome.     

汉坦病毒抗原性差异及其基因分型

用抗汉坦病毒单克隆抗体（Ｍｃ－Ａｂ）对汉坦病毒Ｂ７８株（来自病人血）和Ｒ１７８株（分离自褐家鼠）进行间接免疫荧光试验,以分析病毒的单克隆抗体反应谱,又用病毒免疫血清进行交叉中和试验,结果表明,两株病毒均具有双型（Ⅰ型／ＨＴＮ型和Ⅱ型／ＳＥＯ型）反应特征,但Ｒ１７８株基本上属于Ⅰ型。用汉坦病毒Ⅰ￣Ⅳ型型特异性引物进行ＰＣＲ扩增,Ｂ７８株用Ⅰ型和Ⅱ型引物均得到特异性扩增,而Ｒ１７８株虽经重复扩增均未见     

流式细胞术检测汉坦病毒抗原血症的临床应用

在我国,肾综合征出血热(HFRS)是严重威胁人民身体健康乃至生命安全的急性传染病.及时有效的实验室检查对于指导临床尽早实施抗病毒治疗、进行预后评估,从而减轻患者临床症状、改变病程甚至降低死亡率都有极其重要的意义.本研究旨在建立流式细胞术定量检测外周血单个核细胞(PBMC)中汉坦病毒抗原血症,并观察其在HFRS的诊断和预后评价中的作用,现报告如下.     

流式细胞术检测汉坦病毒抗原血症的临床应用

在我国,肾综合征出血热(HFRS)是严重威胁人民身体健康乃至生命安全的急性传染病。及时有效的实验室检查对于指导临床尽早实施抗病毒治疗、进行预后评估,从而减轻患者临床症状、改变病程甚至降低死亡率都有极其重要的意义。本研究旨在建立流式细胞术定量检测外周血单个核细胞(PB