三维电子显微镜方法进展

从生物样品（细胞或大分子）的电镜图象重组其三维结构的方法近年取得了重大进展,这是冷冻电镜样品制备、电镜设备、图象处理和分析方法等几方面进步的综合结果。三维电镜方法的进步和完善,使细胞和学家得以了解在复杂的细胞过程中各种相关细胞器之间的空间关系,而使分子生物学家不仅可以研究那些能够形成二维结晶的样品,并为分析具有重要生物功能但不能形成二维结晶的大分子或分子聚休物的结构提供了一种强大的手段。     

家蚕浓核病毒(山梨株)DNA的电子显微镜研究

最近所分离的家蚕浓核病毒(DNV)山梨株(Y-DNV)与最初在家蚕中发现的DNV伊那株在各种理化性质方面有所不同。从Y-DNV中提取的病毒DNA在琼脂糖凝胶电泳中出现二条带(DNA Ⅰ和Ⅱ)。用限制性内切酶处理这些DNA,其结果也明显不同。为了弄清这些现象,用电子显微镜对这些DNA分子进行研究。通过琼脂糖凝胶电泳分离的DNA Ⅰ和DNA Ⅱ都是双链线状分子,但DNA Ⅰ分子的长度略长。在电子显微镜下,二种DNA的构象没有差异,因此可以肯定DNA Ⅰ和DNAⅡ有不同的碱基序列组成。这在DNV中是罕见的,因为到目前为止所知道的所有DNV都只有4种结构蛋白。基于这种情况,在前一篇论文我们曾推测这些蛋白质可能是来自两种DAV,它们各自具有其中3种或4种结构蛋白。应当指出的是,Y-DNV的衣壳本身是由一种还是由二种结构所组成的还需要进一步的研究给予证实。因为Y-DNV的病毒直径很小,它不可能包含二种DNA(分子量分别为2.1×10~6d,和1.7×10~6d.)所以家蚕Y-DNV很可能是由二种相似但是不相同的DNV所组成的混合物。     

对虾白斑病毒感染的电子显微镜观察及DNA杂交证据

中国大陆养殖的中国对虾从1993年开始至今连年爆发病 毒性流行病,俗称“白斑病”(WSBV),死亡率近100%,造成巨大经济损失。为进一步明确虾病暴发原因,利用电子显微镜技术,对1993年至1998年收集的发病中国对虾组织进行观察,发现病原体为直径(125±76)nm、长约(345±16)nm大小的带包膜的非包涵体型杆状病毒。 经氯化铯密度梯度超速离心技术获得了纯化的病毒核衣壳,大小为(80±13)nm×(380±24)nm。形态学特征与台湾地区发现的白斑杆状病毒(WSBV)相似。利用地高辛标记的WSBV DNA探针对病虾标本及纯化病毒DNA进行斑点杂交检测,均呈阳性反应,而与正常对虾组织无杂交反应。从形态学及分子生物学角度证明WSBV感染是造成中国大陆养殖对虾连年暴发流行病的重要原因。     

家蚕蛹睾丸DNA的电子显微镜观察及其长度测量

本文报导家蚕蛹睾丸DNA的制备和生化分析,并对DNA进行电镜观察,拍摄电镜照片,并利用图形数字转换器和国产109-乙电子计算机测量DNA链段长度。     

阿达玛变换显微图象法测定乳腺癌DNA含量

以吖啶橙为细胞DNA荧光探针,用阿达玛(Hadamard)变换显微图象分析仪和显微荧光光度计分别测定了4例乳腺肿瘤的细胞DNA含量(倍性),并对分析结果进行了比较,二者的分析结果均与病理学诊断结论相吻合.阿达玛变换显微图象分析仪作为一种新的细胞定量分析仪器,其分析结果的准确度可与显微荧光光度计相媲美,而且阿达玛变换显微图象分析仪还具有其独特的优点,如信噪比高、具有同时分析多个细胞和同步扣除背景信号的能力等.     

植物酶细胞化学的电子显微镜研究方法

酶在有机体生命活动中的重要意义是众所周知的。迄今,已知酶的总数接近1000种,其中约有100种可以在光学显微镜水平上,通过组织化学的定位方法得到证实。自从电子显微镜术用于细胞化学研究后,使酶的定位研究     

电子显微镜的诞生

Ernst Ruska,电子显微镜的首创者,1986年获得了诺贝尔物理学奖金,得该项奖金的半数,时年79岁。1931年他创建了第一台透射式电子显微镜,在此后的半个多世纪中,电子显微镜使人们的视野进入一个全新的境界。在金属、病毒、蛋白质和许多生物结构的测绘中发挥了极其重要的作用,诺贝尔奖状誉之为“本世纪最主要发明之一”。从1931年到1986年经历了漫长的55年,他的贡献终于     

显示DNA的改良染色在图象分析系统中的应用

在人体和动物组织中的核酸染色技术应用较为深入，通过图象分析系统对ＤＮＡ含量测定，而提供了可靠的依据。为了能够使ＤＮＡ组化染色技术，更好的适应图象分析系统的定量研究需要，因此我们对显示ＤＮＡ的染色方法进行了实验对照研究。选用在室温下的高浓度盐酸对细胞水解充足作用，而得到较好效果。改进了Ｓｃｈｉｆｆ＇Ｓ染色液配制，减少染色时间和程序，结果证明了染色稳定可靠，色彩对比度较强，适用于图象分析系统的应用。     

突触的电子显微镜研究

突触的概念首先由生理学家Sherrington(1897)提出,自从被应用于形态学后,始终是神经形态学领域内重要的研究课题。神经形态学家利用光学显微镜和神经组织染色技术进行近半世纪的工作,已获得极为丰富而有价值的资料。但由于光学显微镜放大率和辨别力有一定的限度,因此很多更精细的结构不能看到或看不清。近十余年来由于电子显微镜被应用于突触的研究,突触超细微结构的秘密才被更多地揭露。本文就这方面的一些资料分别综述于后。     

细胞图象分析仪的研制及其对细胞DNA含量测定的初探

本文介绍在微机上开发的细胞图象处理分析系统,该系统图象处理功能强,细胞测量参数多,操作简便,实用性强。可用于生物医学图象的处理和分析。     

DNA提取方法的研究进展

样本DNA的提取是PCR反应的关键步骤。本文介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法,如：传统法、螯合树脂法、玻璃粉法、磁珠法、免疫亲和法等,并对各种方法的优缺点进行了综合评述。     

DNA纯化方法的改进

洛斯阿拉莫斯国家实验室(在美国新墨西哥州)的研究人员偶然找到了一种可改善从细胞和染色体内分离、纯化DNA的方法。从前,他们透析粗的DNA溶液时所采用的方法是:把 DNA 放置于一个纤维素袋内,再把该袋浸没于聚乙二醇中除去其中水分,然后用有机溶剂去掉其他杂质(用较多的溶剂除去最初的溶剂)。然而,洛斯阿拉莫斯的研究人员偶然地发现,简单地冷藏一下带有聚乙二醇的纤维袋,便可去掉所有的杂质和水,得到纯的DNA溶液。据该实验室生命科学研究室的 Jon Longmire 称,该方法省时、省钱,且可少用一些有毒的     

显微图象分析仪DNA定量分析中涂片与印片效果比较

显微图象分析仪ＤＮＡ定量分析中涂片与印片效果比较朱建伟田玉旺＊张庆慧＊＊刘爱茹冉玫（山东省中医药研究所病理科,济南２５００１４＊北京军区总院病理科＊＊山东医科大学病理教研室）用显微图像分析仪进行瘤细胞ＤＮＡ定量分析时,染色效果,背景清晰度,对照细胞的...     

质粒DNA制备方法的改进

目的：改进碱裂解制备质粒ＤＮＡ的方法。方法：在小规模制备中,采用７．５ｍｏｌ／Ｌ ＢＨ４Ａｃ中和碱溶液及室温下异丙醇沉淀;在中规模制备中,采用三步沉淀将质粒分离纯化;在大规模制备中,用两步清洗弃去由于量大而不宜除掉的杂物（碎屑物、杂蛋白等）。结果：建立了一套快速、高效、无毒、经济的方法。     

高效的植物DNA提取方法

利用液氮研磨植物幼芽,以苯酚─氯仿─异戊醇─核糖核酸酶法提取了大豆、菜豆、玉米、高梁等几种农作物的总ＤＮＡ。所提取的ＤＮＡ经岛津ＵＶ－２６５紫外分光光度计检测及０．６％的琼脂糖凝胶电泳,结果证明：该方法所提取的植物总ＤＮＡ纯度高,片段长度整齐,约５０ｋｂ左右,符合外源ＤＮＡ导入作物的要求,并且ＤＮＡ收率很高。     

线粒体DNA提取方法的比较

目的：将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线粒体DNA的方法。方法：分离Wistar大鼠小肠上皮细胞,用3种方法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase 8亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA。结果：改进高盐沉淀法线粒体DNA量最多,Triton法最少。OD260／OD280均在1．78-l.85间。将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNA ATPase 8亚基基因序列。结论：改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,产量多的优点,该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序。     

微卫星DNA检测方法的研究

在检测牙鲆的微卫星变异时,对聚丙烯酰胺凝胶的种类、浓度及其银染方法进行了优化.实验总结了一套适用于微卫星检测的方法.该方法具有灵敏度高、凝胶透明度高、对环境污染小、条带清晰和染色时间短等特点,能显著提高检测分辨率,具有广泛的推广价值.     

高等植物线粒体DNA的制备方法

自从六十年代发现线粒体DNA(mtDNA)以来,mtDNA在遗传上的功能引起了广泛的重视。由于线粒体具有自已的基因组,能够自我复制,又能编码一些酶,比如生物氧化链上的一部分酶的亚基就是由线粒体基因编码的,可以推测生物的某些性状的表达可能与mt-DNA有关;另外由于实现线粒体基因组的复制与表达所需的许多酶又是由核基因编码的(如DNA聚合酶,RNA聚合酶、DNA连接酶等),可以推测     

基因转移的DNA病毒方法

在基因治疗中,作为基因转移的载体,迄今几乎都用逆转录病毒,但是在某些情况下,ＤＮＡ病毒作为载体具有明显的优越性,本对腺相关病毒、腺病毒和疱疹病毒作为外源基因载体进行了简要的讨论。