共查询到20条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
采用脉冲电场凝胶电泳法检测H2O2-Fe(3+)体系产生的OH对人淋巴细胞DNA的双链断裂损伤.H2O2-Fe(3+)浓度与DNA双链断裂呈明显量效关系;随OH作用时间延长,细胞DNA双链断裂加重;过氧化氢酶对OH损伤有明显抑制作用.脉冲电场凝胶电泳法可检测到的H2O2和FeCl3引起细胞DNA双链断裂的最低浓度为0.3mmol/L和6μmol/L. 相似文献
2.
三链形成寡聚核苷酸的反基因作用机制 总被引:1,自引:0,他引:1
1957年Felsenfeld等发现一条PolyA链能跟两条PolyU链形成三螺旋 ,这是三链形成寡聚核苷酸 (triple formingoligonucleotide ,TFO)研究的开始[1] 。随着DNA合成技术的进展 ,人们能合成各种序列的寡聚核苷酸。1 987年LeDoan等[2 ] 发现聚嘌呤或聚嘧啶寡聚核苷酸能序列特异地结合于同聚嘌呤 /同聚嘧啶DNA双链的大沟内 ,识别的机制包括形成Hoogsteen和反Hoogsteen氢键。现在常用的包括含 (G、A) ,含 (G、T)或含 (C、T)的 3种TFO以及它们的类似物。… 相似文献
3.
4.
.OH在博莱霉素A5介导的DNA断链反应中的作用 总被引:4,自引:0,他引:4
利用ESR技术研究了博莱霉素A5(BLMA5)、Fe^2+,O2体系中.OH的产生。并用TBA反应检测了该系对DNA的断链作用。以Fe^3+,Cu^+或Cu^2+替换Fe^2+,则体系中无.OH产生,同时也失去对DNA的断链作用;一定浓匠.OH清除剂可完全清除.OH,地对DNA断链影响甚微;还原剂可淬灭体系中的.OH,却能促进DNA的断链反应;SOD可清除体系中的.OH,失活的SOD夫此功能,但两 相似文献
5.
吴开达 《国外医学:分子生物学分册》1994,16(3):113-117
转录因子是一类识别和综合特定DNA调节顺序的核蛋白,能刺激或抑制转录。与人类白血病有关的TF基因是目前研究的热门课题,本对TF基序及髓性白血病TF特征等进行了综述。 相似文献
6.
合成的富含嘌呤或嘧啶的脱氧寡核苷酸可与双链DNA内特定的同聚嘌呤、同聚嘧啶序列结合形成稳定的三螺旋结构(三链DNA)。已在体外及体内证实了在靶基因内形成的局部三链DNA可抑制其转录,这给肿瘤和病毒感染性疾病的治疗提示了新的方向,人们称之为反基因策略。然而,三链DNA的稳定性不够理想和靶序列的选择范围较窄等问题的存在,在一定程度上限制了反基因策略的应用。 相似文献
7.
以人粒巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)、人α8干扰素(hIFN-α8)和分裂细胞核抗原(PCNA)的cDNA定点突变为例,建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒DNA,先用突变引物延伸单链,然后通过PCR扩增得到突变双链DNA。用该方法成功地改造了hGM-CSF基因5′端36个核苷酸中的9个位点、IFN-α8基因5′端39个核苷酸中的9个位点和PCNA基因SD顺序两侧6个和7个核苷酸。与经典的含U单链寡核苷酸定点突变方法相比,本方法突变效率高,并省去了对突变克隆杂交筛选的操作 相似文献
8.
根据α-鹅膏蕈碱(α-amaintin)对真核生物RNA聚合酶的选择性抑制,以氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)作为报道进行体内表达实验,证明T7噬菌体启动子可为真核生物RNA聚合酶Ⅱ所启动。应用建立的竞争性DNA-蛋白质凝胶泳动技术,分别以TATA框、CAAT框、GC框和八核苷权序列(octamer)为竞争性寡核苷酸分子,发现人工合成的T7启动子可能与TFⅡD起始转录因子结合,形成DNA-核蛋白质结 相似文献
9.
我们设计了一种高效的专一位点诱变方法,可从混合体中清除野生型DNA。并将所需突变DNA转入被转化细胞中,如此合成了与一种DNA分子目标序列一致的并带有能产生限制性内切酶位点的插入突变的两条互补的寡核苷酸链。利用野生型DNA分子中的两端各有两个限制性位点的一段目标DNA片段作为模板,上述合成的两种寡核苷酸引物被延伸、富集并分离。被延伸的产物在聚合酶链式反应中又反过来被用作模板,以获得突变的双链DNA片段,此片段通过其两端的限制性位点能很方便地用侧面限制性内切位点克隆到质粒中去。用这些质粒转化的大肠杆菌(Escherichiacoli)细胞可进行大量的分析。通过集落杂交试验、限制性内切酶分析和DNA序列分析,得知这些转化体百分之百含有突变型的DNA序列。 相似文献
10.
为了鉴定人血管紧张肽原(AGT)基因的雌激素调控元件,在AGT基因转录起始点和TATA框之间的一段核苷酸序列与雌激素应答元件共有寡核苷酸序列高度同源,通过电泳迁移率变动分析,证明该DNA序列为雌激素应答元件(HAG ERE)。将带有HAGERE的AGT基因核心启动子同氯霉素乙酰转移酶(CAT)报道基因融合,或将多拷贝HAG ERE同TK核心启动子连接,再与CAT基因融合,构成表达载体,与人雌激素 相似文献
11.
本文旨在研究针对EGFR mRNA的反义寡核苷酸片段对BEL-7404细胞EGFR基因表达及其对细胞生长的影响。合成了互补于EGFR基因5’起始编码区的21聚脱氧寡核苷酸(ODNs)。实验结果显示,3.2umol/L ODNs明显抑制BEL-7404细胞生长,「3H」Tdr掺入抑制试验显示其对细胞DNA合成的抑制作用表现剂量依赖性;密度扫描分析显示ODNs处理6、24h后,肝癌细胞EGFR mRN 相似文献
12.
用脉冲电场凝胶电泳和双标记基因质粒DNA转染技术研究辐射敏感的毛细血管扩张性共济失调症患者皮肤成纤维细胞(AT5BIVA)和正常辐射抗性的人宫颈癌细胞(HeLaS3)DNA双链断裂重接修复率及其忠实性。结果表明γ射线照射诱发DNA双链断裂的产额和重接修复率,在两株细胞间无差别.而AT细胞对导入的限制性内切酶EcoRV产生双链断裂质粒DNA的重接修复忠实性显著低于HelaS3te胞,表明AT细胞易发生DNA错误修复,这很可能就是AT细胞高度辐射敏感性的主要原因。 相似文献
13.
利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤 总被引:2,自引:1,他引:1
DNA损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要。采用分子克隆技术,将报告基因—绿色荧光蛋白(GFP)置于SV40基本启动子调控下,构建成对照载体pSV-GFP。在SV40基本启动子上游插入寡核苷酸P53RE,构建成示踪载体p53RE-GFP。转染NIH3T3细胞,以GFP示踪细胞内源性P53的转录激活活性。紫外线照射或H2O2处理转化细胞使DNA损伤,诱导细胞内源性P53的表达。用激光扫描共聚焦成像系统(LSCIS)对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像,并测定GFP经488nm激发后发出的绿色荧光光密度,验证GFP示踪P53的特异性。p53RE-GFP转化细胞3T3-REG经紫外线照射或H2O2处理后,GFP的表达增高,处理后1hr光密度即达到最高水平,随后逐渐降低。血清“饥饿”—非DNA损伤处理的3T3-REG细胞,以及经紫外和H2O2处理的对照载体pSV-GFP转化细胞3T3-SVG,GFP的表达无明显增强。实验表明:GFP示踪内源性P53转录激活活性用于检测DNA损伤有很高的灵敏度和特异性,适宜推广应用。 相似文献
14.
15.
ProcNatlAcadSciUSA ,2 0 0 2 ,99:1 330 2~ 1 330 6早期研究表明番茄果实的梨形性状由位于第二染色体的一个隐性基因ovate所控制 ,ovate基因位于分子标记TG645附近 ,以此标记为探针筛选番茄BAC文库将该基因定位于一个长为 1 0 5kb的DNA片段内 ,进一步的分子标记定位表明该基因在含有 8个ORF的 55kbDNA内。通过PCR扩增了圆形番茄这一区域DNA并进行测序 ,结果表明突变体的ORF6中有三处发生了突变。ORF6由两个外显子和 1个内含子组成 ,有一个点突变和一个 2bp的插入或缺失突变… 相似文献
16.
用显微分光光度术测定莲子叶细胞中淀粉体DNA含量 总被引:4,自引:0,他引:4
用显微分光光度术测定莲子叶细胞中淀粉体DNA含量孙德兰赵玉锦苏秀珍(中国科学院植物研究所,北京100093)MICROPHOTOMETRICDETERMINATIONOFAMYLOPLASTDNACONTENTINCOTY┐LEDONCELLOFL... 相似文献
17.
鱼类LZF—I DNA指纹探针的设备 总被引:5,自引:0,他引:5
利用Oligo 1000DNA合成仪合成了长庶45bp的寡核苷酸单链,经纯化后用同位素γ-^32P-ATP作5‘末端票房后,制备鱼类LZF-I DNA指纹探针。通过对鱼类的九体实验,亲子鉴定实验,组织细胞的稳定性实验和鱼类种类的适用范围实验后,测得:(1)LZF-I DNA指纹探针属多位点寡核苷酸探针;(2)LZF-I DNA指纹殖在鱼类种群中的临别机率为9.23-10^016;(3)LZF-I 相似文献
18.
花生种子高纯度DNA的提取(简报) 总被引:2,自引:0,他引:2
花生种子高纯度DNA的提取(简报)王艳,何军贤,傅家瑞(中山大学生命科学学院,广州50275)关键词花生;种子;DNA;十六烷基三甲基溴化铵RAPIDANDEFFICIENTPURIFICATIONOFDNAFROMPEANUT(ARACHISHYP... 相似文献
19.
抗真菌药──瞄准着DNA拓扑异构酶徐钤(第一军医大学生化教研室,广州510515)关键词抗真菌药,DNA拓扑异构酶1、DNA拓扑异构酶的功能DNA拓扑异构酶(DNAtopoisomerase,TOPO)能改变(或调整)DNA的拓扑学结构。TOPOs可... 相似文献
20.
人组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)组合突变体FrGGl在CHO细胞中的… 总被引:3,自引:0,他引:3
为了得到t-PA组合突体FrGGl在CHO细胞中的高效表达,将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子(enhancer)去除,构建了FrGGl真核表达质粒pZLFrGGI。酶切线化后,采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr)。氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞,混合加压,挑选克隆,在1×10^-7mol/LMTX压力下,获得表达水平达1500~2500IU/1 相似文献