抗SEA鸡卵黄抗体用于血吸虫循环抗原检测的初步研究

目的:探讨抗可溶性虫卵抗原(SEA)鸡卵黄抗体(Immunoglobulin Y,IgY)用于血吸虫循环抗原检测的可行性。方法:以纯化的鸡抗SEA卵黄抗体为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B进行双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急、慢性血吸虫病病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA)法做比较。结果:S-ELISA法测得SEA浓度(y)与A450值(x)呈明显的正相关(r=0.9481,y=459.22x-108.14)。S-ELISA法检测急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100%,慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.40%,健康人的特异性为96%。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:S-ELISA可用于血吸虫病的免疫诊断。     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

猪细小病毒NS1抗原表位的真核表达及ELISA方法的建立

以猪细小病毒NS1抗原表位的真核表达及ELISA建立为目的,以猪细小病毒基因组DNA为模板,扩增获得PPVNS1主要抗原表位基因,将其插入到真核表达载体pPICZα-A中,获得重组质粒pPICZα-A-NS1。电转化后将重组毕赤酵母菌株诱导表达,SDS-PAGE检测证实重组蛋白获得了高效表达,Western blot实验表明表达产物具有良好的反应原性。将纯化后的重组蛋白包被酶标板,经棋盘法优化,初步建立了检测猪细小病毒特异性抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原最佳包被浓度为1.9μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,阳性判断标准定为OD待检血清>0.4且OD待检血清/OD标准阴性值>2.0。用该方法对猪血清样品进行检测,结果显示本方法与HI试验的符合率达91.2%,与国外同类试剂盒的符合率为92.1%,该间接ELISA方法特异性强、敏感性高,可用于猪细小病毒病感染抗体的检测。     

免疫酶标(ELISA)法检测宫颈癌妇女阴道分泌物中HSV抗体的研究

应用免疫酶标ELISA法检测宫颈癌阴道分泌物中HSV抗体,其阳性率为85.7％,HSV-2抗体滴度的几何均值为57.98、与非宫颈癌组妇女比较,阳性率及抗体滴度的几何均值均存在显著差异,提示宫颈癌患者生殖道HSV的高感染率。     

化学发光微粒子免疫法和梅毒螺旋体颗粒凝集试验检测梅毒抗体的比较

目的评价化学发光微粒子免疫法（chemiluminescence microparticle immunoassay, CMIA）检测临床血清标本梅毒螺旋体抗体的敏感性和特异性。方法用梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TVeponema Pallidum particie agglutination test,TPPA）法作为对照标准,采用CMIA法检测2012年11月到12月1200例住院患者的血清标本,并用卡方检验评价两种检测方法对同一个样本的化验结果的一致性。结果1200例血清标本中用CMIA法检出阳性率为11.3%,TPPA法检出阳性率为10. 9% ,以TPPA为标准,CMIA法敏感性为96. 9%,特异性为99. 2%,其中CMIA法检测血清S/CO值〉 4. 00的110例,用TPPA确认107例阳性,阳性预测值（PPV）为97.3%;CMIA法S/C0值在1.0-9.0,TPPA可出现阴性结果。结论CMIA法可替代TPPA法进行梅毒螺旋体抗体检测,对于CMIA法检测S/C0值1. 0-4.0的需进一步复检。     

抗中性粒细胞胞浆抗体、抗核抗体联合检测对类风湿关节炎 的诊断价值

目的:探讨抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)与抗核抗体(ANA)联合检测对类风湿关节炎的临床意义。方法:采用IIF法对82例RA患者(RA组)、74例非RA自身免疫疾病患者(非RA组)和52例健康体检者(正常对照组)的血清ANCA和ANA谱进行了检测分析,并用ELISA法进行抗丝氨酸蛋白酶3(PR3)、抗髓过氧化物酶(MPO)、ANA谱的定量检测。结果:RA组82例患者中,64例ANCA阳性,阳性率为78.08%,其中核周型(PANCA)37例,阳性率为45.1%,胞浆型(CANCA)27例,阳性率为32.9%;非RA组74例患者中有7例ANCA阳性率分别为9.4%;正常对照组50例中没有一例ANCA阳性。利用Elisa法对患者血清进行检测,分别能够特异的检测到PR3、MPO、抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体)、抗ss-A等抗体、抗SS-A抗体、抗PM-SCL抗体的存在。结论:联合ANCA、ANA检测有助于提高类风湿关节炎的诊断。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的 纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测.方法 采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG( Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体( rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA).结果 金黄地鼠血清IgG纯度达95％;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1(:)64;兔抗金黄地鼠IgG -HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1:2000.结论 高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件.     

抗SmD1抗体对系统性红斑狼疮诊断的临床意义

目的探讨抗SmD1抗体的测定对系统性红斑狼疮(SLE)诊断的临床意义。方法用免疫学方法分别检测SLE患者90例、非SLE病例对照组患者100例及健康对照组患者70例血清中的自身抗体。抗SmD1抗体的检测用ELISA方法;抗Sm抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗核小体抗体(ANuA)的检测用免疫印迹法。结果 SLE组患者血清中抗SmD1抗体阳性率为75.6%;抗ANuA抗体阳性率为56.7%;抗Sm抗体的阳性率为24.4%;抗dsDNA抗体阳性率为47.8%。SmD1抗体阳性率明显高于ANuA抗体、Sm抗体及dsDNA抗体,差异有统计学意义(P0.05),且抗SmD1抗体的特异性为98.2%。结论与传统的检测指标比较,抗SmD1抗体具有较高的敏感性和特异性,可作为诊断SLE的一项重要的特异性检测指标。     

重症肌无力患者抗乙酰胆碱受体抗体的测定及意义

用ELISA法对56例重症肌无力(MG)患者治疗前后的血清乙酰胆碱受体(AchR)抗体进行了检测。检测结果为MG患者治疗前后的血清AchR抗体阳性率46.4%。而且发病年龄越大,患者体内AchR抗体阳性率越高。患者患病时间越长体内AchR抗体含量降低。伴发胸腺瘤的患者AchR抗体阳性率明显高于胸腺正常者,全身型MG患者AchR抗体检测阳性率高于眼肌型患者。     

用ELISA试验通过平行线定量法测定百日咳抗体

<正> 自从创立用酶联抗体法(ELISA法)测定抗体的方法以来,对某些感染症,诸如轮状病毒,风疹、淋菌等病原体与抗体的诊断用试剂盒已有出售。ELISA法就是把抗原抗体反应与酶反应结合起来,用酶与底物反应生成物的浓度来表示样品中被检物含量的方法。被检物浓度可由光密度值(以下简称OD值)求得。     

应用抗体捕捉ELISA法测定病毒特异性IgM抗体

本文以测定麻疹IgM抗体为模型,研究了应用抗体捕捉酶联免疫吸附法(Antibody capture ELISA简称ACELISA)测定病毒性疾病特异性IgM抗体的实验条件,结果表明;用于包被的抗μ链抗体、抗原,检测抗体的剂量对所测得的标本OD值都有不同程度的影响,其中以抗原的影响最大,不同株单克隆抗体(McAb)作检测抗体效果也有差别,最佳株与多克隆抗体(PcAb)相似,以本方法测定麻疹IgM抗体的敏感性和特异性很高,并不受类风湿因子的干扰。     

广西地区野鼠戊型肝炎病毒感染情况调查

从广西壮族自治区5个市采集256份野鼠肝脏和对应的血清211份,采用HEV抗体(HEV-Ab)酶联免疫试剂盒(双抗原夹心法)对血清样本进行抗-HEV检测,并对不同地区HEV抗体阳性率进行χ2检验。采用HEV核酸荧光PCR试剂盒对肝脏样本进行HEV核酸检测。结果显示,211份野鼠血清抗-HEV的抗体阳性率为6.6%,其中百色市的抗体阳性率最高,为14.1%,其他地区抗体阳性率均在10%以下。256份野鼠肝脏中未检测到HEV核酸。由此可见,广西壮族自治区5个市的野鼠中存在HEV感染,但其是否为HEV的自然宿主及在戊型肝炎传播中起何作用需进一步研究。     

多肽抗体谱免疫印迹法检测ENA抗体的临床应用

本文报道应用多肽抗体谱印迹法检测风湿性疾病患者的ＥＮＡ抗体,该法一次可检测７种抗体。应用本法检测ＳＬＥ８５例,其Ｓｍ抗体阳性率为２０．０％,ｕ１－ＲＮＰ抗体为４１．１％,ＳＳ－Ａ抗体为１０．５％ＳＳ－Ｂ抗体为３．５％,抗核糖体为７．０％。检测ＤＬＥ６例,其山ｕ１－ＲＮＰ抗体阳性率为３３．０％。检测ＰＭ／ＤＭ１５例,其ｕ１－ＲＮＰ抗体阳性率为１３．０％,Ｊｏ－１抗体为１４．０％。检测ＲＡ４８例,其ｕ１－ＲＮＰ抗体的阳性率为３３．３％。检测ＳＳ２１例,其ＳＳ－Ａ抗体阳性率为４３．０％,ＳＳ－Ｂ抗体为３８．０％,检测ＰＳＳ９例,其Ｓｃｌ－７０抗体阳性率为２２．０％。检测ＭＣＴＤ１０例,其ｕ１－ＲＮＰ抗体阳性率为５０．０％。健康人对照１００例,７种抗体均为阴性。显示应用多肽抗体谱印迹法检测结果与国内其它方法所测得结果基本一致,但可检测的抗体种类多于其它方法。     

联合检测PAIg与CD41+淋巴样小巨核对ITP及MDS鉴别诊断的意义

目的:探讨血小板相关抗体(PAIg)及CD41+淋巴样小巨核在特发性血小板减少性紫癜(ITP)中的诊断价值,以及对ITP与骨髓增生异常综合征(MDS)的鉴别诊断价值.方法:研究血小板相关抗体的样本取自两组患者.一组为ITP患者,另一组为MDS患者.在CD41患者检测中,ITP患者组与MDS患者组进行了比较.ELISA方法用来检测血小板相关抗体的表达,包括PAIgA、PAIgM和PAIgG.CD41阳性淋巴样小巨核的检测采用生物素酶连亲和-碱性磷酸酶标法.抗CD41抗体是单克隆抗体.数据统计分析使用卡方检验.结果:血小板相关抗体检测中,ITP组49例患者的PAIg检出阳性率为81.6%,MDS组9例患者PAIg阳性率为33.3%,二者比较有显著差异,结果具有统计学意义.酶联免疫细胞化学检测ITP组和MDS组淋巴样小巨核CD41阳性表达显示,ITP组阳性率为5%(1/20),而MDS组阳性率为58.3%(21/36).结论:血小板相关抗体(PAIg)及CD41+淋巴样小巨核的表达可作为一项有价值的指标帮助诊断和鉴别诊断ITP患者;同时对判断ITP患者的效果及预后,以及提高ITP的诊断率具有重要的价值.并且CD41+淋巴样小巨核可作为ITP与MDS的鉴别诊断依据.     

EB病毒抗体和DNA联合检测可提高儿童传染性单核细胞增多症的诊断灵敏度

目的评估EB病毒抗体VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-1-IgG及EBV-DNA载量检测在儿童传染性单核细胞增多症(传单)中的诊断意义。方法用ELISA方法检测70例传单患儿和25例健康儿童血清中EBV四种抗体及PCR荧光定量法检测外周血单个核细胞EBV-DNA载量。结果传单患儿组EBV-DNA的阳性率为87.14%(61/70),对照组阳性率为8.00%(2/25),传单组与对照组EBV-DNA的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。EBV抗体检测中,传单组的VCA-IgM阳性率最高,达91.43%(64/70),对照组VCA-IgM全部阴性。传单组EB病毒VCA-IgM和EBV-DNA联合检测的阳性率97.1%。结论 EBV抗体和EBV-DNA载量检测对儿童传单的诊断有极高的价值,尤其是VCA-IgM抗体和EBV-DNA联合检测,可提高儿童传单的临床诊断的敏感性。     

甲胎蛋白的酶联免疫吸附分析法

本文介绍用酶联免疫吸附分析法,测定人体血清甲胎蛋白的技术。采用了双抗体夹心法,以聚苯乙烯管为包盖抗体的支持物,用亲和层析提纯的马抗甲胎蛋白抗体,与辣根过氧化物酶交联制得酶标抗体,以邻苯二胺为底物,显色后进行定量分析测定,可获得较高的敏感度(5毫微克/毫升以下)。本文还对影响实验的一些因素及这项技术的发展前景进行了讨论。     

甲胎蛋白的酶联免疫吸附分析法

本文介绍用酶联免疫吸附分析法,测定人体血清甲胎蛋白的技术。采用了双抗体夹心法,以聚苯乙烯管为包盖抗体的支持物,用亲和层析提纯的马抗甲胎蛋白抗体,与辣根过氧化物酶交联制得酶标抗体,以邻苯二胺为底物,显色后进行定量分析测定,可获得较高的敏感度(5毫微克/毫升以下)。本文还对影响实验的一些因素及这项技术的发展前景进行了讨论。     

应用ELISA法检测人群中幽门螺杆菌抗体及血清流行病学分析

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对307例自然人群和228例胃病患者的血清进行了抗幽门螺杆菌(HP)抗体的检测,同时与尿素酶试验和涂片镜检结果比较。结果:自然人群中HP抗体阳性率为14.66％,不同性别、职业、民族间HP抗体的阳性率无差异。各年龄组间HP抗体阳性率有随年龄增加而升高趋势。胃病患者HP抗体阳性率为61.41％,GMT为1:430.53,明显高于自然人群的14.66％,GMT 1:15783,两者差异显著。ELISA法与尿素酶试验和涂片镜检结果存在相关关系。认为ELISA法结果可靠,可用于人群普查及HP感染的诊断。     

合肥市蜀山区206例艾滋病高危人群HIV、HCV感染情况调查

目的了解合肥市蜀山区艾滋病高危人群中人类免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染情况,为艾滋病高危人群疾病防治工作提供依据。方法采集合肥市蜀山区206例艾滋病高危人群血清样本,分别运用金标法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行HIV抗体、HCV抗体检测。HIV抗体筛查结果阳性或一阴一阳标本再经蛋白印迹法(WB)确证阳性为最终结果,并对结果和不同人群、年龄、性别的感染情况进行统计分析。结果在206份血清样本中检出HIV抗体阳性17例,阳性率为8.73%;检出HCV抗体阳性21例,阳性率10.19%。合并感染病例2例,占0.97%。结论检测结果提示,在高危人群中存在HIV/HCV流行和传播的风险,因此应持续加强高危人群的监测,有效阻止艾滋病和丙型肝炎的流行和蔓延。     

麻疹疑似病例血清学与病原学检测结果比较

目的 分析麻疹疑似病例血清学和病原学的检测结果,比较两种检测方法,为麻疹的早期诊断提供实验室支持。方法 同时采集2017‒2018年北京市海淀区麻疹疑似病例的血清和咽拭子标本,用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清中的麻疹IgM抗体,用荧光定量PCR（Real-time PCR）方法检测咽拭子标本中的麻疹病毒核酸。结果 血清IgM抗体检测阳性率为11.54%,Real-time PCR法检测阳性率为44.23%,其检测阳性率显著高于血清检测阳性率,差异有统计学意义（2=13.82,P0.05）。血清学检测敏感性为25.00%,病原学检测敏感性为95.83%,两种检测方法的阳性符合率为21.74%,阴性符合率为96.55%,总符合率为63.46%。ELISA和Real-time PCR法对有免疫史的病例检测阳性率分别为18.75%和37.50%,两种检测方法的阳性率差异无统计学意义（2=1.39,P>0.05）;对无免疫史或免疫史不详病例检测的阳性率分别为8.30%和47.20%,两种检测方法的阳性率差异有统计学意义（2=13.57,P<0.01）。结论 Real-time PCR方法检测的阳性率和灵敏度均高于血清学检测方法,可以在日常检测工作中作为常规方法推广,无论采用哪种检测方法,应在出疹3 d内采集样本。