天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

红花菜豆凝集素的糖结合专一性

经肼解、Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－２柱层析、ＮａＢ＾３Ｈ４和ＮａＢＨ４还原,制备各种来源的、氚标记在还原末端的、还原末端为Ｎ－乙酰氨基葡萄糖醇的混合寡糖,经Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－４凝胶柱分离,以及用糖苷酶酶解,制备了各种不同类型的氚标记的寡糖。这些寡糖在固定化的ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上亲和层析,根据各种类型寡糖在ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上的层析行为,确定红花菜豆（矮生红花变种）凝集素（ＰＣＬ）的     

天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

坛紫菜凝集素的糖结合专一性和细胞凝集作用

坛紫菜的磷酸盐缓冲液浸取液,经硫酸铵沉淀和DEAE－Sepharose,SephadexG-100二步层析纯化,获得纯化的坛紫菜凝集素（PHL）。该凝集素能与3种单糖（阿拉伯糖,半乳糖,木糖）及麦芽糖专一性结合,其中与麦芽糖结合最强。细胞凝集实验结果显示,PHL能凝集兔,绵羊及鸡红细胞而不能凝集鸭,鸽子及人血红细胞,PHL还能凝集海洋微藻－绿色巴夫藻和淡水微藻－蛋白核小球藻,它们的凝集活性与藻细胞密度有关。不同状态的细菌和酵母细胞对PHL反应不同,表明随着细胞状态的改变,细胞表面的凝集素受体也随之发生变化。     

结晶麦胚凝集素的制备及其性质研究

<正> 1963年,Aub 等人发现麦胚脂酶具有凝集肿瘤细胞能力。Nagata等人用离子交换色谱法由麦胚脂酶制备出麦胚凝集素,而后经两次结晶,获得结晶麦胚凝集素(Crystalline wheat germ ag glutinin,CWGA)。本文采用亲和层析法由麦胚直接制得CWGA。CWGA经7.5％PAGE检测为一条谱带、SDS-PAGE检测表现分子量18,6kD,其等电点pH6.2,对2％A型人红细胞最低凝集浓度为4μg/mL。     

鸡胚肝乳糖凝集素专一性的研究——SEM-ARG技术的应用

本文利用扫描电镜放射自显影(SEM-ARG)技术研究鸡胚肝凝集素的专一性。该凝集素经乳糖尿素液抽提和离心分离后,再用DE-52纤维素柱和蓝色葡聚糖柱进一步纯化。纯化后的鸡胚肝凝集素用 ¹²⁵Ⅰ标记。以标记的 ¹²⁵Ⅰ-凝集素为探针再标记来自不同组织的细胞。标记的细胞经过放射自显影,用扫描电镜对细胞表面凝集素受体的位点进行直接观察。实验结果表明鸡胚肝凝集素对细胞的凝集作用具有相对的专一性。     

半夏凝集素的糖类结合专一性

半夏是一种多用途的中草药。从其块茎鲜汁中分得的结晶蛋白——半夏蛋白——能凝集兔红细胞叫,很可能是对某种糖专一结合的凝集素。为此我们采用了琼脂糖双扩散以及亲和层析等技术对半夏中血凝活性成分和各种糖类结合的专一性进行了探讨。用0.025M巴比妥-HCl缓冲液,pH8.6,或pH8.8的Tris-HCl缓冲液配成的     

实验室制备的麦胚凝集素、大豆凝集素和它们的荧光标记物

麦胚凝集素(WGA)和大鼠凝集素(SBA)能特异地和一些糖或糖苷结合,已被广泛地应用于检测生物样品中是否含有某些糖类。上述两种凝集素与异硫氰荧光素结合形成荧光标记物(F-WGA、F-SBA)后能藉荧光显微镜直接观察上述糖残基在细胞中的分布。然而目前这两种药品大多依靠进口,价格昂贵(10毫克WGA或SBA约孺人民币260—300元),双常常难于及时到货。我们工作中需要量较大,因此自己制备。我们按照金德标教授(The Rockege llen Univensity,New York)提供的并參照Vretblad等的亲和层析步骤方法(B.B.A434:169-176,1976),从麦胚和东北大豆中提取凝集素。产品经聚丙烯酰胺凝胶电脉(pH4.0-     

麦胚凝集素对红细胞膜阴离子通透性的影响

本文研究了ＷＧＡ通过红细胞骨架对Ｂａｎｄ３主要功能－阴离子通透性的影响。采用ＮＯ３＾－测定法和ＮＨ４Ｃｌ等渗膨胀法,发现ＷＧＡ作用使膜阴离子通透性降低,并且这种作用随ＷＧＡ浓度增加而明显。在特定条件下,高浓度ＷＧＡ会引起部分红细胞明显变形。并由此改变ＷＧＡ对膜阴离子通透性效应,此外,还通过ＮＧＡ对ＷＧＡ作用的恢复效应及对红细胞渗和渗透脆性的研究,进一步探讨了ＷＧＡ的作用机制。     

麦胚凝集素对红细胞膜阴离子通透性的影响

本文研究了WGA通过红细胞骨架对Band 3主要功能——阴离子通透性的影响。采用NO_2~-测定法和NH_4Cl等渗膨胀法,发现WGA作用使膜阴离子通透性降低,并且这种作用随WGA浓度增加而愈加明显。在特定条件下,高浓度WGA会引起部分红细胞明显变形。并由此改变WGA对膜阴离子通透性效应。此外,还通过NGA对WGA作用的恢复效应及对红细胞渗透脆性的研究,进一步探讨了WGA的作用机制。     

半夏凝集素的糖类结合专一性

半夏是一种多用途的中草药。从其块茎鲜汁中分得的结晶蛋白——半夏蛋白——能凝集兔红细胞,很可能是对某种糖专一结合的凝集素。为此我们采用了琼脂糖双扩散以及亲和层析等技术对半夏中血凝活性成分和各种糖类结合的专一性进行了探讨。     

麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白A构象变化研究

为进一步验证麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白Ａ空间构象的变化,本文用傅里叶变换红外技术,定量测定了麦胚凝集素作用下,溶液血型糖蛋白Ａ和脂蛋白体膜血型糖蛋白Ａ的二级结构的改变,发现麦胚凝集素结合于血型糖蛋白Ａ导致血型糖蛋白Ａα—螺旋减少,β—结构增加,麦胚凝集素的抑制剂Ｎ—乙酰葡萄糖胺对麦胚凝集素诱导的血型糖蛋白Ａ二级结构的改变有抑制作用。本文同时用扫描隧道显微术直接观察了麦胚凝集素结合前后膜血型糖蛋白Ａ分子形态的变化。     

麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白A构象变化研究

为进一步验证麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白Ａ空间构象的变化,本文用傅里叶变换红外技术,定量测定了麦胚凝集素作用下,溶液血型糖蛋白Ａ和脂蛋白体膜血型糖蛋白Ａ的二级结构的改变,发现麦胚凝集素结合于血型糖蛋白Ａ导致血型糖蛋白Ａα—螺旋减少,β—结构增加,麦胚凝集素的抑制剂Ｎ—乙酰葡萄糖胺对麦胚凝集素诱导的血型糖蛋白Ａ二级结构的改变有抑制作用。本文同时用扫描隧道显微术直接观察了麦胚凝集素结合前后膜血型糖蛋白Ａ分子形态的变化。     

真菌多糖与花生凝集素的相互作用

通过加入虫草多糖、树舌多糖、灵芝多糖、榆耳多糖、银耳多糖、小刺猴头菌多糖、黑木耳多糖和云芝多糖8种真菌多糖,观察真菌多糖对PNA与血细胞表面受体结合的影响。试验结果表明:小刺猴头菌多糖具有较强的与PNA的结合能力,这可能是由于小刺猴头菌多糖的空间结构或其上的半乳糖的连接方式、空间位置更适合与PNA结合的缘故。     

凝集素碎片的糖结合活性

用固相合成法分别合成了羊蹄甲、小扁豆和欧洲百脉根３种植物凝集素中的某些糖结合活性部位的肽段。用毛细管电泳法观察到这些肽段和拟糖蛋白以及寡糖之间有一定的结合能力,而且表现出相对的专一性。     

BglⅠ限制性核酸内切酶与环状pBR322-DNA专一性和非专一性相互作用的动力学及热力学

 本文选择限制性核酸内切酶BglⅠ和pBR322-DNA为试验系统,用酶促反应的动力学和热力学方法来研究内切酶对环状DNA分子的专一性和非专一性结合及切割过程,求得了各限制位点的切割速度k及活化能E,各限制位点催化速度常数k_c,酶同限制位点专一性结合的平衡常数k_S非专一性结合的平衡常数k_N及其热力学参数△H,△S。研究表明:不论底物的构型如何(线状还是环状),内切酶都以相似的动力学和热力过程对其进行结合与切割。     

木菠萝凝集素结合部位糖的特异性

用定量免疫沉淀法和定量免疫沉淀抑制法研究了从木菠萝(Arthrocarpus integrifolia)种子提取的凝集素(jacalin)结合部位糖的特异性。Jacalin最强烈地沉淀含有DGalβ1→3DGalNAc结构的无活性抗冻糖蛋白,不同程度非特异地沉淀各种血型物质。研究发现凝集素结合部位对DGalβ→3DGalNAc有最高特异性。最强抑制剂是DGalβ1→3DGalNAcal→φNO_2,其抑制活性分别比DGalNAc和DGal高380倍和1000倍。对于各种甲基化或对硝基酚化的糖苷以及寡糖,除methylaDGalNAc_f外,仅α-构型表现出抑制活性,所有β-构型的糖苷均无抑制活性,jacalin结合部位对糖的结合是构型依赖性的。