蛇足石杉内生细菌多样性北大核心CSCD

【目的】探索国家二级保护野生药用植物蛇足石杉内生细菌的物种和生理活性多样性,发现并收集药用植物内生菌资源。【方法】分别从四川和福建等不同生态环境采集蛇足石杉植株,运用纯培养手段,对经过表面消毒处理的蛇足石杉样品进行内生菌的分离、培养;根据菌株16S r RNA基因信息,计算从蛇足石杉不同区系分离获得的内生细菌间的Jaccard指数、多样性指数、优势度指数与均匀度指数等,分析内生菌物种多样性;应用6种筛选模型对分离得到的内生菌进行生理活性测定,初步评价蛇足石杉内生细菌的生理活性多样性和药用价值。【结果】从12份蛇足石杉植物样品中分离获得356株内生菌菌株,菌株16S r RNA基因序列信息显示,分离得到的蛇足石杉内生细菌隶属于放线菌门、厚壁菌门和变形菌门等3个门的26个科、41个属,来源于蛇足石杉地上和地下部位的菌株数目、多样性指数等无明显差异。从中发现了分属于拟无枝酸菌属(Amycolatopsis)、Angustibacter、节杆菌属(Arthrobacter)、短小杆菌属(Curtobacterium)、Frondihabitans、Glaciihabitans、Jatrophihabitans、Luteimicrobium、Massilia、Naumannella和Tardiphaga等11个属的11个潜在新物种,以及皮生球菌科(Dermacoccaceae)的1个新属。在抗菌活性筛选中,356株纯培养物抗粪肠球菌、抗肺炎克雷伯菌、抗耻垢分枝杆菌以及抗水稻白叶枯病菌的阳性率分别是9.0%、1.4%、2.2%、0.8%;抑制SS04生长的降血脂药物筛选模型上的阳性率是8.1%;抗HIV-1的初筛阳性率为4.5%。共计74株菌在一个或多个筛选模型中显示出活性,初筛总阳性率为20.8%。【结论】蛇足石杉内生细菌具有丰富的物种多样性和生理活性多样性,是进一步发掘新型天然产物的理想菌种资源。     

湘西地区蛇足石杉内生真菌的分离

采集不同生境的药用植物蛇足石杉,运用不同灭菌方法处理外植体,并用PDA平板培养基及孟加拉红培养基进行内生真菌的分离纯化.经过几种灭菌方法的摸索和比较研究,发现蛇足石杉外植体的灭菌十分困难(尤其是其茎部),难以在保持植物鲜活状态下达到一次彻底灭菌,有必要二次灭菌.通过二次灭菌分离得到的9株内生真菌中,来自蛇足石杉茎部的6株,来自叶片的3株.蛇足石杉的9株内生真菌在平板培养时生长极其缓慢,仅一株可在培养时产生孢子.     

湘西油茶树群落中蛇足石杉种群的水平分布格局

采用方差,均值法、负二项参数K、Cassie指数、丛生指数、平均拥挤度、聚块性指数、Green指数、泊松分布、负二项分布及奈曼分布的X2理论拟合,研究了湘西油茶树群落中蛇足石杉种群的分布格局,结果表明湘西油茶树群落中蛇足石衫种群的分布格局类型呈集群分布,且符合n=1的奈曼分布,此格局的形成主要与其繁殖的生物学特性、特定的环境条件及共生真菌等因素密切相关．     

武陵地区蛇足石杉不同居群形态变异分析

为了从数量上分析蛇足石杉(Huperzia serrata)天然居群表型性状在居群间和居群内的变异,对分布在武陵地区的15个蛇足石杉天然居群的9个表型性状进行了测量和比较分析.结果表明:顶叶长、顶叶宽、顶叶长宽比、茎基径、基叶长、基叶长宽比、株高、节间长在居群间表现显著差异;聚类分析和主成分分析显示,15个居群可分为3类,顶叶长、顶叶长宽比、茎基径、株高、节间长这5个性状是反映表型差异的主要因素.     

浙江及邻近地区蛇足石杉依存环境的初步研究

对浙江及邻近地区产的蛇足石杉(Huperzia serratct)7个种群的自然环境进行野外观察,测定了土壤含水量、电导率、有机质含量、pH值,植株和土壤中K、Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Mn、Na、A1、Pb、Cd 11种元素的含量,以及植株中石杉碱甲(HupA)含量。结果表明,蛇足石杉种群多分布于海拔350-1700m的山地密林下或沟谷阴湿土中,郁闭度、年均降雨量、空气相对湿度均较大：环境中土壤含水量为10％-30％,pH值4．57—5．31,电导率0．061—0．385mscm^-1,有机质含量6．18％-9．75％;蛇足石杉对K、Ca、Zn和Na的需要程度较高,对Pb、Cu、Cd3种重金属元素的富集能力较强,在人工栽培中应注意协调各元素的合理配给：蛇足石杉较适宜生长的环境条件为：土壤电导率以及pH值相对较低;郁闭度高,年均降雨量和空气相对湿度较大。基于土壤理化性质,对7个种群分布点进行除趋势对应分析,表明石杉碱甲含量高的磐安种群分布点具有特殊性,提示环境条件对蛇足石杉中HupA含量有较大的影响。     

药用植物蛇足石杉的化学成分与药理活性研究进展

综述了蛇足石杉植物在化学成分、药理作用、临床应用等方面的研究进展。并对该植物的发展前景进行了展望。     

蛇足石杉原叶体的培养及孢子体的诱导

以蛇足石杉孢子囊为材料培养得到蛇足石杉原叶体,进一步对原叶体进行增殖培养并诱导产生蛇足石杉孢子体。结果表明,适合蛇足石杉原叶体增殖的培养基是无激素的MS培养基,在该培养基上培养60d,原叶体的增殖倍数达到131．1;较高浓度的外源激素对原叶体的增殖有抑制作用,而低浓度的外源激素对原叶体的增殖影响不大;原叶体在无激素培养基上培养90d,孢子体的诱导频率为4．0％;通过HPLC检测蛇足石杉原叶体中石杉碱甲的含量为0．0059％,是野生孢子体中含量的0．25倍。     

广西大明山自然保护区蛇足石杉种群生命表及生存分析

为进一步探讨蛇足石杉濒危的机制, 以广西大明山自然保护区蛇足石杉种群为调查对象, 采用分段匀滑技术编制蛇足石杉种群静态生命表, 进行种群生存分析, 通过绘制亏损率曲线、存活曲线、死亡率曲线、生存函数曲线, 分析种群数量及动态变化。结果表明: 该蛇足石杉种群存活曲线趋于Deevey-Ⅱ型, 种群生长过程中在第Ⅳ龄级存在一个死亡高峰。说明在自然保护的情况下蛇足石杉种群的生存状况仍然严峻, 需适当进行人工保护并加强资源调查, 对优良种质进行异地保护。     

蛇足石杉内生真菌g5的乙酰胆碱酯酶抑制活性初步研究

为了初步研究蛇足石杉内生真菌g5发酵产物的乙酰胆碱酯酶(ACHE)抑制动力学以及对该株真菌做初步形态学鉴定,采用DTNB显色法检测g5发酵液醇提物抑制AChE活性的效果,并采用玻片培养法进行真菌鉴定.结果发现g5菌株属于半知菌目丛梗孢科青霉属;其发酵液醇提物对AChE的抑制作用表现为混合竞争型可逆抑制,其对游离酶的抑制常数KI>与对酶底物络合物的抑制常数KIS>分别为0.0789mL和1.1352mL,因此g5菌株代谢产物可作为开发AChE抑制剂类药物的潜在资源.     

海南蛇足石杉株龄及年生长量研究

蛇足石杉因含有丰富的石杉碱甲而引起广泛关注,需求巨增,但该植物生长缓慢,野生资源濒临灭绝,且人工培植相关技术尚未成熟.为保护野生资源及今后开展繁育研究工作,需进一步了解蛇足石杉的生物学特性.据此开展了对海南蛇足石杉天然群体的调查,调查内容主要涵盖芽胞层数、层间距、株高及环境条件等.结果表明,芽胞逐年产生,集中分布于分枝...     

硼对大白菜生长发育及若干生理生化指标的影响

研究了不同水平的硼对大白菜生长发育及若干生理生化指标的影响。结果表明,缺硼明显抑制大白菜植株生长、抽薹和开花,导致花粉活力下降、叶绿素含量降低、可溶性糖含量增加、膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)含量增加、超氧化物歧化酶(SOD)活性下降、过氧化物酶(POD)活性上升,最终导致植株代谢紊乱,生长发育受抑制。     

千层塔生物学特性的初步研究

简要测定了千层塔植株的根系活力 ,过氧化物酶、过氧化氢酶、苯丙氨酸解氨酶活性 ,以及植物各部位的可溶性蛋白质、可溶性糖、脯氨酸、丙二醛含量 ,旨在从植物生理学角度对千层塔有一个基本的了解。     

UV-B辐射对黄芩幼苗生长及生理生化指标的影响

对经过11.8 μW·cm-2 UV-B连续辐照7 d后黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)幼苗的生长及一些生理生化指标进行了测定和分析.结果表明:经11.8 μW·cm-2 UV-B辐照7 d后,黄芩幼苗的平均株高和单株平均干质量分别为8.1 cm和0.026 g,与对照无显著差异(P>0.05);叶片的叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素及类胡萝卜素含量分别为2.89、1.04、3.93和0.48 mg·g-1,均极显著低于对照(P<0.01);叶绿素a/b比值以及类胡萝卜素/总叶绿素比值分别为2.78和0.122, 分别显著或极显著高于对照(P<0.05,P<0.01);叶片中的CAT和POD活性均极显著高于对照(P<0.01),分别为2 412和2 208 U·g-1;SOD活性(1 228 U·g-1·h-1)较对照略有升高,但差异不显著(P>0.05);叶片中的抗坏血酸(ASA)及游离脯氨酸含量均显著高于对照(P<0.05),分别为11.5 mg·g-1和57.7 μg·g-1;MDA含量高于对照,紫外吸收物相对含量和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均低于对照,但差异不显著(P>0.05).研究结果显示,11.8 μW·cm-2 UV-B连续辐照7 d对黄芩幼苗的生长无显著抑制作用,黄芩幼苗能够通过自身的抗氧化系统有效减轻UV-B辐射产生的氧化损伤,对UV-B辐射表现出一定的耐受能力.     

蛇足石杉中两个新的过氧羟基取代的石松生物碱

从我国民间中药蛇足石杉（Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)的全草的总碱部位分得3个石松生物碱。经光谱分析鉴定为11α-过氧羟基马尾杉碱乙（1）,7-过氧羟基马尾杉碱乙（2）和马尾杉碱乙（3）,1和2为首次发现的过氧羟基取代的石松生物碱。     

蛇足石杉中两个新的过氧羟基取代的石松生物碱

从我国民间中药蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb.)Trey.)的全草的总碱部位分得3个石松生物碱,经光谱分析鉴定为11α-过氧羟基马尾杉碱乙(1)、7-过氧羟基马尾杉碱乙(2)和马尾杉碱乙(3).1和2为首次发现的过氧羟基取代的石松生物碱.     

Lycopodium Alkaloids from Huperzia serrata and Their Anti-acetylcholinesterase Activities

One new fawcettimine-type alkaloid ( 1 ), one new miscellaneous-type alkaloid ( 2 ), four new lycodine-type alkaloids ( 3 – 6 ), and eight known ones ( 7 – 14 ) were isolated from the whole plants of Huperzia serrata. Their structures and absolute configurations were elucidated based on spectroscopic data, X-ray diffraction, ECD calculation and Mosher's method. Compound 1 was a rare C₁₈N₂-type Lycopodium alkaloid, possessing serratinine skeleton with an amide side chain in C-5. The absolute configuration of the 18-OH of compounds 4 – 6 were first determined by Mosher's method. Moreover, compounds 1 – 14 were assayed anti-acetylcholinesterase effect in vitro, and compound 7 showed significant anti-acetylcholinesterase activity with an IC₅₀ value of 16.18±1.64 μM.     

NaCl胁迫对马蔺生长及生理生化指标的影响

采用水培法,以1/2Hoagland溶液为基础培养液,研究了1、2、3、4、6、8和10 g·L-1NaCl胁迫处理对马蔺[Iris lactea Pall.var.chinensis(Fisch.)Koidz.]幼苗部分生长和生理生化指标的影响.结果显示:随NaCl质量浓度的提高,马蔺幼苗的株高和根长、地上部分和根及全株干质量逐渐减小,但在1 g·L-1NaCl胁迫条件下,株高和地上部分及全株干质量均显著高于对照.随NaCl质量浓度的提高和胁迫时间的延长,马蔺幼苗叶片的相对电导率和丙二醛(MDA)含量总体上呈逐渐升高的趋势;其中,用1～4 g·L-1NaCl胁迫处理7或14 d,相对电导率有小幅增加但与对照差异不显著;用1～8 g·L-1NaCl胁迫处理7 d,MDA含量与对照差异不显著.叶片叶绿素和脯氨酸含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性则随胁迫时间的延长呈先升后降的趋势,在胁迫的14或21 d各指标达到最高值.随NaCl质量浓度的提高,脯氨酸含量和SOD活性均不断增加且总体上显著高于对照;叶绿素含量则随NaCl质量浓度的提高出现低浓度升高、高浓度降低的趋势,其中3和4 g·L-1NaCl胁迫处理组叶绿素含量最高;各处理组的可溶性蛋白质含量在处理的第7大或第14天与对照无显著差异,第21天则随NaCl质量浓度的提高呈低浓度升高、高浓度降低的趋势,而第28天则随NaCl质量浓度的提高逐渐降低.总体上看,低质量浓度和短时间的NaCl胁迫对马蔺生长和代谢的抑制作用不明显甚至略有促进作用,而高质量浓度和长时间的NaCl胁迫则具有明显的抑制作用.在实验结束后全部供试植株均存活,结合生长和生理生化指标的测定结果,初步判定马蔺对NaCl胁迫具有较强的耐性.     

一株产石杉碱甲的蛇足石杉内生真菌的分离和鉴定

从药用蕨类植物蛇足石杉叶中分离得到53株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基（PDB）中发酵后对内生真菌发酵提取物液进行TLC、HPLC 和ESI-MS检测,结果表明菌株LF40为产石杉碱甲内生菌株,含量达80.1μg/gdcw,并具有体外乙酰胆碱酯酶抑制活性;运用形态学及ITS-rDNA序列分析方法对菌株LF40进行鉴定,确定为黄曲霉Aspergillus flavus LF40。     

Indentification of huperzine A-producing endophytic fungi isolated from Huperzia serrata

This present study was designed to investigate the production of huperzine A (HupA), an acetylcholine inhibitor, which was produced by an endophytic fungi isolated from Huperzia serrata. Screening of 94 endophytic fungal isolates obtained from plant H. serrata was carried out for the production of HupA. Their morphological characteristics were studied and rDNA sequence analysis was carried out. The cultures were grown in liquid culture medium and the extracted metabolites were analyzed by thin layer chromatography and high performance liquid chromatograph for the presence of HupA. The DPPH scavenging ratio and inhibition ratio of acetylcholinesterase (AchE) of the same were determined. 3 out of 94 strains i.e. S29, L44 and S94 showed significant AchE-inhibitory activity and antioxidant activity. Strain L44 which exhibited maximum yield of HupA (37.63 μg/g on dry weight basis) was identified as Trichoderma species by ITS sequence analysis. In conclusion, endophytic fungi from H. serrata can be used as a new resource of HupA.     

Biotransformation of Huperzine B by a Fungal Endophyte of Huperzia serrata

The biotransformation of huperzine B (hupB), one of the characteristic bioactive constituents of the medicinal plant Huperzia serrata, by a fungal endophyte of the host plant was studied. One new compound, 8α,15α‐epoxyhuperzine B ( 1 ), along with two known oxygenated hupB analogs, 16‐hydroxyhuperzine B ( 2 ) and carinatumin B ( 3 ), was isolated and identified. The structures of all the isolates were deduced by spectroscopic methods including NMR, MS, IR, and UV spectra. The known compounds 2 and 3 were obtained from a microbial source for the first time. To the best of our knowledge, it is the first report on the microbial transformation of hupB and would facilitate further structural modification of hupB by chemo‐enzymatic method. In the LPS‐induced neuro‐inflammation injury assay, 8α,15α‐epoxyhuperzine B ( 1 ) exhibited moderate neuroprotective activity by increasing the viability of U251 cell lines with an EC₅₀ of 40.1 nm .