人P2X7真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立

目的：构建人P2X7基因的真核表达载体,并通过转染获得稳定表达P2X7分子的HEK293细胞株。方法：以人脑组织P2X7cDNA为模板扩增出P2X7基因,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1/P2X7。用X-fect试剂盒将重组质粒转染HEK293细胞,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达P2X7-EGFP细胞株。经流式细胞仪、Western blot和激光共聚焦显微镜检测,了解人P2X7在HEK293细胞中的表达水平及细胞内定位。结果：重组质粒pEGFP-N1/P2X7构建正确,建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系。Western blot和流式细胞仪检测证实,P2X7在HEK293细胞系中成功表达,激光共聚焦显微镜检测显示P2X7-EGFP定位在细胞膜上。结论：重组载体pEGFP-N1/P2X7构建成功并建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系,为进一步研究P2X7离子通道结构和功能奠定基础。     

μ2噬菌体RNA的转染

本文报道了提纯的μ2 RNA在下述三种方法中的转染效率：(1)Ca2+处理,(2)高渗培养基,(3)硫酸鱼精蛋白存在下的溶菌酶-EDTA系统。实验结果表明采用第三种方法的转染效率最高,可达到2．1 x 106 p.f．U／μgRNA。研究了硫酸鱼精蛋白在转染中的作用,并观察了RNA浓度,RNA末端部分降解,溴化乙锭(EB),放线菌素D和热变性等对μ2 RNA转染效率的影响。     

赖氨酸的提纯及拆分

<正> 1.从DL-赖氨酰胺原料提纯赖氨酸将待提纯的DL-赖氨酰胺原料,在20-40℃条件下,溶入C_1～C_5的低级醇类或乙醚中,使之与CO_2(或HCl、或HBr)形成难溶性的加合物。滤出,再以HCl处理,可得到纯度为98～99％的产品。回收率可达94～96％。[Allied chem,美国专利,3,819,699,(6/25/74)] 2.从含有仲胺和叔胺的赖氨酸水溶液中提纯赖氨酸     

赖氨酸的提纯及拆分

<正> 1.从DL-赖氨酰胺原料提纯赖氨酸将待提纯的DL-赖氨酰胺原料,在20-40℃条件下,溶入C_1～C_5的低级醇类或乙醚中,使之与CO_2(或HCl、或HBr)形成难溶性的加合物。滤出,再以HCl处理,可得到纯度为98～99％的产品。回收率可达94～96％。[Allied chem,美国专利,3,819,699,(6/25/74)] 2.从含有仲胺和叔胺的赖氨酸水溶液中提纯赖氨酸     

阳离子脂质体的转染机制及转染效率影响因素

阳离子脂质体是一种非常具有发展前景的基因载体。简要介绍了阳离子脂质体的结构特点;着重讨论了阳离子脂质体作为基因载体时介导基因转移的机制以及在转染过程中对基因转染效率产生影响的主要因素。     

阳离子脂质体的转染机制及转染效率影响因素

阳离子脂质体是一种非常具有发展前景的基因载体。简要介绍了阳离子脂质体的结构特点;着重讨论了阳离子脂质体作为基因载体时介导基因转移的机制以及在转染过程中对基因转染效率产生影响的主要因素。     

P2YRs结构及药理学研究进展

P2Y受体家族(P2Y receptors,P2YRs)是嘌呤能受体家族成员之一,同时从属于G蛋白偶联受体家族(G-protein-coupled receptors,GPCRs)。它广泛表达于机体的各类细胞中,与许多重大疾病的发生密切相关,显示出作为药物靶点的巨大潜力。本文将介绍P2YRs的结构特征、分类及信号转导机制,从P2YRs的药理学活性着手,重点阐述P2YRs现有配体药物及潜在成药靶点的研究进展,以期为相关临床治疗药物的研发提供新思路。     

P2X2和P2X4受体的调制位点

P2X受体是非选择性阳离子通道,广泛分布于中枢及外周神经系统。近年来,本实验室侧重研究重金属、质子、酒精等对P2X2和P2X4受体的调制。研究发现不同的因素对同一种受体介导的ATP-激活电流有不同的调制作用,如增强效应、抑制效应或者两种效应兼有,而且同一种因素对这两种受体的调制效应也不相同。因此,我们推测P2X受体上存在不同的结合位点,本文主要阐述P2X2和P2X4受体不同的调制位点。     

采用原位杂交及电镜检测CR2转染小鼠细胞的EB病毒感染

EB病毒不能感染小鼠是因为小鼠CR2受体构像与人的不同,通过对小鼠CR2受体进行定点空变,然后将野生型和突变型小鼠CR2／1（MCR2／1）及人CR2（hCR2）用基因转移技术导入小鼠鼻咽上皮细胞系（TMNE）进行表达,观察转染阳性细胞是否具有结合EB病毒的能力,EBER－1杂交结果显示,只有转染hCR2和空变型MCR2（mtMCR2)的TMNE细胞可以感染EB病毒,但是前感染EB病毒的阳性率比后高的高得多。电镜结果也进一步证实EB病毒可以感染这两种细胞,这为进一步研究EB病毒进入细胞的机制及建立EB病毒相关的鼻咽癌动物模型奠定了良好的基础。     

大肠杆菌VT2噬菌体的分离与溶源转染

本试验利用指示菌MC1061,经双层琼脂法纯化和PCR扩增vt2基因,分别从大肠杆菌O157菌株、牛粪、鸡粪和污水中分离获得5株含vt2基因的噬菌体.这些噬菌斑透明,直径为0.5-2 mm,对指示菌的感染效价均在109PFU/mL以上,抵抗氯仿和56℃C30min的作用.将噬菌体分离株SHφW1感染MC1061后,经PCR鉴定获得一株溶源菌株(MC1061/SHφW1).溶源株的LB培养滤液对Vero细胞产生了显著的病变效应,而MC1061在同等条件下培养的滤液无细胞病变,表明VT2噬菌体通过溶源将vt2毒力基因水平转移,证实了VT2噬菌体的转染与细菌毒力相关.     

大肠杆菌VT2噬菌体的分离与溶源转染

本试验利用指示菌MC1061。经双层琼脂法纯化和PCR扩增vt2基因,分别从大肠杆菌0157菌株、牛粪、鸡粪和污水中分离获得5株含vt2基因的噬菌体。这些噬菌斑透明,直径为0．5-2min,对指示菌的感染效价均在10^9PFU／mL以上,抵抗氯仿和56℃30min的作用。将噬菌体分离株SHφWl感染MC1061后。经PCR鉴定获得一株溶源菌株(MC1061／SHφW1)。溶源株的LB培养滤液对Vero细胞产生了显著的病变效应,而MC1061在同等条件下培养的滤液无细胞病变,表明VT2噬菌体通过溶源将vt2毒力基因水平转移,证实了VT2噬菌体的转染与细菌毒力相关。     

P2z／P2x7嘌呤能受体的研究进展

P2受体是许多种类细胞共有的一类膜受体,能选择性地与胞外ATP(ATPe)结合,产生多种生物效应。P2受体不同于P1受体,因后者也是一类嘌呤能受体,但仅选择性识别腺嘌呤,现称为A1、A2受体。包括ATP在内的多种天然或合成的核苷酸对不同亚型的P2受体有着不同的激活能力,因此根据药理学性质将P2受体分为五类:P2x、P2y、P2u、P2z和P2t,其中前四种是ATP受体,而P2t则是血小板(PLT)表达的ADP受体。P2z受体有一个     

广西巴马小型猪血清淀粉样P物质基因真核载体构建及细胞转染

血清淀粉样P物质(Serum Amyloid Pcomponent,SAP)是一种在进化上高度保守的血清糖蛋白,它可与各种类型的原纤维结合,在免疫应答和炎症反应等多种免疫疾病中发挥作用.以广西巴马小型猪肝组织总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出相应cDNA片段,连接到克隆载体pMD18-T上进行检测,测序结果为675 bp,与GenBank所提供相关序列同源性为100％,并成功构建pEGFP-N1 -SAP重组真核表达载体,利用脂质体(Lipofectamine 2000)介导法将重组质粒导入到NIH-3T3细胞中培养,经转染24 h后,置于倒置荧光显微镜下观察,发现含有重组质粒的NIH-3T3细胞中表达出绿色荧光,为进一步研究SAP基因的功能特点及在试验动物相关疾病模型的应用提供务件.     

卵磷脂的提纯、鉴定及应用

以大豆油脚为原料 ,采用适合于大量制备和实验室少量制备的全溶剂法 ,无机盐复合沉淀法和柱层析法 ,提取高纯度的卵磷脂 ,通过薄层层析 ,紫外光谱 ,红外光谱分析和HPLC等方法对其进行鉴定 ,并叙述了卵磷脂的应用价值。     

大青杨基因组DNA的提纯及鉴定

由于各种林木在组织结构和化学成分上的差异,核酸的提取方法将不尽相同。高质量的DNA是林木分子生物学研究的关键因素。探索一种科学的、合适的DNA提取方法尤为重要。本文对大青杨基因组DNA的提取方法进行了优化。通过电泳检测、紫外分析、限制性内切酶消化和随机引物PCR扩增鉴定所获得的基因组DNA,证明其完全可以满足分子生物学实验的要求。     

鸡冠花种子蛋白质的提纯及分析

鸡冠花种子干燥后用石油醚脱酯,用凯氏定氮法测定蛋白质含量。按Osbern系统分别提取白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白;用Folin一酚试剂法测定各自相对含量,并用单向和双向SDS—PAGE方法分析种子总蛋白和4类不同溶性蛋白质的组成成分及这些组份的热稳定性。实验发现:鸡冠花种子蛋白质含量达26.04％,白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白的相对含量分别为11.5％、72％、4.6％、12％。SDS—PAGE表明;其种子蛋白中20KD球蛋白成份含量最高,其它一些次要组分为63KD、61KD、15KD、13KD白蛋白成份,58KD、37KD、23KD球蛋白成份,39KD、34KD、25KD谷蛋白成份及26KD醇溶蛋白成份,其中58KD由37KD和20KD两亚基经二硫键连接而成,39KD组份由24.5KD和18KD两亚基通过二硫键连接而成,23KD球蛋白组份遇热沉淀。     

DNA-蛋白质相互作用的研究——EcoRI内切酶切割P_2-DNA

限制性核酸内切酶不仅是分析和操纵DNA序列的工具,而且也为研究DNA-蛋白质之间相互作用提供了一条可行的途径。核酸内切酶如何识别、结合、切割DNA,不少文章已有报道。至今没有解决的一个问题是:同一DNA分子上具有相同核苷酸顺序的不同限制位,为什么能以不同的速度为同一种内切酶切割。为了研究这个问题,我们选择P_2噬菌体DNA和EcoRI内切酶作为试验系统,用酶促反应的动力学和热力学方法研究其切割机制,所得资料表明,不同限制位点的切割速度     

人血白蛋白的分离及提纯研究进展

改进白蛋白工艺,加强产品稳定性及治疗对确保患者生命健康具有重要的意义,同时也节省企业资源,提高企业经济效益。目前国内血液制品发展面临较大的挑战,不仅受原材料血浆供应紧张的影响,同时缺乏自身产品多样性,因此对白蛋白分离及提纯工艺进行分析,提高人血白蛋白产品纯度,获得有效的血液制品是当前血液制品生产的重点及难点。本文将综述人血白蛋白分离及提纯的相关工艺要求,旨在为人血白蛋白的制备提供指导。