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用PCR技术诊断水稻的白叶枯病抗性 总被引:22,自引:1,他引:22
植物育种中应用分子标记辅助选择要求分子标记与目的基因紧密连锁,而且分析手段经济简便、重复性好。Xa21是最近发现的一个具有广谱抗性的水稻白叶枯病抗性基因,利用一个含Xa21基因的品系IRBB21分别与2个感病品种杂交获得2个F_2群体。用4对引物分别对3个亲本进行PCR分析,其中一对引物(PB78)的PCR产物在抗、感病品种间可揭示多态性。对2个F_2群体进一步的遗传分析表明,PCR标记和Xa21的白叶枯病抗性紧密连锁,其重组率仅为2.48%。根据该标记选择基因型纯合的抗性植株,其准确率可达100%。本文还就植物育种中分子标记的检测途径进行了评价。 相似文献
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应用PCR技术从破伤风梭状芽孢杆菌DNA中扩增出1.4kb DNA基因,将其克隆到pCU18质粒中,经测序证明该DNA片段为破伤风片段C的基因,并将此基因片段亚克隆到时pGEX-45-2,构建成表达质粒pGEX-TC,在E.coli中进行表达。 相似文献
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多重PCR法检测对皮下和造血器官坏死杆状病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
根据对虾皮下和造血坏死杆状病毒(HHNBV)HHNBV-XIA靶基因序列设计了4个多重PCR法用引物(P1、P2、P3、P4)。采用了五种引物组合形式分别对HHNBV-XIA、HHNBV基因和PRDV-JAPAN片段进行了物异扩增,建立了多重PCR检测HHNBV方法。通过优化多重PCR法检测HHNBV条件,可从阳性感染的中国对虾fg级DNA中定性检测出皮下和造血器官坏死杆状病毒。 相似文献
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为了获得HIV辅助受体CXCR4基因,进一步探索艾滋病(AIDS)的诊断、防治方法,采用逆转录巢式聚合酶链式反应(RT-nPCR)从中国人外周血淋巴细胞中克隆了CXCR4 cDNA基因,得到了预期的1 100bp左右的片段。将PCR产物与T载体连接,并进行了酶切反应鉴定,获得与T载体正向连接的克隆。测序结果表明:克隆的片段含有一个开放性阅读框架,编码352个氨基酸残基。搜索GenBank,目标片段与M99293、XM051223、XM051224、 XM051225有很高的同源性,比较结果显示:克隆的片段包括完整的编码序列,含两个碱基的差异。 相似文献
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免疫-PCR结合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。免疫-PCR的关键在于形成抗体-标记DNA偶联物,作为桥梁连接免疫反应的特异和PCR的高扩增能力。本文简述了-PCR的基流程以及与标DNA相偶联,PCR产物检测方法的进展。 相似文献
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采用PCR及RT-PCR方法结合核酸分子杂交技术,首镒确定了与Grp94cDNA2231-2500碱基片段对应的Grp94基因序列上有内含子。含有内含子的扩增片段长约708bp。对三种癌细胞系进行了PCR和RT-PCR反应,电泳结果显示存在差异。 相似文献
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从簇毛麦叶片中提取总RNA,进一步分离mRNA。以mRNA为模板反转录合成cDNA,两端经T4DNA多聚酶修平后加EcoR1接头分子,连接于质粒pGEM-7Zf(+)的EcoR1克隆位点,转化大肠杆菌JM103菌株建立了cDNA文库。用PCR扩增重组质粒的cDNA插入序列,用^32P标记后分别与HindⅢ或XbaⅠ酶切的小麦-黑麦附加系DNA进行Southern杂交。根据其杂交结果,目前已鉴定出4 相似文献
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人基因组YAC克隆DNA的Alu—PCR反应条件的系统研究 总被引:3,自引:0,他引:3
在人基因组YAC克隆的Alu-PCR指纹分析中要求DNA扩增带具有YAC特征性;在Alu-PCR方法对YAC克隆中的人类基因组DNA片段进行特异的同位素标记时则要求被增标记的DNA序列在插入片段中具有一定弥散性,我们建立了两种不同的Alu-PCR反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果,根据不同条件下的Alu-PCR结果,分析了多引发位点PCR中的一些现象,并作了解释。 相似文献
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人基因组YAC克隆DNA的Alu-PCR反应条件的系统研究 总被引:2,自引:0,他引:2
在人基因组YAC克隆的Alu-PCR指纹分析中要求DNA且扩增带具有YAC特征性;在用AlU-PCR方法对YAC克隆中的人类基因组DNA片段进行特异的同位素标记时则要求被扩增标记的DNA序列在插入片段中具有一定的弥散性。我们建立了两种不同的Alu-PCR反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果。根据不同条件下的Alu-PCR结果,分析了多引发位点PCR中的一些现象,并作出了解释。 相似文献
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高覆盖率水稻BAC库的构建及抗病基因相关克隆的筛选 总被引:18,自引:2,他引:18
利用含Xa4、xa5和xa13 3个水稻白叶枯病抗性基因的累加系IRBB56构建了一个水稻细菌人工染色体文库,该文库包含55296个克隆,平均插入升段为132kb。按水稻基因组为450Mb计,该文库覆盖14倍基因组,筛选出任一水稻基因或序列的概率为99.99%。用均匀分布的3个叶绿体基因和4个线粒体基因克隆作探针筛选文库,结果显示该文库中含细菌器基因组DNA同源序列的克隆数小于1%、用分布于水稻3条不同染色体、分别与Xa4、xa5和xa13连锁的DNA标记筛选文库,分别检测出11-106个阳性克隆,为克隆这些基因打下了基础。该文库对水稻基因组的高度覆盖率和较大的插入片段,非常适合于物理作图和基因的分离和克隆。 相似文献
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逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达 总被引:4,自引:0,他引:4
为了深入研究诱导型一氧化氮合酶基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用,采用脂质体介导基因转染技术,将iNOS cDNA重组逆转录病毒载体导入NG108-15神经细胞,获得G418抗性克隆,命名为NG-LNCXiNOS细胞。DNA印迹杂交,PCR扩增及RT-PCR和蛋白质免疫印迹杂交分析,证实NG-LNCXiNOS细胞有外源iNOS基因整合,转录和表达;NADPH黄递酶(NADPH diaphorase 相似文献
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用聚合酶链反应(PCR)技术,制备了轮状病毒第9基因部分片段的地高辛标记的cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针具有轮状病毒A组的特异性,可检出10pgHRV-RNA。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交,两种方法的结果一致;、同时将斑点杂交法与PAGE法的结果进行了比较。实验结果表明用PCR技术直接制备地高辛素标记的cDNA探针具有方便、快速、标记率高、特异性 相似文献
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本文报道以人adr亚型HBV DNA(3.2kb)为模板,经多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增X基因片段(949bp),以逆转录病毒体fPGV1为运载体,在它的克隆位点上插入X基因片段,由此获得逆转录病毒重组体fPGV1-X,并同时以含反向X基因顺序fPGV1-anti-X及fPGV1为对照,通过对ψ2及PA317细胞的转染和感染,获得了高于10^4pf 相似文献
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日本血吸虫中国大陆株TPI基团的克隆及其表达产物特性 总被引:1,自引:1,他引:1
磷酸丙糖异构酶(TPI)是血吸虫病疫苗重要的候选抗原基因之一。参考日本血吸虫已发表的TPI cDNA序列,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR法快速克隆出一大小约800bp的DNA片段。DNA序列分析证实,所扩增到的DNA片段即为日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(SjTPIc)基因。将该基因重组到表达型质粒pGEX-4T中,表达的GST融合蛋白分子量约54kD。用谷胱甘肽琼脂 相似文献
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PCR制备地高辛素标记的探针检测轮状病毒核酸 总被引:2,自引:0,他引:2
用聚合酶链反应(PCR)技术,制备了轮状病毒第9基因部分片段的地高辛标记的cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针具有轮状病毒A组的特异性,可检出10pgHRV-RNA。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交,两种方法的结果一致;同时将斑点杂交法与PAGE法的结果进行了比较。实验结果表明用PCR技术直接制备地高辛索标记的cDNA探针具有方便、快速、标记率高、特异性强的特点,具有一定的应用前景。 相似文献
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采用cDNA-PCR技术,从人胎盘cDNA文库DNA中克隆了人碱性成纤维在子(hbFGF)基因,用PCR突变法对其5&端序列进行修饰,奖天然和修饰后的hbFGF基因分别克隆至表达载体pBV221,免疫抑迹和SDS-PAGE结果证明,经修饰后的基因在大肠杆菌DS5α中获得了表达,表达量占菌体总蛋白9%。 相似文献
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白鲢MHCIα2基因克隆及序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据人和动物的MHCIα2基因中两个半胱氨酸侧翼的保守序列设计了混合型引物,采用PCR法从白鲢基因组DNA中克隆了MHCIα2。经氨基酸序列和同源性分析,Hymo-BX1与人和动物的MHC1α2存在26.7-50.6%同源性,并存在抗原多肽结合位点(T-143、K-146、W-147、Y-159)以及α2微球蛋白结合位点(Q-115、D-119、G-120、D-122)。由此认为,Hymo-BX1 相似文献