金属硫蛋白产生菌的诱变育种

采用亚硝基胍和紫外线诱变,自金属硫蛋白（ＭＴ）产生菌酿酒酵母（ｄｅｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＢＤ１０１－２５单倍体中获得遗传稳定的高Ｃｕ２＋、Ｃｄ２＋抗性突变株ＢＤ１０１－６９和ＢＤ１０１－３０。并对其重金属解毒、桔抗ｕ．ｖ．和６０Ｃｏ辐射效应、清除羟基自由基能力等生物学功能进行了研究。与出发菌株相比,上述生物学活性与酵母细胞对Ｃｉ２＋抗性、ＭＴ表达量表现出正相关性。两个突变株类ＭＴ表达量与生物学活性皆有所提高,为酿酒酵母ＭＴ的理论和应用研究打下了基础。     

金属硫蛋白产生菌的诱变育种*

采用亚硝基胍和紫外线诱变,自金属硫蛋白（ＭＴ）产生菌酿酒酵母（ｄｅｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＢＤ１０１－２５单倍体中获得遗传稳定的高Ｃｕ^２＋、Ｃｄ^２＋抗性突变株ＢＤ１０１－６９和ＢＤ１０１－３０。并对其重金属解毒、桔抗ｕ．Ｖ．和６０Ｃｏ辐射效应、清除羟基自由基能力等生物学功能进行了研究。与出发菌株相比,上述生物学活性与酵母细胞对Ｃｉ^２＋抗性、ＭＴ表达量表现出正相关性。两个突变株类ＭＴ表达量与生物学活性皆有所提     

酵母金属硫蛋白对g12细胞抗γ射线损伤的作用

用胞质阻断法微核试验和单细胞凝胶电泳法检测酵母金属硫蛋白（ＢＤ１０１－Ｃｕ－ＭＴ）对＾６０Ｃｏ－γ射线诱发的ｇ１２细胞微核形成和ＤＮＡ链断裂的影响。结果表明１０和５０μｇ／ｍｌ ＤＢ１０１ Ｃｕ－ＭＴ处理,对１或３Ｇｙγ射诱发的双核微核细胞率和１Ｇｙγ射线诱发的彗星细胞频率及核ＤＮＡ迁移距离的增加有明显的抑制作用。提示酵母金属硫蛋白对γ线诱发ｇ１２细胞的遗传损伤有扣抗作用。     

金属诱导条件下刺猬各组织器官金属硫蛋白含量的比较分析

本文采用Ａｇ－Ｈｂ（血红蛋白）饱和法,Ｃｄ－Ｈｂ饱和法、Ｃｕ－Ｈｂ饱和法及酶联吸附免疫法定量分析刺猬各组织器官中金属硫蛋白含量。结果表明,肌肉注射三种金属盐均有明显的诱导金属硫蛋白合成的作用,诱导强度为Ｃｄ＾２＋＞Ｚｎ＾２＋＞Ｃｕ＾２＋,诱导后金属硫蛋白含量分布规律一致,即肝＞肾＞睾丸＞脾＞心、肺、胃、膀胱、胆汁、大肠、小肠、肌肉、血液,其中镉诱导肝的金属硫蛋白含量每克湿组织约１．８４ｍｇ,为肾的     

胡萝卜及愈伤组织细胞质Ca^2＋水平分析的研究

为测定植物细胞质内［Ｃａ＾２＋］ｉ,对胡萝卜（Ｄａｕｃｕｓｃａｒｔａｖａｒ．ｓａｔｉｖａＤＣ．）原生质体制备介质做了改进,并在正常生理条件,用温和的、非损伤性的方法将Ｃａ＾２＋荧光指示剂ｉｎｄｏ－１Ｋ＾＋和ｆｕｒａ－２Ｋ＾＋地入该原生体,能很好地标记细胞质的游离Ｃａ＾２＋。     

c—erbB2对大鼠黄体细胞hCG诱导的孕酮分泌的影响

采用离体细胞体外孵育法,研究反义ｃ－ｅｒｂＢ２寡脱氧核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｃ－ｅｒｂＢ２ ＯＤＮ）对大鼠黄体细胞ｈＣＧ诱导的孕酮分泌的影响,及其与外源性ｃＡＭＰ和Ｃａ＾２＋以及蛋白抑制剂放线菌酮（ＣＹＸ）之间的关系。结果表明,反义ｃ－ｅｒｂＢ２以剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的孕酮的产生,同时使ｃ－ｅｒｂＢ２蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降,无义ｔａｔ ＯＤＮ没有相应的作用。１０＾－４     

酵母金属硫蛋白对g12细胞抗γ射线损伤的作用

用胞质阻断法微核试验和单细胞凝胶电泳法检测酵母金属硫蛋白（ＢＤ１０１Ｃｕ－ＭＴ）对(6０)Ｃｏ－γ射线诱发的ｇ１２细胞微核形成和ＤＮＡ链断裂的影响。结果表明１０和５０μｇ／ｍｌＢＤ１０１Ｃｕ－ＭＴ处理,对１或３Ｇｙγ射线诱发的双核微核细胞率和１Ｇｙγ射线诱发的彗星细胞频率及核ＤＮＡ迁移距离的增加有明显的抑制作用．提示酵母金属硫蛋白对γ射线诱发ｇ１２细胞的遗传损伤有拮抗作用．     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ｓｍ ｏｏｔｈ ｍ ｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要．利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,Ｎ－ＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ＨＤＬ,ＯＸ－ＨＤＬ）对培养人主动脉ＳＭＣ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１（细胞周期蛋白Ｄ１）基因转录表达的影响．结果表明：（１）Ｎ－ＨＤＬ对ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达无影响（Ｐ＞ ０．０５）;（２）ＯＸ－ＨＤＬ使ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达显著增强（Ｐ＜０．０１）,其表达量随时间（２、１２、２４ ｈ）延长而增加．上述结果表明,ＯＸ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与其刺激ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达增加有关．     

芦丁和槲皮素对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用

以低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰为模型和以硫代巴比妥酸反应物质（ＴＢＡＳ）生成量以及ＬＤＬ的α－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ和荧光物质含量为指标,以时间效应和浓度效应说明槲皮素和芦丁能明显地抑制Ｃａ＾２＋诱导的ＬＤＬ氧化修饰但其抗氧化修饰的程度无明显差异。它们对已受到Ｃｕ＾２＋氧化修饰的ＬＤＬ的过氧化无明显地终止作用。     

酵母金属硫蛋白对酵母和小鼠抗γ射线损伤的作用

酿酒酵母ＢＤ１０１菌株的金属硫蛋白能清除羟基自由基,含金属硫蛋白的酵母菌有拮抗＾６０Ｃｏγ射线的作用。用计数血液中血小板（ＰＬＴ）、白细胞（ＷＢＣ）变化来研究酵母Ｃｕ－ＭＴ在小鼠γ射线损伤中的作用。结果表明,该菌Ｃｕ－ＭＴ对ＰＬＴ降低的改善和回升有作用,但未观察到其对ＷＢＣ总数变化的影响,提示酿酒酵母Ｃｕ－ＭＴ在临床放射病治疗和放疗后抗出血方面有良好的应用前景。     

兔阑尾中一种新的21kD的钙结合蛋白的纯化与鉴定

纯化与鉴定了Ｂ淋巴细胞中一种新的分子量为２１ｋＤ的钙结合蛋白（ＣａＢＰ２１）。兔阑尾淋巴细胞匀浆经热变性,Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ与ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析,自每１ｋｇ细胞沉积物中获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的ＣａＢＰ２１５．３ｍｇ。ＨＣｌ水解后的酸性氨基酸（Ａｓｐ＋Ｇｌｕ）含量为２６％。如同大多数钙结合蛋白一样,Ｎ末端封闭阻止其进行Ｅｄｍａｎ降解。ＣａＢＰ２１中疏水性氨基酸（计Ｇｌｙ,不计Ｔｒｐ）约占４６％,碱性氨基酸１０％,酸性氨基酸与极性氨基酸约４４％。ＣａＢＰ２１有较高的Ｓｅｒ、Ｔｙｒ含量。肽谱分析等确证ＣａＢＰ２１为２个相同或相似亚基二聚体。以ＡｒｓｅｎａｚｏⅢ作Ｃａ２＋结合分析表明每分子ＣａＢＰ２１可结合４分子Ｃａ２＋,对Ｃａ２＋的结合常数约为１０－５ｍｏｌ／Ｌ。各种性质表明ＣａＢＰ２１是一种不同于其他已知钙结合蛋白的新钙结合蛋白。     

c—fos,c—myb和c—erbB—2与大鼠卵巢颗粒细胞生孕酮调？…

目的和方法：用离体细胞体外孵育法,观察肥义ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２寡脱氧核苷酸（ｃ－ｆｏｓ ＯＤＮ、ｃ－ｍｙｂ ＯＤＮ和ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＯＤＮ）对ｈＣＧ诱导大鼠颗粒细胞孕酮产生的影响。同时观察内皮素－１、γ－氨基丁酸和钙离子通道阻断剂维拉帕米对细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的影响。结果：反义ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＯＤＮ均明显抑制ｈＣＧ诱导颗     

产金属硫蛋白酵母菌原生质体电融合研究

采用原生质体电融合技术,由不能水解淀粉、细胞生物量低,只抗Cu²⁺、金属硫蛋白(MT)中cys含量高的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae,a)单倍体BD101-25和具淀粉水解能力、细胞生物量高、Cu²⁺、Cd²⁺抗性高、金属硫蛋白中cys含量低的异常毕赤酵母(Pichiaamomala,a)单倍体BD102-13获得4个融合株。融合组合有两亲株属间融合和单一亲株种内融合两类。融合株细胞体积、DNA含量均近似于两亲株细胞之和,并具有水解淀粉能力,Cu²⁺、Cd²⁺抗性高,细胞生物量高,MT中cys含量高等特点。属间融合株Cu²⁺、Cd²⁺抗性的遗传性状稳定。     

低温逆境中不同抗寒性植物细胞内Ca^2＋稳定平衡的区别

电镜细胞化学观察揭示,不抗寒的玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．ｅｖ． Ｂｌａｃｋ Ｍｅｘｉｃａｎ Ｓｗｅｅｌ）和抗寒的小偃麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｒｎ ｓｅｅｔ．Ｔｒｉｔｉｔｒｉｇｉａ ｍａｃｋｅｙ）细胞在２６℃悬浮培养时,标志Ｃａ＾２＋定位的锑酸钙沉淀物主要分布在液泡内,细胞质和细胞核中很少见到Ｃａ＾２＋沉淀;标志Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活性的反应的磷权沉淀物丰富地分布在质膜上,显示这两种植物物质膜Ｃａ＾     

二价铅离子与金属硫蛋白相互作用的研究

通过紫外吸收光谱和平衡透析法研究了二价铅离子同脱金属硫蛋白（ａｐｏ－ＭＴ）、锌－金属硫蛋白（Ｚｎ－ＭＴ）的相互作用,证实Ｐｂ（Ⅱ）是以金属巯基复合物（金属巯基比为１∶２）的形式同金属硫蛋白结合,表观离解常数（ＫＤ）为８．７１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．在自由铅浓度达到６．５２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的条件下,铅离子即可将Ｚｎ－ＭＴ上的Ｚｎ完全取代下来．通过ＥＤＴＡ、ＤＴＮＢ竞争反应、圆二色性（ＣＤ）光谱分析,认为Ｐｂ－ＭＴ的金属巯基复合物不同于Ｚｎ－ＭＴ中Ｚｎ与巯基形成的紧密的正四面体结构,而是可能形成一种三级结构相对松散、热力学上不稳定的Ｃｙｓ－Ｓ－Ｐｂ－Ｓ－Ｃｙｓ平面形结构．研究认为金属硫蛋白的两种亚型ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ与Ｐｂ（Ⅱ）的结合能力并无显著差异     

小麦根液泡膜上存在两种类型ATPase

采用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ柱层析的方法在小麦根液泡膜中分离出两种ＡＴＰａｓｅ,一种需Ｍｇ＾２＋存在于表现催化活性,受质子通道抑制剂ＤＣＣＤ（二环已基碳二亚胺）的抑制和Ｃｌ＾－的激活,为需Ｍｇ＾２＋ＡＴＰａｓｅ,另一种不需Ｍｇ＾２＋就可表现出催化活性,受Ｃａ＾２＋的强烈激活,不受ＤＣＣＤ的抑制和Ｃｌ＾－激活,可能前者与转运质子有关,后者与Ｃａ＾２＋的转运有关。     

哺乳动物细胞凋亡中的功能元件研究进展

在哺乳动物细胞中,程序性细胞死亡（ＰＣＤ）的功能元件包括死亡受体、适配体蛋白、效应元件及调节元件。凋亡信号由适配体蛋白传导至效应元件－Ａｓｐ特异性半胱氨酸蛋白酶（Ｃａｓｐａｓｅ）,活化的Ｃａｓｐａｓｅ水解一系列关键底物,最终导致细胞解体。Ｂｃｌ－２家族、ＩＡＰｓ家族、ＡＲＣ和ＦＬＩＰｓ等蛋白因子通过与适配体蛋白及Ｃａｓｐａｓｅ的相互作用来调控ＰＣＤ进程。     

人肝金属硫蛋白突变体β基因通过同源重组在蓝藻中的克隆与表达

将人肝金属硫蛋白（ＭＴ）突变体β基因插入到中间载体ｐＲＬ－４３９上的强启动子ＰｐｓｂＡ 下游,利用载体ｐＲＬ－β上的ＰｐｓｂＡ 和β基因与ｐｈａｓｍ ｉｄ ｐＴＺ１８－８上整合平台ＰｓｂＢ,构建整合表达载体ｐＴＺ－β．整合平台ＰｓｂＢ与集胞藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．ＰＣＣ６８０３）染色体ＤＮＡ 上ｐｓｂＢ基因下游片段为同源序列．为了发生单交换同源重组,将外源基因β插入到整合平台ＰｓｂＢ下游的克隆位点．利用自然转化方法将表达载体ｐＴＺ－β整合到Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｔｓｐ．ＰＣＣ６８０３的染色体上．经氨苄青霉素筛选得到遗传性状稳定的转基因蓝藻．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 证明β基因已整合到Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ６８０３的染色体上;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 表明β基因已在蓝藻中表达．ＥＬＩＳＡ 测定在Ｚｎ２＋ 浓度为１５０ μｍ ｌ／Ｌ时表达量最高,为５９０ μｇ／ｇ 鲜藻;原子吸收表明转β基因的藻对Ｚｎ２＋ 的富集能力约为野生型的２倍．     

脱金属硫蛋白与二价汞离子的络合作用及构象研究

用圆二色谱研究兔肝锐金属硫蛋白的两个亚型ａｐｏ－ＭＴ１、ａｐｏ－ＭＴ２与Ｈｇ＾２＋在不同分子数比和ｐＨ值下的络合规律。发现：（１）在ｐＨ２下与Ｈｇ＾２＋重组ＭＴｓ的ＣＤ谱特征峰是３０４ｎｍ（＋）,２６０ｎｍ（－）,２５０ｎｍ（＋）。络合Ｈｇ＾２＋的数目ｎ远远超过７。任何ｐＨ值下过量Ｈｇ＾２＋的存在都将破坏ＭＴｓ的正常构象。ｐＨ值对形成和维持ＭＴｓ稳定构象的影响很大,当ｐＨ≥４．９时,ａｐｏ－ＭＴｓ     

花生幼苗下胚轴质膜Ca2+-ATP酶及其对低温胁迫的反应

经６％－１２％ＤｅｘｔｒａｎＴ７０密度梯度离心,获得了纯度较高的７ｄ龄花生幼苗下胚轴质膜制剂,质膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ在反应系统不存在Ｍｇ＾２＋时,可正常表现水解ＡＴＰ的活性,但此活性明显低于Ｍｇ＾２＋激活的ＡＴＰａｓｅ,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ不受Ｎａ３ＶＯ４抑制,不被Ｋ＾＋激活,而被Ｃｌ＾－抑制,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ的最适,ｐＨ不同于Ｍｇ＾２＋激活的ＡＴＰａｓｅ,低温胁迫显著提高质膜Ｃ