金耳子实体和发酵菌丝体多糖的分离、纯化与结构的比较研究

人工段木栽培的金耳（TremellaaurantialbaBandonietZang）子实体和深层培养的金耳菌丝体分别经沸水提取、醇析、透析,Sevape法脱蛋白、SephadexG—100柱层析纯化,得子实体纯多糖TAf和菌丝体纯多糖TAm。玻璃纤维纸电泳表明TAm和TAf为单一均匀多糖。薄层层析表明,TAm的单糖组成为半乳糖、葡萄糖、甘露糖、岩藻糖、鼠李糖。TAf的单糖组成为葡萄糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸。UV分析表明组成中不含核酸和蛋白质。TAf经乙醇分级分离得TAf－1和TAf－2。TAf－1经SephadexG－100柱层析表明其为单一均匀物质。红外光谱分析证明,TAf－1和TAf－2有多糖吸收峰,存在吡喃环,α-糖苷键和β-糖苷键连接。     

松杉灵芝发酵菌丝体中水溶多糖的分离纯化与结构的比较研究

松杉灵芝发酵菌丝体经热水提取，冻融分级及乙醇二次分级，分离纯化出ＧＦｂ级份，电泳及凝胶柱层析示其为均一多糖，分子量为９．８万。小于子实体多糖相应级份。ＧＦｂ经红外光谱，气相色谱，气质联机，碳１３核磁共振，高碘酸盐氧化，Ｓｍｉｔｈ降解，甲基化及部分酸水解分析。确定其基本结构中主链为１→６葡萄糖基和１→６半乳糖基构成，二者之比为１：１，分支点在０－３位上，分枝点率为５０％，与子实体多糖ＧＦ３相同，侧链     

松杉灵芝发酵菌丝体中水溶多糖的分离纯化与结构的比较研究

松杉灵芝发酵菌丝体经热水提取,冻融分级及乙醇二次分级,分离纯化出GFb级份,电泳及凝胶柱层析示其为均一多糖,分子量为9.8万。小于子实体多糖相应级份。 GFb经红外光谱,气相色谱,气质联机,碳13核磁共振,高碘酸盐氧化,Smith降解,甲基化及部分酸水解分析,确定其基本结构中主链为1→6葡萄糖基和1→6半乳糖基构戍,二者之比为1∶1,分支点在0-3位上,分枝点率为50％,与子实体多糖GF_3相同,侧链由1→3葡萄糖基,1→4葡萄糖基,末端葡萄糖基及末端半乳糖基构成,分子中分枝率为55.6％,较子实体多糖GF_3分枝率略低,分枝链略短。     

云芝菌丝体多糖的分离纯化研究

利用热水抽提从云芝菌丝体中提取胞内多糖,初步纯化后,用DEAE-Sepharose CL-6B进行分离,从中分离出两个带电荷多糖组分即CVP-I和CVP-Ⅱ,对这两个组分分别用Sepharose CL-6B凝胶柱层析进行纯度鉴定,均出现单一峰,然后用紫外扫描发现这两个组分均出现蛋白多糖的特征吸收,从而可以判断这两个组分是蛋白结合多糖。     

蝉虫草子实体与发酵菌丝体胞内多糖成分分析

比较蝉虫草子实体、孢梗束、虫体以及蝉虫草发酵菌丝体的胞内多糖含量、单糖组成和分子量差异,结果表明,蝉虫草子实体与发酵菌丝中胞内多糖的含量和组成均存在差异。葡萄糖、半乳糖和甘露糖是蝉虫草发酵菌丝体和子实体粗多糖中主要的3种单糖,阿拉伯糖和木糖是子实体粗多糖中的特征性单糖,而果糖属于菌丝体的特征性单糖。子实体粗多糖中高分子量组分（>1×10 ⁶Da）的相对含量明显高于菌丝体粗多糖。本研究对提升蝉虫草发酵多糖产品品质、促进蝉虫草开发应用具有参考价值。     

猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较

人工栽培的猴头菌子实体和固体培养的菌丝体分别经热水提取,浓缩、醇析后得子实体粗多糖（HFP）和菌丝体粗多糖（HMP）,HFP的得率和多糖含量均高于HMP;两者再经透析、Sevag法脱蛋白、乙醇分级沉淀、SephadexG-100柱层析纯化,得子实体纯多糖hfp-1和菌丝体纯多糖hmp-2,经HPLC检测hfp-1和hmp-2为单一均匀多糖,气相色谱分析表明hfp-1的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,摩尔比为：0.12:0.04:1.00:0.71;hmp-2的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,磨尔比为：0.25:0.41:0.31:1.00:0.29。紫外光谱分析表明组成中不含核酸和蛋白质,红外光谱分析二者均有多糖特征吸收峰,hfp-1有β-型连接的吸收峰,hmp-2无明显的β-型连接的吸收峰;经HPLC进行分子量测定,hfp-1的分子量为54000,hmp-2的分子量为68000,猴头菌子实体多糖和菌丝体多糖在化学组成上有一定的差异。     

平菇菌丝体与子实体营养成分的分析比较

采用现代化学分析手段对平菇菌丝体和子实体的营养成分进行分析比较。结果表明,用PDA固体培养的菌丝体的灰分、可溶物、总糖和粗蛋白的含量均明显低于子实体,而粗脂肪和粗纤维的含量则显著高于子实体;菌丝体的Fe、Ca、Zn的含量显著高于子实体,而Mg和K的含量明显低于子实体,Na的含量两者比较接近;菌丝体和子实体的氨基酸组成相似,都含有17种氨基酸,但子实体的各氨基酸的含量均高于菌丝体,从各项氨基酸含量的比值来看,菌丝体则更优于子实体。两者都不失是极好的营养食品源。     

金耳子实体体外抗肿瘤和免疫活性部位的筛选研究

为系统地筛选金耳子实体的活性部位,本论文首次采用系统溶剂法分别用氯仿、乙酸乙酯和乙醇等极性不同的有机溶剂依次提取,残渣风干后再分别用冷水(80℃)、热水(100℃)、3%草酸铵和5%氢氧化钠依次提取,并对各提取物进行了体外抗肿瘤和免疫活性的测试。体外抑制肿瘤细胞增殖模型试验结果表明,氯仿提取物对肿瘤细胞株L1210和SW 620的抑制作用效果最好(P<0.05);小鼠脾淋巴细胞的体外免疫增殖试验结果表明,冷水提取物和热水提提取物的刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖活性相当,仅次于氢氧化钠提取物的活性,草酸铵提取物的活性最差(P<0.05)。     

发酵茯苓菌丝体和天然茯苓多糖的研究

本文对发酵茯苓菌丝体和天然茯苓中多糖的提取分离进行了研究,并分别测定了二者总多糖的提取率及总糖的平均含量。发酵茯苓菌丝体和天然茯苓中总多糖的提取率分别为24.47%和82.93%;发酵茯苓菌丝体和天然茯苓总糖的平均含量分别为45.17%和87.24%。     

香菇菌丝体多糖LeBD1—1的分离纯化和分析

香菇４６５菌株用添加啤酒发酵醪泥的培养基发酵培养１０ｄ后,菌丝体经洗涤、热水浸提、乙醇沉淀再经ＤＥＡＤ－纤维素柱（Ｃｌ＾－型）分离和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析纯化,得到白色絮状多糖ＬｅＢＤ１－１。经醋酸纤维薄膜电泳和ＨＰＬＣ检测纯度,ＬｅＢＤ１－１为均一成分。ＨＰＬＣ法测得分子量为１３００００Ｄａ,红外光谱测定其糖苷键为α型。经完全酸水解后用填表交薄层层析和气相色谱分析单糖组成,ＬｅＢＤ１     

金耳多糖的分离纯化及其化学结构的研究

金耳(Tremella aurantialbaBandoni et Zang)是我国稀有的珍贵食用菌和药用菌,具有化痰、止咳、定喘、调气、平肝阳之功效。多糖作为金耳的主要生理活性成分之一,具有增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗血栓和抗氧化等作用。但由于技术手段的落后,金耳多糖的化学研究比较滞后,其药理活性的研究也主要集中于粗多糖的研究,对均一多糖的化学结构分析和生物活性还很少涉及,这种状况对合理开发和利用金耳多糖产品造成很大影响。该研究对金耳子实体多糖进行了提取、分离纯化、结构鉴定、分子修饰和生物活性研究,为更好地开发金耳资源提供可靠的理论依据。     

香菇菌丝体多糖的分离鉴定与免疫功能研究

从香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）菌丝体提取得到的粗多糖,经ＤＥ５２柱层析,得到均一的多糖成分,命名为ＬＥ。其平均分子量为５．０８×１０５,ＬＥ经红外（ＩＲ）和紫外（ＵＶ）光谱分析,为多糖蛋白质复合体,其中糖含量为９４．２％,蛋白质含量为５．８％。完全酸水解表明糖组成为单一的葡萄糖,蛋白质组成主要为Ａｌａ等１６种天然氨基酸。ＬＥ经完全甲基化、酸水解、乙酰化、薄层层析（ＴＬＣ）和［１Ｈ］核磁共振（［１Ｈ］ＮＭＲ）分析,确定其多糖部分的基本结构为１→３连接的葡聚糖,含有部分１→６侧链。此外,用反转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）和生物测定法分别研究了健康人外周血单核细胞中白细胞介素２（ＩＬ２）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）的基因表达和活性,结果发现ＩＬ２和ＴＮＦα的基因表达和活性均高于空白对照组,这表明ＬＥ可诱导某些免疫反应。     

黄绿蜜环菌菌丝体多糖分离纯化与含量测定

分离纯化黄绿蜜环菌菌丝体粗多糖,提高多糖含量,以进一步应用于工业化生产。采用DEAE-52纤维素层析柱分离纯化黄绿蜜环菌菌丝体多糖,依次用水、0.1 mol/L Na Cl、0.2 mol/L Na Cl、0.4 mol/L Na Cl、0.8 mol/L Na Cl进行洗脱;苯酚-硫酸法测定纯化后多糖含量,测定波长490nm,葡萄糖浓度与吸光度的回归方程为A=6.3137X+0.2156R2=0.9909。黄绿蜜环菌菌丝体水体粗多糖经DEAE-52纤维素层析柱分离纯化后,多糖含量达到99%以上。经过中试试验验证提取及分离纯化工艺适用于工业化生产。     

猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较*

人工栽培的猴头菌子实体和固体培养的菌丝体分别经热水提取,浓缩、醇析后得子实体粗多糖（HFP）和菌丝体粗多糖（HMP）,HFP的得率和多糖含量均高于HMP;两者再经透析、Sevag法脱蛋白、乙醇分级沉淀、SephadexG-100柱层析纯化,得子实体纯多糖hfp-1和菌丝体纯多糖 hmp-2,经HPLC检测hfp-1和hmp-2为单一均匀多糖。气相色谱分析表明hfp-1的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,摩尔比为：0.12：0.04：1.00：0.71;hmp-2的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,摩尔比为：0.25：0.41：0.31：1.00：0.29。紫外光谱分析表明组成中不含核酸和蛋白质,红外光谱分析二者均有多糖特征吸收峰,hfp-1有β-型连接的吸收峰,hmp-2无明显的β-型连接的吸收峰;经HPLC进行分子量测定,hfp-1的分子量为54000,hmp-2的分子量为68000。猴头菌子实体多糖和菌丝体多糖在化学组成上有一定的差异。     

灵芝子实体和菌丝体的提取物及其各纯化组份生物活性的比较

从不同品种的灵芝中筛选出了多糖含量最高的菌株GL2为材料,利用柱层析技术从子实体和菌丝体提取物中分离得到多个组分。实验发现子实体组分P3,P31及P32对人白血病细胞株K562的生长有明显地抑制作用,这三个组分中只有P32对另一白血病细胞株HL-60有抑制作用。免疫活性测试的结果显示子实体各组分在刺激小鼠脾淋巴细胞,T和B细胞的增殖,提高人外周血中NK细胞杀伤活性方面比菌丝体的作用强;进一步的实验发现子实体与菌丝体相应组分在刺激人外周血中的T和B淋巴细胞增殖方面的活性差异不大。子实体和菌丝体提取物各组份均可剂量依赖型的促进PBMC分泌TNF-α。菌丝体提取物各组分对TNF-释放量的影响在低浓度时与子实体各组份相当,在高浓度时要明显好于赤芝子实体提取物各组分。     

阿魏菇深层发酵菌丝体多糖提取工艺优化研究

以液体深层培养的阿魏菇新鲜菌丝体为原料,使用均匀正交设计的试验方法优化了阿魏菇多糖提取工艺。实验结果表明：在菌丝密度为100～250mg／mL(鲜重)范围内,超声波破壁时间为18min、热水浸提时间为4h、提取温度为70℃的提取工艺,多糖提取率可达到：0．914％(鲜重)。     

桑树桑黄菌丝体和子实体基因差异表达分析

通过对桑树桑黄Sanghuangporus sanghuang菌丝体和子实体2个不同生长阶段的转录组进行分析,为研究桑黄子实体生长发育相关机制奠定基础。采用Illumina测序技术,对桑树桑黄菌株S23菌丝体和子实体2个不同生长发育阶段进行了全转录组测序。将转录组测序reads比对到参考序列上,菌丝体测序样本的reads比对率为82.89%;子实体测序样本的reads比对率为83%。基因差异表达分析显示,与菌丝体相比,子实体中显著上调表达基因为2 898个,显著下调表达基因为1 965个。经过Blast nr比对发现,桑黄菌在子实体阶段表达量上升的基因主要与各种氧化酶活性、疏水蛋白等相关;表达量下降的基因主要与糖类、氨基酸结合、运输等相关。基因本体（gene ontology,GO）富集分析表明,菌丝体及子实体两个阶段与跨膜转运相关的差异表达基因富集明显。代谢通路（pathway）富集分析表明,类固醇生物合成、精氨酸生物合成、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路等差异基因富集明显。     

小刺猴头菌丝体多糖的结构研究

对小刺猴头过滤掉发酵液的发酵菌丝体,水提和碱提后获得的均一组分多糖HMP-w1.1和HMP-a1.1进行结构性质的研究。结果表明:HMP-w1.1是分子量为36.3 kD的α型吡喃糖,单糖组成为甘露糖(Man),葡萄糖(Glc),半乳糖(Gal),岩藻糖(Fuc);HMP-a1.1是分子量为42.8 kD的β型吡喃糖,单糖组成为甘露糖(Man),半乳糖醛酸(GalUA),葡萄糖(Glc),半乳糖(Gal),岩藻糖(Fuc)。综合高碘酸氧化和Smith降解的试验结果,推断HMP-w1.1的糖苷键构型可能为1→、1→4、1→4,6、1→6、1→2、1→2,6;HMP-a1.1的糖苷键构型可能为1→6、1→2、1→2,6。     

响应面法优化微波辅助提取发酵虫草菌丝体多糖工艺

为优化发酵虫草菌粉多糖的微波辅助提取工艺,在单因素实验基础上,以液固比、微波功率以及提取时间为自变量,多糖提取率为响应值,采用中心组合设计的方法,研究各自变量及其交互作用对多糖提取率的影响。利用SAS软件和响应面分析相结合的方法对发酵虫草菌粉多糖的微波辅助提取工艺进行优化,确定了微波辅助提取多糖的最佳条件：液固比值12．2,微波功率650．5W,提取时间11．8min,在此条件下,多糖提取率达到6．41％。采用此法提取的虫草菌丝体多糖,当质量浓度为1mg／mL时,对二苯代苦味肼基自由基（DPPH）清除率达到76％。