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1.
天花粉蛋白Lys和Arg残基的化学修饰对其与IgE反应活性的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
用马来酸酐及环己二酮分别对天花粉蛋白上的Lys、Arg残基侧链进行修饰,并以竞争性酶免疫测定检查了化学修饰对TCS与小鼠抗TCS单抗TE-1(IgE型)反应活性的影响。两种修饰均使TCS与单抗TE-1反应活性下降。推测Lys残基可能直接参予了与单抗TE-1的结合。热变性实验提示TCS上单抗TE-1识别部位需要一定的空间构象。 相似文献
2.
天花粉蛋白的定点聚乙二醇修饰 总被引:3,自引:0,他引:3
用一种定点修饰天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的方法,将聚乙二醇(PEG)偶联到预先选定的位点.利用nTCS无半胱氨酸(Cys)残基这一特点,通过定点突变将一个Cys残基引入TCS以取代第7位的丝氨酸(Ser)残基.然后,与巯基反应的PEG-m aleim ide 即可偶联到新引入的Cys 残基上.经纯化得到均一的PEG-TCS复合物,在SDS-PAGE上显示一条区带,表观分子量为38 kD.复合物的体外致核糖体失活活性降低了6倍,但其体内引产活性与nTCS相同.定点PEG修饰方法为改造TCS提供了新途径. 相似文献
3.
报道了胸腺肽α_1活性片段Thymosinα_1[Lys(23)](23-27)OH和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。其氨基酸序列分别为H_2N-Lys-Glu-Glu-Ala-Glu-OH,用Thyα_1[Lys~(23)]表示,修饰物为Glu-OH),用Thyα_1[Lys~(23)]·R表示。HPLC测得该肽的纯度在90%以上,ESR谱测定自旋标记衍生物给出氮氧自由基信号,氨基酸组成与预期值相符。实验小鼠腹腔连续注射剂量为0.1、1、10、100和1000μg/kg的该肽10天后,发现腹腔巨噬细胞吞噬功能、ERFC阳性率及血清溶血素含量明显升高,且最佳剂量在0.1-10μg/kg范围。实验结果表明人工合成胸腺肽α_1活性片段及其自旋标记衍生物具有显著的免疫促进活性。 相似文献
4.
将大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶(ArgRS)上Lys306用基因点突变的方法分别变为Ala和Arg的密码子;得到变种基因args306KA和args306KR。变种基因重组在pUC18上,转化到大肠杆菌TG1中,转化子中ArgRS及其变种ArgRS306KA和ArgRS306KR所表达的蛋白量至少为TG1表达ArgRS蛋白量的100倍。细胞粗抽提液中ArgRS的比活TG1、转化子pUC18-args、pUC18-args306KA和pUC18-args306KR分别为1.65、210、1.8和38单位/毫克。结果表明ArsRS的Lys306为Ala取代使活力完全丧失;若被Arg取代,则活力丧失80%以上。Lys306为ArgRS活力所必需。 相似文献
5.
丝裂素活化蛋白激酶参与内皮素刺激的兔主动脉平滑肌细胞增生 总被引:11,自引:1,他引:10
内皮素(endothelin,ET)是已知的体内活性最强的缩血管物质,其缩血管作用由G蛋白偶联受体所介导。但ET强大的促血管平滑肌细胞(VSMC)增生效应的机理尚未完全阐明。本研究选用培养的兔胸主动脉VSMC,探讨丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)在ET促细胞增生中的作用。结果表明:ET-1呈时间和浓度依赖性地促进细胞摄取 ̄3H-TdR和激活MAPK,此作用可被蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)抑制剂Staurosporine(STP),H-7和ET_A受体拮抗剂BQ123所抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂HerbimycinA(Herb)所抑制,用PKC激动剂PMA(Phorbolmyristateacetate)预处理VSMC,使其PKC活性下调,可显著减弱ET-1对MAPK的激活能力。本结果提示:(1)MAPK参与ET-1所致的VSMC增生;(2)ET-1促细胞增生与激活MAPK的作用是由ET_A受体和PKC介导的。 相似文献
6.
[B3-Lys]-胰岛素的研究:受体结合及生物活性 总被引:3,自引:0,他引:3
本文用125T-[B3-Lys]-胰岛素和125Ⅰ-胰岛素研究了[B3-Lys]-胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜(HPM)胰岛素受体结合特性并进行了比较。实验结果表明[B3-Lys]-胰岛素与EPM胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的[B3-Lys]-胰岛素和猪胰岛素的IC(50)值分别为0.65和1.11nmol/L。经Scatchard分析得出[B3-Lys]-胰岛素与HPM胰岛素受体中高亲和位点和低亲和位点结合的亲和常数分别为1.72×109和2.27×106L/mol,而猪胰岛素分别为1.26×109和1.47×106/mol。促脂肪细胞合成脂肪实验结果表明[B3-Lys]-胰岛素也同样具有比天然猪胰岛素更高的离体生物活力,EC(50)分别为0.175和0.301nmol/L。可见[B3-Lys]-胰岛素的受体结合能力和高体生物活力都为猪胰岛素的1.7倍。 相似文献
7.
鸡减蛋综合征病毒(EDSV—76)基因组E1区结构特点分析 总被引:1,自引:0,他引:1
EDSV-76病毒中国株AA-2经常规方法提取其病毒DNA后,建立了限制性内切酶PstI水解片段的全基因文库。对其中PstI-G片段和PstI-A片段的正反链进行序列测定,获得EDSV E1区(0-8.8m.u)的核苷酸序列。经分析,EDSV E1区具有与其他腺病毒E1区类似的结构。以大于60个氨基酸残基为标准,EDSV E1区共有7个开放读码框架(ORF),其中R1、R2、ElbsT和E1b1T 相似文献
8.
用点突变的方法将大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶(ArgRS)的基因args上相应于Lys378和Lys381的密码AAA分别变为两氨酸的密码GCA和精氨酸的密码子CGT,得到了4个args的突变体args378KA,args378KR,args381KA和args381KR,将它们分别连接到pUC18上,转入大肠杆菌TG1,在TG1转化子中,ArgRS及其变种的表达量约为TG1中的120倍以上。结果表明Lys378为Arg和Ala取代分别使活力下降0%和10%;Lys381变为Ala和Arg后,活力分别下降33%和10%左右。Lys378不为酶活力必需。Lys381部位的正电荷对酶活力是重要的。 相似文献
9.
天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关. 相似文献
10.
一氧化氮抑制内皮素促血管平滑肌细胞增殖作用的信号转导途径 总被引:6,自引:0,他引:6
培养的家兔胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)分别以内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)前体L-Arg和NO供体SIN-1刺激,或用ET-1+L-Arg、ET-1+SIN-1联合刺激,测VSMC^3H-TdR掺入、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性及蛋白激酶C(PKC)活性的改变,以研究NO抑制ET-1促VSMC增殖作用的信号转导途径。结果表明:(1)ET-1 10^-8mol/L单独刺激,^3H- 相似文献
11.
内皮素(ET)是迄今所发现的最强的内源性血管收缩肽,它有三种异构体,其中ET-1不仅缩血管活性最强,而且对血管平滑肌细胞(VSMC)具有丝裂原作用。本文从ET-1的合成和分泌,对VSMC的增殖作用以及丝裂原信息传递途径三方面,综述了目前ET-1对VSMC增殖作用的研究进展。 相似文献
12.
缩短的人巨噬细胞集落刺激因子(M—CSF)在大肠杆菌中… 总被引:1,自引:1,他引:0
本文用聚合酶链反应(PCR)获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子cDNA基因,并克隆在质粒pAET3d中,在T7启动子指导下,在大肠杆菌BL2LysE中获得了和一个6组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合M-CSF表达量占菌体总蛋白的12%,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螯合新和层析一步纯化,所得的融合(His)6-M-CSF在还原型SDS-PAGE上基 相似文献
13.
用聚合酶链反应(PCR)以大肠杆菌JM83基因组DNA为模板,扩增了精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)基因。将该基因重组到载体pUC18上转化到大肠杆菌TG1中,得到在转化子中ArgRS的高表达。粗抽液中ArgRS的氨酰化活力,TG1和TG1转化子分别为1.65U/mg和210U/mg,后者为前者的127倍。DNA顺序测定表明,与从大肠杆菌JA200中克隆到的ArgRS基因相比913位碱基为A而不为C,这种变化使ArgRS的305位氨基酸残基由Gln变为Lys,但这种改变不影响酶的活力。 相似文献
14.
野花生豆凝集素(CML)经SephadexG-200测得分子量为103.OkD.用对二甲基氨基苯甲醛(DAB)为显色剂,测得每个CML分子含有5.9个色氨酸残基.在pH5.1,含8mol/L脲的醋酸缓冲液中,N-溴代丁二酰亚胺(NBS)可修饰CML分子中的5.6个色氨酸(Trp)残基,同时使CML的凝血活性完全丧失.用焦碳酸二乙酯(DEPC)和N-乙酰顺丁烯酰胺(NEM)分别修饰CML的组氨酸残基和半胱氨酸巯基后,CML的活性均无变化.CML在天然状态下荧光发射峰位于336nm处,用CML的专一性抑制糖N-乙酰半乳糖胺研究色氨酸的微环境,发现N-乙酰半乳糖胺可以淬灭CML中88%的色氨酸残基萤光,Stern-Volmer常数K=1.73L/mol.同时发现N-乙酰半乳糖胺能够保护CML,避免NBS对CML的修饰作用,表明色氨酸可能是CML维待活性所必需,并直接参与和专一性抑制糖的结合,其微环境较为疏水. 相似文献
15.
内皮素(ET)是迄今所发现的最强的内源性血管收缩肽,它有三种异构体,其中ET-1不仅缩血管活性最强,而且对血管平滑肌细胞(VSMC)具有丝裂原作用。本文从ET-1的合成和分泌,对VSMC的增殖作用以及丝裂原信息传递途径三方面,综述了目前ET-1对VSMC增殖作用的研究进展。 相似文献
16.
人白细胞介素—2第20位残基局部空间结构稳定性对活性的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
用寡核苷酸诱导的基因定位突变法,将人白细胞介素-2(IL-2)第20位Asp分别突变为Arg,Lys和Asn,比较第20位残基碱性基团对IL-2活力的影响,结果^20Asp突变为碱性残基时,IL-2活性急剧下降,但突变为Arg时所导致的活性下降较突变为Lys时所导致的活性下降较突变为Lys严重3000倍以上。从空间结构变化上对这2个碱性残基造成的如此大的活性差异进行了分析,发现^20Arg突变后对 相似文献
17.
大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的Lys306为酶活力所必需 总被引:2,自引:2,他引:0
将大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶(ArgRS)上Lys306用基因点突变的方法分别变为Ala和Arg的密码子,得到变种基因args306KA和args306KR。变种基因重组在pUC18上,转化到大肠杆菌TG1中,转化子中ArgRS及其变种ArgRS306KA和ArgRS306KR所表达的蛋白量生活为TG1表达ArgRS蛋白量的100倍。细胞粗抽提液中ArgRS的比活TG1,转化子pUC18-arg 相似文献
18.
野花生豆凝集素的化学修饰与荧光光谱研究 总被引:4,自引:0,他引:4
野花生豆凝集素(CML)经Sephadex G-200测得分子量为103.O kD。用对二甲基氨基苯甲醛(DAB)为显色剂,测得每个CML分子含有5.9个色氨酸残基。在pH5.1,含8mol/L脲的醋酸缓冲中,N-溴代丁二酰亚胺(NBS)可修饰CML分子中的5.6个色氨酸(Trp)残基,同时使CML的凝血活性完全丧失。用焦碳酸二乙酯(DEPC)和N-乙酰顺丁烯酰胺(NEM)分别修饰CML的组氨酸残 相似文献
19.
c-fos基因在内皮素-1促肺泡Ⅱ型细胞表面活性物质合成中的作用 总被引:17,自引:0,他引:17
应用反义技术探讨c-fos基因ET-1调控肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)表面活性物质(PS)合成的胞内信号转导中的作用,结果显示:(1)内皮素-1(ET-1)可提高ATⅡ细胞的^3H-胆碱掺入。(2)蛋白激酶C(PKC)激活剂PMA可使ATⅡ细胞的^3H-胆碱掺入量增加,PKC抑制剂H7可抑制ET-1的促PS合成效应。(3)ET-1和PMA可显著提高Fos蛋白表达量,H7和c-fos反义寡核苷酸(ODN) 相似文献
20.
本文用聚合酶链反应(PCR)获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子(编码3~149氨基酸)cDNA基因,并克隆在质粒pET3d中,在T7启动子指导下,在大肠杆菌BL21(DE3)LysE中获得了和一个6组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合m-CSF表达量占菌体总蛋白的12%,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螫合亲和层析一步纯化,所得的融合(His)6-M-CSF在还原型SDS-PAGE上基本呈一条均一的蛋白质条带。 相似文献