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1.
白细胞介素对大鼠离体垂体前叶细胞增殖的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
本工作采用大鼠垂体前叶(AP)细胞原代培养方法,以3HTdR掺入率反映细胞增殖水平,研究了IL1和IL6对AP细胞增殖的影响。结果表明:(1)IL1(1-100ng/ml)促进雄性大鼠和雌性大鼠AP细胞的增殖。(2)低浓度的IL6(0.1ng/ml)抑制雄性大鼠的AP细胞的增殖,而较高浓度的IL6(1-10ng/ml)则表现为刺激作用。(3)IL6(0.1-10ng/ml)促进雌性大鼠AP细胞的增殖。上述结果说明IL1和IL6除直接调控AP细胞的分泌外,也参与调节AP细胞增殖活动。 相似文献
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以 Cytopore 多孔微球固定产重组组织型纤溶酶原激活剂(rt P A) C H O 工程细胞株4 B3 ,在2 L 搅拌式生物反应器用无血清培养基 D F5 S 连续灌流培养。4 B3 细胞的最大活细胞密度和rt P A 生产水平分别达到883 ×106/ m L 和12473 I U/ m L。含rt P A 的4 B3 细胞培养上清经 M P G 吸附层析和 Lysinesepharose 4 B 亲和层析两步纯化,rt P A 的纯度达到98 % 。 相似文献
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用无血清培养基在填充床生物反应器生产 rHuEPO 总被引:2,自引:0,他引:2
在填充床生物反应器用含5%FBS的DMEM:F12培养基培养产重组人促红细胞生成素(rHuEPO)的细胞C28~10d后,使用自制的无血清生产培养基(SFMp)生产rHuEPO。SFMp培养基既能维持细胞生长,又能生产EPO,也便于纯化分离rHuEPO。使用填充床生物反应器培养细胞,能维持培养20~25d,rHuEPO表达水平达12~28.4mg/L之间,反应器的产率达到71.0mg/L/d,比滚瓶的产率增加12~14倍。葡萄糖最高消耗量达到21g/L/d,细胞培养密度最高达到3.0×107/ml以上,每次可收无血清培养上清80~87L。由于细胞被固定在聚酯片上,培养上清中脱落细胞很少。观察了反应器的乳酸和氨的含量,其结果表明乳酸和氨含量分别低于3.5g/L和5mmol/L,不影响产物的表达。经过多批培养和生长rHuEPO的结果表明,自行配制的SFMp培养基在该反应器能有效地维持细胞生长和生产rHuEPO。 相似文献
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黄芪多糖和白细胞介素2对LAK细胞毒活性的调节作用 总被引:5,自引:0,他引:5
采用扶正中药黄芪的有效成分黄芪多糖(APS)和不同来源的白细胞介素2的伍用,探讨其对LAK细胞毒性的调节作用,乳酸脱氢酶释放法(LDH)测定LAK细胞毒性的实验结果表明:APS自身具有增强LAK细胞毒性的作用,有效剂量范围为1μg/ml ̄100μg/ml;LAK细胞发挥细胞毒活性伍用一定剂量的白细胞介素2;APS(10μg/ml)和IL-2(500μ/ml)对LAK细胞毒性具有非常显著的协同增强作 相似文献
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t-PA cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
应用PCR方法,在tPAcDNA5′端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽,与酵母表达载体pPIC9重组,构建表达质粒pSTEY,利用LiCl转化法转化酵母菌YS108,在MM和MD平板上筛选表型,PCR筛选tPAcDNA与酵母染色体整合而形成的阳性克隆,阳性克隆经甲醇诱导表达后,用SDSPAGE证明表达产物的分子量为6kDa左右,用酪蛋白板溶圈法测定tPA的活性。Muts表型菌表达产物活性最高为2500IU/ml,Westernblot证实表达产物具有天然tPA分子的免疫原性。 相似文献
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产β1 ,4D甘露聚糖酶的诺卡氏菌形放线菌( Nocardioform actinomycetes) 菌株NA3540 ,发酵培养72h ,发酵液离心去菌体,上清经硫酸铵沉淀,95 % 乙醇沉淀,CMSephadex A50 柱层析、羟基磷灰石柱层析、DEAE纤维素离子交换及Sephadex G100 分子凝胶过滤柱等步骤,β甘露聚糖酶的比活提高了137 倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品。经SDSPAGE 和凝胶过滤法分别测定β甘露聚糖酶分子量为41kD和40kD,证明该酶为单聚体;用等电聚焦电泳测得其等电点为4-8 ;经氨基酸组成分析,发现蛋白中有较高含量的Gly、Asp、Ala 及Glu 残基。该酶的最适反应温度为75 ℃,在不超过60 ℃时酶活较稳定;酶反应的最适pH 为8-0 ,pH 稳定范围为6-5~11-0 。重金属离子Hg2+ 、Cu2+ 、Pb2+ 、Fe3+ 、Co2+ 、Zn2+ 能强烈抑制该酶活性,而Mn2+ 、Fe2+ 、Ag+ 对该酶有部分的抑制作用,低浓度的Na+ 、K+ 、Li+ 对该酶基本没有影响。 相似文献
9.
将bdnf基因克隆入逆转录病毒载体pLNCX,构建得到pLNC/BDNF,经PA317细胞包装后,感染大鼠成肌细胞L6TG,G418筛选2周后,得到稳定表达bdnf基因的细胞克隆L6TG/BDNF。DNA印迹结果证实bdnf基因已经整合入L6TG染色体中,RNA印迹和斑点印迹结果分别从mRNA水平和蛋白水平证明了bdnf基因的表达,且L6TG/BDNF培养上清中BDNF的含量约为25ng(106细胞数每ml每24h)。 相似文献
10.
抑制素α亚基片段P33对大鼠离体培养黄体细胞凋亡的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
我室先前的工作表明,抑制素α亚基片段P33显著抑制离体培养大鼠黄体细胞的孕酮分泌,整体实验显示P33促进黄体功能萎缩和细胞凋亡。本实验进一步在细胞水平探讨P33促进黄体细胞凋亡的作用机制。应用DNA电泳检测技术、DNA荧光(AOEBPI)染色和流式细胞分析方法观察了P33对PMSGhCG假孕大鼠胶原酶DNA酶分散的黄体细胞的自发凋亡的影响。结果三种方法一致显示,P33(1μg/ml)促进黄体细胞的自发凋亡。阻断酪氨酸蛋白激酶活性(genistein50μg)则抑制P33诱导的黄体凋亡;而阻断RNA和蛋白质合成(Cyx,50μg/ml;ActD,50μg/ml)均不抑制P33促进的黄体细胞凋亡。结果表明,P33促进培养大鼠黄体细胞的自发凋亡,其作用机制可能与TPK途径有关。本实验为抑制素α亚单位或其相关衍生物可能是卵巢局部调节因子之一的假说提供了又一证据。 相似文献
11.
发现一株新的AINPV,与已报道的明显不同。其多角体呈三角形,直径1.0~1.24μm,单粒包埋型,每多角体内含52~78个大小为298~375×41~56um的病毒粒子。核衣壳大小为280~358×36~45um。该病毒株具较强毒力,以2×106~2×107PIB/ml的浓度感染3龄幼虫,6d死亡率达84.2~92%,LC50为1×104PIB/ml,浓度与死亡率的回归方程为y=3.28+0.43x。 相似文献
12.
细胞粘附分子(CAM)可介导细胞间及细胞与间质之间的相互作用并传导信息,参与机体胚胎发育、免疫调节、炎症反应、组织修复及肿瘤转移等生理和病理过程。细胞间粘附分子1(ICAM1)是主要的CAM分子之一,可表达于活化的细胞,内皮细胞等。人膜是母体与胚胎滋养层直接接触的特殊组织、已发现蜕膜细胞在着床过程中参与了局部免疫耐受的形成,但对着床期ICAM1在蜕膜细胞表达的动态研究鲜见报道。本研究采用免疫荧光、多参数流式细胞术,分别从整体和局部角度、着床过程中外周血淋巴细胞(PBLC)及子宫内膜/蜕膜(EC/DC)细胞ICAM1的不同表达特点进行了动态观察和对比性分析。结果发现,ICAM1在着床期PBLC及EC/DC中的表达均存在明显的动态变化(Tab.1;Figs.1&2)。ICAM1在PBLC中的表达于妊娠第一天(D1)即开始降低,D2降至最低;与此不同,ICAM1在EC/DC中的表达于D2开始降低,D4降至最低,D5开始恢复,但尚未恢复到对照水平。结果表明,ICAM1在蜕膜局部的表达调节方式不同于外周血;ICAM1表达阳性的外周血,淋巴细胞和蜕膜细胞均代表着活化的功能性细胞,这些细胞表面ICAM 相似文献
13.
葡萄糖的添加对昆虫细胞Sf21悬浮生长的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
添加葡萄糖对昆虫细胞Sf21(Spodoptera frugiperda)悬浮生长的影响,发现补加糖量在lg/L时·能明显提高细胞生长的速度和最高密度,细胞最高密度由2.5×104/ml增加到4.9×106/ml; 朴加糖量在2g/L时,则有显著的抑制作用,即使增加接种密度.细胞生长的最高密度也只有2.1×106/ml。当采取流加葡萄糖方法来培养细胞时,则其生长的最大密度可提高到5.2×106/ml。 相似文献
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枯草芽孢杆菌B034拮抗蛋白的分离纯化及特性分析 总被引:29,自引:2,他引:29
枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)B034分离自水稻叶面,对水稻白叶枯病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液以70%饱和度硫酸铵沉淀所得的拮抗物粗提液对热稳定,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K、链霉蛋白酶E部分敏感,对氯仿部分敏感,其作用的活性pH范围低至4,高至12以上,比较耐碱性。粗提液经PhenylSepharoseCL4B柱层析、DEAESephacel柱层析和HPLC的Superdex75HR10/30柱层析,得到二个拮抗活性峰:P1和P2。P2经SDSPAGE和PAGEIEF电泳显示为单一蛋白带,分子量503kD,等电点625。自动Edman降解法从P2的N端测出残基序列为IleSerAsnProXIleAspVal 相似文献
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PIC-BE诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
β榄香烯吗素(PIC-BE)是抗癌新药β榄香烯的水溶性衍生物.采用人红白血病的多药耐药性(MDR)细胞株K562/ADM作为实验模型,观察PIC-BE对K562/ADM细胞的生长抑制和凋亡诱导作用,并进而研究其对该细胞MDR的可能影响.结果显示:(1)K562/ADM细胞对ADM具有明显的抗性,与K562细胞相比,抗性倍数约为40倍,而两者对PIC-BE的IC50接近,无显著差异;(2)PIC-BE(10.0~30.0μg/ml)对K562/ADM细胞具有明显的生长抑制和凋亡诱导作用,两种作用的强度在一定的范围内均具药物浓度和作用时间依赖性;(3)低毒剂量PIC-BE(10.0μg/ml)与ADM(4.0μg/ml)联合应用,可显著增强ADM对该细胞的生长抑制和凋亡诱导作用,升高细胞内ADM的浓度,降低该细胞对ADM的IC50,使该细胞对ADM的抗性有数倍逆转.上述结果提示,PIC-BE不仅是一种有效的广谱抗肿瘤剂,而且也是一种有效的MDR逆转剂 相似文献
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利用恒溶氧.补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组人骨形成蛋白-2A 总被引:9,自引:0,他引:9
对表达人骨形成蛋白2A(BMP2A)的重组大肠杆菌YK537/pDHB2m在500ml摇瓶中进行了培养条件的摸索实验,继后用5L自控发酵罐进行分批培养和分批补料培养,以获取rhBMP2A。两种培养方式结果比较表明,在培养过程中保持30%~40%左右的溶解氧和限制性流加葡萄糖可以使BMP2A的含量达到278g/L,最终菌体密度为OD60053(相当于干菌212g/L),重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的25%。该培养技术的关键是:(1)在培养过程中保持适当的溶解氧;(2)限制性流加葡萄糖;(3)42℃起始诱导的时间控制在对数生长中期,持续表达时间为4h;(4)细菌持续生长的比生长速率控制在03h1左右。 相似文献
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蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白提取及分离条件的选择 总被引:1,自引:0,他引:1
以蚕豆(ViciafabaL.)叶片下表皮为材料,比较TritonX100、冷丙酮和(NH4)2SO4对ABA结合蛋白(简称ABABP)的提取效果。结果表明:0.5%(W/V)TritonX100去垢剂提取的ABABP与ABA特异结合活性较高(0.487nmol/gprotein),维持结合活性的时间较长(4℃下反应40h保持最大结合的60%);而冷丙酮法提取的ABABP特异结合活性只有0.325nmol/gprotein,且容易失活,10h仅保持最大结合的30%左右。实验比较了各种盐离子对ABABP的影响,高盐(>300mmol/LNaCl)不利于ABABP的结合反应,低浓度KCl对ABABP活性略有促进。ABABP的结合活性需要介质中有一定量的Ca2+和Mg2+,用EDTA螯合介质中Mg2+、Ca2+后,ABABP活性大大降低,分别为最大结合的75%和60%。ABABP与ABA反应的最适pH在6.5,这些条件为亲和层析纯化ABABP提供了依据。 相似文献
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肝细胞生长因子刺激大鼠离体肝细胞DNA合成的剂量—与时间—效应 总被引:6,自引:1,他引:5
本工作采用3HTdR掺入DNA法观察重组人肝细胞生长因子(rhHGF)刺激大鼠离体肝细胞DNA合成的剂量与时间效应。实验结果表明:rhHGF是最强的促肝细胞分裂剂,在一定剂量范围内,rhHGF与肝细胞DNA合成有明显的量效关系。1ng/mlrhHGF即可引起3HTdR掺入显著增加(P<0.01),随剂量增加,刺激DNA合成的效应也随之增强;10ng/ml时3HTdR掺入量最大,较对照组高7倍(P<0.001),剂量再增加即出现抑制效应;rhHGF刺激肝细胞DNA合成存在时间效应关系,表现为rhHGF作用24h,DNA合成量明显高于对照组(P<0.01),48h作用达最高(P<0.001),随后开始下降,至96h下降到相当于24h的水平。 相似文献