硒对亚硝酸钠导致的草鱼肝细胞氧化损伤的保护作用

以草鱼(Ctenopharyngodon idella)肝细胞(L8824)为研究对象,设置对照组、亚硝酸钠暴露实验组、亚硒酸钠孵育实验组和亚硒酸钠孵育后亚硝酸钠暴露实验组,探讨亚硒酸钠对不同浓度亚硝酸钠诱导L8824细胞氧化损伤及凋亡的保护作用。结果显示,亚硝酸钠暴露能抑制L8824细胞贴壁,导致细胞凋亡率增加。亚硝酸钠暴露引致L8824细胞的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性降低;gpx、sod和cat基因表达下调(P<0.05), DNA损伤诱导转录物3(ddit3)和bcl-2相关X蛋白(bax)基因表达上调(P<0.05)。亚硒酸钠(10μmol/L)孵育L8824对细胞形态和凋亡率无显著影响,但GPX、SOD和CAT活性上升,gpx、sod、cat、核因子E2相关因子2(Nrf2)和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(keap1)基因表达上调(P<0.05)。亚硒酸钠孵育后亚硝酸钠暴露实验组,细胞凋亡率、GPX、SOD和CAT活性较对照组无显著变化,但B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)基因表达显著上调(P<0...     

亚硒酸钠和硒酸钠对小白菜生长生理特性的影响

以小白菜品种'秦白2号'为材料,采用盆栽试验研究了不同浓度亚硒酸钠[Se(IV)]和硒酸钠[Se(VI)]胁迫对小白菜生长生理特性的影响及其生理机制,为土壤硒污染修复及其合理开发利用提供理论依据.结果表明,Se(IV)≤10.0 mg·kg-1时,小白菜的叶长、叶宽显著下降,而生物量没有受到显著影响;Se(VI)≤1.0 mg·kg-1时,叶长、叶宽、生物量没有显著变化;更高浓度处理时,叶长、叶宽、生物量均随外源Se(IV)和Se(VI)处理浓度的增大而急速下降.Se(IV)≤40.0 mg·kg-1和Se(VI)≤20.0 mg·kg-1处理均对小白菜叶片叶绿素含量无显著影响,但更高浓度外源Se(IV)和Se(VI)却显著抑制了叶绿素合成.低浓度外源Se(IV)和Se(VI)均使小白菜叶片谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性上升,膜质过氧化物(MDA)含量下降,对超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性及脯氨酸含量无显著影响;高浓度硒使MDA含量、脯氨酸含量及SOD活性上升,而使GSH-Px活性和CAT活性下降;外源Se(IV)和Se(VI)均使过氧化物酶(POD)活性降低.研究发现,低浓度外源Se(IV)和Se(VI)均提高了小白菜的抗氧化作用,从而促进小白菜叶片叶绿素的合成和生长,高浓度时则相反;低浓度硒的抗氧化作用和高浓度硒的过氧化作用均以Se(VI)大于Se(IV).说明硒酸钠的有效性和毒害作用均大于亚硒酸钠.     

亚硒酸钠诱发的晶状体上皮细胞DNA损伤及修复

观察了亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）在体外作用于大鼠晶状体上皮细胞（ＲＬＥ ｃｅｌｌｓ）而造成的ＤＮＡ单链断裂（ＳＳＢ）,并对其ＤＮＡ损伤、修复动力学做了初步研究。发现ＳＳＢ严重程度与亚硒酸钠的浓度呈线性相关,其ＳＳＢ重接修复约在３０￣６０ｍｉｎ内完成,还作了有关非程序ＤＮＡ合居（ＵＤＳ）的检测,发现与ＳＳＢ相比,ＵＤＳ发生迟且持续时间更长,提示Ｎａ２ＳｅＯ３可能在体外对大鼠晶状体上皮细胞除造成ＳＳＢ     

亚硒酸钠对P16蛋白在Wistar大鼠生精细胞表达的影响

目的探讨亚硒酸钠对P16蛋白在Wistar大鼠生精细胞表达的影响.方法断乳雄性Wistar大鼠30只随即分为正常对照组、低硒(2mg/L)和高硒(4mg/L)组,连续饮用含硒水43周后,取大鼠睾丸组织,用免疫组织化学SP法显示P16蛋白在大鼠睾丸中的表达,并对免疫组织化学结果进行定性、定位、图像分析和统计学处理.结果P16蛋白主要表达在精原细胞和精子的核内,免疫组织化学阳性细胞的平均光密度(MOD)和面数密度(NA)加硒组略高于正常对照组(P>0.05).结论本实验结果提示:饮水中加入2mg/L,4mg/L亚硒酸钠对生精细胞P16蛋白的表达无显著的影响.     

亚硒酸钠对HepG2细胞脂质和葡萄糖代谢相关基因表达的影响

硒是人和动物必需的微量元素,不同浓度的硒可以调节猪、羔羊、小鼠、人和酵母中与脂质和葡萄糖代谢相关基因的表达水平,但是目前尚不清楚低剂量硒对HepG2细胞脂质和葡萄糖代谢相关基因的影响.因此,我们通过实时荧光定量PCR和基因组学分析,研究了亚硒酸钠对HepG2细胞中脂质和葡萄糖代谢相关基因表达水平的影响.结果表明,脂质代谢相关基因FAR1,DGKD和HILPDA在24h和36 h时表达增加,葡萄糖代谢相关基因UGDH,IRS-2和PEPCK在24 h和36 h时表达增加.与对照组相比,0.1 μmol/L亚硒酸钠处理HepG2细胞24 h可以增加TRAP1,HILPDA 和 PEPCK的表达水平,它们在肿瘤发生发展中起着重要的作用.此外,转录组学分析表明,亚硒酸钠可以改变代谢调控网络,包括萜类骨架的生物合成、胰岛素抵抗、磷酸肌醇代谢和细胞周期途径等.以上结果表明,0.1 μmol/L亚硒酸钠可能会影响HepG2细胞的脂质和葡萄糖代谢,影响肿瘤的发生发展.     

亚硒酸钠对大鼠晶体上皮细胞αA晶体蛋白基因转录的影响

在体外观察了亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）作用于大鼠晶体上皮细胞（ＲＬＥｃｅｌｌｓ）而引起其晶体蛋白基因转录的改变,对不同浓度的硒在体外对αＡ晶体蛋白基因转录的影响作了初步的研究,结果发现,随着亚硒酸钠浓度的升高,αＡ基因的转录下降;而当亚硒酸钠浓度升至５×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ时,αＡ基因的转录又呈反跳性回升,提示硒在致障过程中对晶体蛋白基因转录的影响作用不可忽视。同时αＡ晶体蛋白在晶体细胞内,至少应     

硒的抗癌机制研究——亚硒酸钠对环磷鸟苷的作用

 AFB_1和NDEA与正常小鼠肝切片培养5min即可使cGMP分别升高一倍及一倍半(p<0.001);当有Na_2SeO_3(1μg/mL培养液)存在时,此作用可被消除,单独加入Na_2SeO_3对cGMP无影响。培养介质中存在磷酸二酯酶抑制剂茶碱时,除cGMP基础水平提高外,上述作用均相同。荷腹水型肝癌(HepA)小鼠腹水细胞中cGMP比正常肝中cGMP水平高三倍,连续4天腹腔给硒(Na_2SeO_3、1mg/kg体重)可使癌细胞中cGMP下降一倍。此剂量对正常小鼠肝中cGMP无影响;Na_2SeO_3(1μg/mL)与腹水细胞在体外短时间培养时,对细胞存活无影响,却可使cGMP含量下降。     

草鱼催乳素抗血清的制备与鉴定

应用从草鱼垂体中分离纯化的催乳素免疫兔子制备了特异抗血清。用常规酶联免疫吸附测定法检测表明该抗血清与马哈鱼生长激素及促性腺激素完全没有交叉反应，而与草鱼生长湟级向弱交叉反应。免疫细胞化学染色表明该抗血清主要与草鱼垂体前叶催乳素细胞发生结合反应，与垂体间叶细胞有微弱染色反应，但与神经垂体琢垂体后叶细胞则完全没有免疫结合反应。     

长江中下游鲢鳙草青四大家鱼线粒体DNA多样性分析

对长江中、下游湖北石首、江西九江、安徽芜湖三江段鲢、鳙、草鱼、青鱼天然群体共３６５尾鱼的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的ＮＤ５／６、Ｃｙｔｂ基因和Ｄ－Ｌｏｏｐ区片段进行了限制性内切酶酶切片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：（１）长江中、下游鲢、鳙和青鱼的遗传多样性丰富，草鱼不甚丰富。发现鲢、鳙和青鱼的ｍｔＤＮＡ基因型分别有２８、１９、２７种，草鱼ｍｔＤＮＡ基因型仅见７种；鲢、鳙和青鱼的基因型多样性     

草鱼转铁蛋白基因的克隆及其组织表达

转铁蛋白(Transferrin,Tf)功能广泛,不仅参与机体内铁离子的运输和代谢,还在细胞呼吸、细胞生长和增殖中起重要作用,而且它具有抗菌杀菌的功能。研究从草鱼肝肾全长cDNA文库中克隆得到草鱼转铁蛋白基因(CtTf),该基因全长cDNA5′非编码区包含31bp,最大开放阅读框为2025bp,编码674个氨基酸,3′非编码区为266bp。研究使用了Signal P、SMART等在线软件对草鱼转铁蛋白全长cDNA的分子特征进行预测,结果显示CtTf编码的蛋白质N-端有1个由15个氨基酸残基组成的信号肽,第24-334个和第338-665个氨基酸为2个保守的结构域,二者同源率为31%。与其他物种的转铁蛋白类似,草鱼转铁蛋白每个结构域包含4个铁离子结合位点,它们在两个结构域中的位置相对保守,除了这8个铁离子结合位点外,还存在多个完全保守的氨基酸位点。草鱼转铁蛋白与人及其他物种有很高的同源性,与其他鲤科鱼类的同源性为65%-73%;与海洋鱼类同源性为43%-50%;与两栖、爬行、鸟类、哺乳类的同源性为40%-42%。系统进化树也显示草鱼转铁蛋白基因与斑马鱼和鲤鱼的亲缘关系最近。RT-PCR的实验结果表明,在草鱼肝、肠、肾、脾、心、肌肉、鳃和脑8种组织中,草鱼转铁蛋白基因在肝中的表达量最高,其次为脾和肠,在鳃和脑中有痕量表达。       

四种抗脂肪肝物质降低草鱼肝胰脏脂质积累的替代关系

采用１１种添加不同水平的蛋氨酸（Ｍｅｔ）,胆碱（Ｃｈ）甜菜碱（Ｂｅｔ）和大豆卵磷脂（Ｌｅｃ）的饲料饲养初始体重约１５ｇ的草鱼,研究了它们降低草鱼肝胰脏脂质积累的相互替代关系,１１种饲料中这四种物质的含量分别为（％）：（１）１．１Ｍｅｔ０．０８Ｃｈ,（２）１．１Ｍｅｔ０．３３Ｃｈ,（３）１．３Ｍｅｔ０．２３Ｃｈ,（４）１．５Ｍｅｔ０．１３Ｃｈ,（５）１．３Ｍｅｔ０．１３Ｃｈ,（６）１．３Ｍｅｔ０．１     

草鱼早期胚胎胚盘细胞表面微区元素的研究

本文应用扫描电镜Ｘ射线能量色散分析技术,对草鱼早期胚胎胚盘区细胞的表面元素进行了分析,结果表明：（１）草鱼胚胎细胞表面含有Ｎａ,Ｍｇ,Ａｌ,Ｓ,Ｃｌ,Ｋ和Ｃａ（２）七种元素在胚胎各期的相对含量是不同的,并且各种元素在胚胎发育中的变化曲线也是不同的。     

饼形碘泡虫在草鱼苗体内发育各阶段的显微及超微结构

饼形碘泡虫是一种引起草鱼苗肠道疾病的病原体,主要寄生在草鱼苗前肠的绒毛固有膜内。通过光学显微镜、电子显微镜观察,在不同日龄的病鱼组织中可见到单核营养体,核分裂,多核营养体及孢质分割的单产孢体或双产孢体,极囊形成,孢壳组合及孢囊产生等过程。在27-30℃的水温中,该寄生虫在鱼体内发育成熟需要12-15天。透射电镜观察到成熟孢子有丰富的粗面内质网,糖原体,近极囊处各有一个略呈三角形的核,两个黑色的圆形体。极囊内极丝为4-5圈。通过扫描电镜观察到孢子的缝脊较凸出,每办孢壳各有一极丝孔。从裂开的孢子里还见到细胞质。     

EPA对草鱼前体脂肪细胞增殖分化的影响

体外培养草鱼前体脂肪细胞,并用不同浓度(0-100 μmol/L)二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)进行处理,噻唑兰比色法(Methyl thiazolte trazoliu,MTT)和油红O染色提取法检测EPA对细胞增殖及分化的影响,Real-time qPCR检测过氧化物酶增殖激活受体家族(Peroxidase proliferation activated receptor,PPARs)、脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase,LPL)、过氧化物酶体增殖激活受体γ辅助活化因子1α (Peroxisome proliferatoractivated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)等基因的表达情况.结果显示,不同浓度EPA在2d内均显著促进草鱼前体脂肪细胞增殖(P＜0.05);不同浓度EPA处理ld后均显著抑制草鱼前体脂肪细胞分化(P＜0.05),且100μmol/L EPA处理细胞2d可显著促进LPL和PGC-1α基因的表达(P＜0.05).研究表明,EPA可促进草鱼前体脂肪细胞增殖,抑制其分化,该抑制作用与其调控PGC-1α、LPL等脂代谢基因的表达有关.     

草鱼、鲤、鲢、鳙和尼罗罗非鱼肝胰脏和肠道蛋白酶活性的初步探讨

草鱼、鲤、鲢、鳙肝胰脏和肠蛋白酶的最适pH值分别为8.7、8.7、7.6、7.6和8.4、8.7、8.0、8.4。草鱼、鲤和尼罗罗非鱼的肝胰脏蛋白酶活性比肠的高;鲢和鳙的肝胰脏蛋白酶的活性却比肠的低;尼罗罗非鱼胃的蛋白酶活性明显高于肝胰脏和肠的。草鱼、鲤和尼罗罗非鱼的肝胰脏蛋白酶活性明显高于鲢和鳙的;5种鱼的肠蛋白酶活性,鲤最高,尼罗罗非鱼最低,草鱼、鲢、鳙和尼罗罗非鱼间蛋白酶活性无明显差异。草鱼、鲤、鲢和尼罗罗非鱼的肠蛋白酶活性由前向后递减,而鳙的则以中肠活性最高。     

草鱼IgM、IgD 和IgZ 的抗体制备与组织表达分析

根据已报道的草鱼免疫球蛋白IgM、IgZ 和IgD 的序列设计表达引物进行PCR 扩增, 将扩增片段克隆至表达载体pET-32a, 并在大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)中进行诱导表达。利用亲和层析法纯化表达的重组蛋白, 然后免疫日本大耳白兔, 获得兔抗IgM、IgZ 和IgD 的抗血清。经免疫印迹检测, 表明IgM、IgZ 和IgD的表达产物能够被兔多克隆抗体特异性识别。应用兔抗草鱼IgM 和IgZ 的多克隆抗体, 对草鱼多种器官、组织提取的总蛋白进行免疫印迹检测, 在肠、头肾、中肾、皮肤、脾脏、脑、鳃和血液中都检测到IgM 和IgZ的表达。