糖化酶发酵工艺条件的正交试验

本文以糖化酶高产菌种ＷＭＣ—１５为供试菌株,采用正交试验的方法对糖化酶发酵培养基配方进行了系统的分析和研究。通过正交试验获得一最优摇瓶发酵培养基配方Ａ４Ｂ３Ｃ４Ｄ２,并建立了多因素的线回归方程,为糖化酶发酵。艺条件的研究提供了理论基础。     

纤维素酶产生菌和糖化酶产生菌液体混合发酵的研究

应用正交试验设计研究了糖化酶高产菌株黑曲霉UV-11(Aspergillus niger UV-11)和纤维素酶高产菌株黑曲霉F_(27)(A.niger F_27)液体混合发酵条件。结果表明,发酵液糖化酶活力为6500U/ml,CMC酶活力为99mg葡萄糖/ml·h。与UV-11单菌发酵相比,糖化酶活力提高16％,CMC酶活力提高266％。     

菠萝果蛋白酶生产工艺的改进

本试验研究了菠萝果蛋白酶生产工艺中的各个重要环节。结果表明:用0.08～0.1％的丹宁作沉淀剂较适宜,既可保持产品质量,又可兼顾产品产量;酶膏在-12℃以下低温冻结和真空干燥两个因素能显著提高产品酶活性;1000 ug/g硫代硫酸钠加62.5 ug/g半胱氨酸是菠萝果蛋白酶活性的有效保护剂,可使酶活性比对照提高32.57％;提取过程中用抗坏血酸、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠和醋酸锌溶液对酶复合物进行洗涤可有效地提高产品的活性和质量。     

我国商品糖化酶酶制剂中分解生淀粉糖化酶活力的比较

共收集国内有代表性酶制剂厂生产的糖化酶商品样２１份,测定其分解生淀粉糖化酶活力结果表明,万单位糖化酶含分解生淀粉糖化酶活力最高样品为１０８３８单位,最低为１０３９单位,平均为５４５０单位。取分解生淀粉糖化酶活力高、中、低的样品,进行了生淀粉吸附分离,并经凝胶电泳鉴定,其吸附的酶与测定的酶活力高低相符。     

玉米原料无蒸煮酒精发酵工艺的研究

在玉米原料无蒸煮酒精发酵过程中,添加少量的纤维素酶,酸性蛋白酶可提高糖化酶对生淀粉的糖化作用,减少糖化酶用量。在料水比１：２．５,糖化酶加量２００ｕ／ｇ,纤维素酶加量５ｕ／ｇ,酸性蛋白酶加量０．０１％,３０℃,ｐＨ３．５条件下,Ｎｏ．２１４菌株经９６ｈ发酵,醪液酒精度达１２．８％,淀粉利用率达９２．１％。     

食品级液体浓缩糖化酶制剂的研究

每毫升1万单位的黑曲霉UV—11糖化酶液体曲,经粗滤后,再经硅藻土处理,过滤液清晰透明,5倍超滤浓缩,添加稳定剂和防腐剂,在室温下保温半年,该产品酶存活率在90％以上。制剂质量达到食用级标准。     

固体发酵饲料糖化酶

糖化酶是目前生产量最大、应用最广泛的工业酶制剂之一。糖化酶是以液体发酵方法生产,经过各种复杂的后处理过程得到精制产品。在饲料工业中使用如此高纯度、高成本的精制酶制剂将增高饲料成本。为降低生产成本,本室研究了固体培养生产糖化酶的生产工艺,并且对酶学性质进行了研究。1　材料和方法11　菌种:ＨＷ717、ＨＷ056、ＨＷ039等,本所微生物研究室保存。12　固体发酵方法:以250ｍｌ三角瓶装固体培养基(湿基)10ｇ,基础培养基组成:麸皮中添加2%的硫酸铵。培养基在1ｋｇｆ/ｃｍ2压力下灭菌30ｍｉｎ后使用。以0.2%接种量接种,在28℃下静止…     

黑曲霉糖化酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadez G—150凝胶过滤等方法,从黑曲霉AS 3.4309变异株B-11的发酵液中分离出三种电泳均一的糖化酶(GI、Gill、GII)。其收率分别为0.8％、50％和18．6％。GI、Gill和GII的分子量分别为27000、67000和53000;等电点分别为3.38、3.52和3．59;含糖量分别为8．7％．13．6％和18．3％;最适pH分别为4.4、4．6和4.6;对可溶性淀粉的Km值分别为2．0、0．77和1．18g／L;二级结构中a-螺旋含量分别为18．4％、23．9％和28．9％;最适温度均为70℃。生淀粉可吸附Gill,吸附率达80％。此外还测定了三种同工酶的氨基酸组成及含量。GI、GII和GIII均由一条多肽链组成。     

携多拷贝glaA的重组黑曲霉过量合成糖化酶的研究

以工业生产菌株黑曲霉CICIMF0410基因组DNA为模板,扩增出糖化酶glaA基因,测序并进行表达研究。GlaA基因的核苷酸序列长为2167bp,包含4个内含子。氨基酸序列比对表明此黑曲霉糖化酶与其他曲霉属来源的糖化酶有很高的同源性。将glaA基因克隆到pBC-Hygro载体中,构建重组质粒pBC-Hygro-glaA并转化A.nigerF0410。携多拷贝glaA的转化子用150μg/mL潮霉素抗性筛选并通过荧光实时定量PCR鉴定。结果表明,在染色体整合2~3倍糖化酶基因对糖化酶的过量合成是适宜的,有助于提高糖化酶活力。对转化子进行摇瓶发酵研究,发酵终止时转化子GB0506的糖化酶活力比出发菌株F0410提高了17.5%。因此,增加黑曲霉染色体糖化酶基因的拷贝数可以显著提高糖化酶活力。     

糖化酶及其基因研究进展

论述了糖化酶的产生、酶的性质和分子结构,以及糖化酶对淀粉的作用机制,并且介绍了利用基因工程技术构建糖化酶工程菌的研究进展。     

产糖化酶黑曲霉固定化方法比较的研究

采用海藻酸钙凝胶电埋法、以沸石、多孔聚酯等材料为固定化载体的吸附法固定黑曲霉（Aspergillus niger AS3.4309)菌丝细胞,以游离菌丝体作为对照,进行发酵产糖化酶的比较,结果表明：以聚酯泡沫作为固定化载体吸附固定化菌丝细胞产糖化酶活力最高。在产糖化酶的发酵过程中,与游离菌丝体细胞相比,固定化黑曲霉持续产酶时间有一定程度的延长。