ANP的C型受体的功能

加拿大蒙特利尔临床医学研究所Madhu B.Anand Srivastava等发现心房性钠利尿肽(ANP)C受体参与通过腺苷酸环化酶的细胞信息传递,并在6月26日在加拿大蒙特利尔召开的第13次国际高血压学会上报告了这一发现.在增加ANP作用方面,ANPC型受体曾被认为有阻断剂的效果,美国加利福尼亚生物技术公司和美国孟山都公司都打算开     

C型利钠利尿肽与心血管疾病

C型利钠利尿肽（CNP）是利钠利尿肽家族的第三个成员,CNP主要是由血管内皮分泌,与血管平滑肌细胞NRP－B受体结合激活颗粒型鸟苷酸环化酶,促进细胞内cGMP水平升高而起作用。除能舒张血管外还具有抑制平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质形成等心血管效应,并以自分泌和旁分泌的方式参与血管重逆,在心血管疾病的发生发展中具有重要的病生理意义,可能是内源性抗损伤因素之一。     

心钠肽在小鼠卵巢中的表达及其对受精的影响

目的探讨心钠肽（ANP）在小鼠卵泡发育过程中的表达定位以及其对体外受精的影响。方法应用免疫组织化学对小鼠卵巢切片进行染色,检测ANP在卵泡不同发育阶段的表达情况。利用ANP受体A的拮抗剂anantin检测ANP在小鼠体外受精中的作用。结果在卵泡生长和分化期,ANP广泛地存在于间质细胞、内膜细胞、颗粒细胞、卵丘细胞、卵母细胞以及黄体细胞的胞质中,特别是在排卵前卵泡中的卵丘细胞上其表达最强;经ANP受体A的拮抗剂anantin孵育后的小鼠精子,其体外受精的卵裂率与对照组相比显著下降（58.7±4.3 vs.92.3±2.1,P〈0.01）,但是对胚胎后来的发育没有影响。结论卵丘细胞中表达的ANP可能通过受体A参与了小鼠的受精过程。     

纳米复合佐剂的抗肿瘤免疫调控作用及效果研究

目的:探究纳米复合佐剂在肿瘤内的免疫调控作用及抗肿瘤效果。方法:制备包载CpG的β葡聚糖纳米颗粒(CNP),体外培养小鼠骨髓来源的树突细胞(BMDC),分5组进行体外免疫处理,分别为PBS对照组、β葡聚糖组、β葡聚糖纳米载体(NP)组、CpG组和CNP组,利用流式仪分析BMDC成熟情况。将体外培养的黑色素瘤B16F10细胞接种于C57BL/6N小鼠右后肢皮下,建立肿瘤模型,第6 d挑选肿瘤大小相对一致的24只小鼠均分为4组,即PBS组、NP组、CpG组、CNP组进行治疗,后颈部皮下注射给药,共给药4次,每次间隔3 d,期间隔天测量肿瘤体积,最后一次给药后第3 d眼眶取血,测定血浆中γ干扰素(IFN-γ)浓度,处死小鼠后分离肿瘤及脾脏,流式细胞术检测瘤内浸润性T淋巴细胞比例及脾脏内T细胞比例。结果:CNP佐剂处理后BMDC成熟比例约为CpG佐剂组的2.8倍。在小鼠体内接种肿瘤15 d后,CNP治疗组肿瘤体积较其他组均减小,血浆中IFN-γ含量显著高于其他实验组,约为CpG组的1.5倍,肿瘤浸润性T淋巴细胞与其他组相比也有明显升高。结论:构建的葡聚糖-CpG纳米复合佐剂能够有效激活BMDC,改善肿瘤微环境,具有良好的体内抗肿瘤效果。     

TNF-α小分子抑制剂C87的纳米药物制备及其体内外活性研究

该研究首先制备并表征包载TNF-α小分子抑制剂C87的纳米粒子,进而评价其在L929细胞和小鼠自身免疫性肝损伤模型中抑制TNF-α细胞毒性的作用。采用纳米沉淀法制备载C87的纳米粒子(C87 NP),并对其理化性质及体外释放行为进行表征;在L929细胞中用MTT法分析C87 NP拮抗TNF-α细胞毒作用的效果;经尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠发生自身免疫性肝损伤,采用C87 NP预给药方式,防治小鼠自身免疫性肝损伤;使用LEGENDplex?分析小鼠血清中13种细胞因子的表达水平;流式细胞术分析肝和脾中T细胞及亚群、NK细胞等的分布、比例和数量。制备出的C87 NP具有较高(34.4%)的载药量,且稳定性好,其包封率为48.1%,C87 NP平均粒径为82.57 nm,多分散系数为0.115,呈电中性,透射电镜结果显示其为球形结构;该纳米粒子可在体外持续缓慢释放C87,持续时间不少于8 h;C87 NP可以在体外抑制TNF-α对L929细胞的杀伤能力(IC_(50)=9.13 μmol/L),并呈浓度依赖性;动物实验结果显示,C87 NP治疗组小鼠的存活率为66.7%,进一步的生化和病理分析结果表明,ConA小鼠尾静脉给药12 h后,C87 NP预防性给药能显著降低血清中ALT、AST与部分细胞因子的水平(P0.01),减轻肝损伤,减少CD4~+T、CD8~+T、NK细胞等对肝脾的浸润(P0.01),提高脾脏Treg细胞比例(P0.05)。该研究成功制备出纳米药物C87 NP,且C87 NP在体内外具有良好的抑制TNF-α细胞毒性的作用,这为小分子药物C87今后在临床上的应用奠定了基础。     

C-型钠尿肽与血管损伤性疾病

C-型钠尿肽(C-type natriuretic peptide, CNP)作为钠尿肽家系的一员, 主要是由血管内皮分泌,CNP与血管平滑肌细胞钠尿肽受体-B(NPR-B)结合,激活颗粒型鸟苷酸环化酶,促进细胞内cGMP 水平升高,以旁分泌和/或自分泌方式调节循环系统功能稳态.CNP广泛分布于血管系统,尤其在内皮细胞中高表达.CNP具有利钠、利尿、调节血管张力、抑制血管平滑肌细胞迁移、增殖等作用,与高血压、动脉粥样硬化、血栓形成、冠脉成形术后再狭窄和血管钙化等多种血管损伤性疾病密切相关.     

C 型钠尿肽对糖尿病兔下肢动脉硬化的影响及机制研究

目的:探讨C型钠尿肽(CNP)对糖尿病兔下肢动脉硬化的影响作用及其机制。方法:选取成功建模的糖尿病兔30只,随机分为A组(球囊损伤组)、B组(对照组)和CNP干预组各10只,分别抽取三组糖尿病兔术前1 d、术后1 d、7 d、14 d、28 d的血浆测定CNP及C反应蛋白水平(CRP)。并于术后第28 d处死三组糖尿病兔观察股动脉腔的狭窄程度及股动脉组织中环磷鸟苷(cGMP)、环磷鸟苷依赖蛋白(PKGⅠa)含量。结果:三组糖尿病兔术后28 d的cGMP、PKGⅠa差异显著(P0.05);A组的cGMP、PKGⅠa显著低于B组和CNP干预组(P0.05);术后第1 d、7 d、14 d三组CRP含量差异显著,A组显著高于B组和CNP干预组(P0.05);术后第1 d、7 d、14 d、28 d A组CNP含量显著高于B组(P0.05);三组间管腔面积两两比较差异显著(P0.05);A组中膜面积、内膜面积显著高于B组和CNP干预组(P0.05)。结论:CNP对糖尿病兔股动脉狭窄有一定的抑制作用,可能与其抑制CRP、提高cGMP及PKGⅠa水平有一定关系。     

C型钠尿肽的扩血管作用及机制

目的和方法：用常规离体血管灌流方法,观察钠尿肽家族新成员C型钠尿钛（CNP）对家兔腹主静脉及腹主动脉的作用及作用机制。结果：CNP在10^-1-10^-6mol/L浓度范围内对家兔静脉及动脉均呈剂量依赖性的舒张效应。其对静脉的作用与硝酸甘油（NTG）相似,且扩血管作用无ANP强,以腹主动脉为主对象分别施加阿托品（10^-7mol/L）,酚妥拉明（20μg）或消炎痛（20μg）等均不影响CNP的舒血管作用,优降糖和心得安可明显降低CNP对腹主动脉的舒张作用。CNP在基础状态下提前加入不抑制NE的缩血管反应。结论：CNP可能是一种静脉系统的扩张剂,同时亦是调节动脉张力的选择性调节肽,CNP舒血管作用机制至少有两途径：一是与K^ -ATP通道的开放有关,二是与激活β受体有关。     

发现内皮素A型受体拮抗剂

万有制药中央研究所与探索研究所共同从微生物中筛选出与血管内皮细胞产生的血管收缩肽、内皮素(ET)的A型受体(ET_A受体)特异结合、没有生理作用的物质(拮抗剂),并确定了其构造。这一成果为世界首创。通过分子设计开发使受体的亲和性提高140倍的物质,继体外实验之后,小鼠体内试验发现了ET受体拮抗剂的作用。ET受体拮抗剂将来有可能成为与ET有关的高血压和气喘病的治疗药。也可有助于阐明ET和疾患的关系。这项成果已在东京召开的第46届日本生物化学大会上发表。该小组使用大量表达ET_A受体的猪大动脉平滑肌培养细胞,从爱知县土壤中采收的微生物产物中找出     

BMP2诱导C3H10细胞成骨分化的TGF-βⅠ型受体的体外分析

筛选和分析与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体.利用显性负性突变型TGF-βⅠ型受体竞争抑制配体功能的特性,运用碱性磷酸酶定量测定、Real time PCR等方法,初步筛选出可能与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的的TGF-βⅠ型受体,随后运用RNA干扰的方法抑制相应TGF-βⅠ型受体的表达,进一步证实相关TGF-βⅠ型受体与BMP2发挥诱导成骨活性的关系.结果证实,显性负性突变的ALK3和ALK6能够抑制BMP2诱导的C3H10细胞成骨分化;RNA干扰抑制ALK3或(和)ALK6表达后,BMP2诱导C3H10细胞向成骨分化的趋势受到抑制.因此,ALK3和ALK6是与BMP2诱导C3H10细胞成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体.     

逆转录病毒载体表达的膜型免疫球蛋白介导B细胞受体细胞信号传导

B细胞的激活是通过B细胞受体与其特异性抗原的结合引起,并引发后续的信号级联反应.深入了解这一重要事件的分子机制是免疫学研究的重要目标.嵌合B细胞受体是B细胞信号功能研究的有效工具.然而,这一方法仅适用于工具细胞,不能被用于体内研究.本研究构建了能同时表达针对特异性抗原的膜型免疫球蛋白的重链和轻链的逆转录病毒载体,通过逆转录病毒载体将这一膜型免疫球蛋白表达在原始B淋巴细胞膜上.结果证实,通过逆转录病毒载体表达的膜型免疫球蛋白能引发B细胞受体的信号转导,可引发B细胞受体下游Syk和Erk1/2蛋白的磷酸化.本研究进一步表明,B淋巴细胞表达的膜型免疫球蛋白在体外和体内均能与特异性抗原结合并导致细胞增殖.因此,本研究提供了一个能在体外和体内快速方便地分析B细胞受体下游信号级联反应的方法,这一方法将有助于更深入地研究与B细胞功能相关的各种蛋白.     

杆状病毒表面展示甲型流感病毒核蛋白的免疫原性及保护效果的初步评价

流感病毒的核蛋白(Nucleoprotein,NP)高度保守,具有型特异性,能够诱导产生细胞介导的免疫应答,从而起到保护作用,抵抗不同亚型流感病毒的攻击。本研究利用杆状病毒表面展示技术,将杆状病毒GP64蛋白的信号肽(Signal peptide,SP)和胞质尾(Cytoplasmic tail,CT)与甲型流感病毒(A/Hubei/1/2010(H5H1))的NP蛋白融合表达,从而将NP蛋白展示在杆状病毒的表面,并对该病毒NP蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。Westernblot实验证明NP蛋白可以在Sf9细胞中有效表达。免疫电镜试验显示NP蛋白已成功展示在杆状病毒表面。通过小鼠感染实验,ELISA结果证明NP疫苗可以诱导产生高水平的IgG血清抗体。ELISPOT结果表明NP蛋白的2个细胞免疫抗原表位(NP57-66IQNSITIERM和NP441-450RTEIIKMMES)可以诱导小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ,利用NP57-66、NP441-450和NP蛋白均可刺激CD4+和CD8+T细胞产生IFN-γ,但主要以CD8+诱导为主,表明重组病毒可以产生有效的细胞免疫反应。利用小鼠鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)进行攻毒实验,结果表明该重组病毒感染小鼠后可以降低小鼠肺病毒载量,减轻肺组织损伤,减少体重下降,并可以保护50%小鼠存活。     

从鳝鱼心房分离出第4NP

日本北里大学医学部讲师竹井祥郎与肽研究所、住友金属工业公司协作,从鳝鱼心房分离出新的钠利尿肽(NP)并测定了结构,竹井等把这种肽定为第4NP,命名为VNP,VNP前体的cDNA也克隆成功.这项成果于2月14～15日在大阪召开的第6次ANP研究会上发表. 这种VNP与现有的NP族不同,大量存在于心室.如在人体内找出与VNP相同的NP,就可能开发与心功能不全等疾患有关的治疗药和诊断药.     

利钠肽家族基因与心血管疾病研究新进展

利钠肽家族是一组由心肌细胞分泌的激素,主要包括A型、B型和C型利钠肽,具有相似的基因结构和生理学效应,可对心血管系统产生血压调节、抗心肌肥厚、抗心肌纤维化和抗心肌弛缓等保护作用。利钠肽受体A、B和C亦介导多种生理活性,调节心血管稳态。利钠肽受体A选择性结合A型、B型利钠肽。利钠肽受体B结合C型利钠肽。利钠肽受体C结合各型利钠肽,通过受体介导的内化和退化作用清除血液循环中利钠肽。对利钠肽家族及其受体基因单核甘酸多态性及功能研究显示,其与多种心血管疾病(房颤、高血压、心力衰竭等)的易感性相关。利钠肽家族及其受体基因缺失的转基因小鼠表现为心肌肥厚、心肌纤维化,与高血压、心肌病及心力衰竭的发生发展相关。各种导致心肌肥厚和缺血性损伤的刺激均参与利钠肽及其受体基因的表达调控。临床将脑钠肽作为左室功能障碍和心力衰竭失代偿的一个预测指标。静脉注射重组脑钠肽已经成为治疗急性心力衰竭的有效手段。深入了解利钠肽家族基因变异及其信号调控有助于探索心血管疾病的病理生理机制,为临床诊疗开辟新思路。     

利钠肽家族基因与心血管疾病研究新进展

利钠肽家族是一组由心肌细胞分泌的激素, 主要包括A型、B型和C型利钠肽, 具有相似的基因结构和生理学效应, 可对心血管系统产生血压调节、抗心肌肥厚、抗心肌纤维化和抗心肌弛缓等保护作用。利钠肽受体A、B和C亦介导多种生理活性, 调节心血管稳态。利钠肽受体A选择性结合A型、B型利钠肽。利钠肽受体B结合C型利钠肽。利钠肽受体C结合各型利钠肽, 通过受体介导的内化和退化作用清除血液循环中利钠肽。对利钠肽家族及其受体基因单核甘酸多态性及功能研究显示, 其与多种心血管疾病(房颤、高血压、心力衰竭等)的易感性相关。利钠肽家族及其受体基因缺失的转基因小鼠表现为心肌肥厚、心肌纤维化, 与高血压、心肌病及心力衰竭的发生发展相关。各种导致心肌肥厚和缺血性损伤的刺激均参与利钠肽及其受体基因的表达调控。临床将脑钠肽作为左室功能障碍和心力衰竭失代偿的一个预测指标。静脉注射重组脑钠肽已经成为治疗急性心力衰竭的有效手段。深入了解利钠肽家族基因变异及其信号调控有助于探索心血管疾病的病理生理机制, 为临床诊疗开辟新思路。     

Wee1B蛋白S15位点突变抑制小鼠1-细胞期受精卵的发育

为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A（Ser突变成Ala）/D（Ser突变成Asp）突变体,体外转录成mRNAs. 对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S期,显微注射Wee1B-WT(野生型)/KD（激酶失活型)-mRNAs和突变体Wee1B-S15A/D-mRNAs,观察其对受精卵发育、有丝分裂促进因子（MPF）活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果表明,过表达Wee1B -WT和Wee1B-S15A/D可有效抑制受精卵有丝分裂进程,明显降低卵裂率. 过表达模拟磷酸化的突变明显抑制MPF的活性,CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致. 因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Wee1B蛋白S15位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式.     

小鼠脑组织腺苷A2A受体缺失模型的建立与评价

制备了脑组织腺苷A2A受体基因缺失的小鼠模型并对该模型进行评价。在采用2次6.2 Gy X线间隔照射对敲除A2A受体基因的雌性C57BL/6小鼠进行清髓处理后, 将野生型雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞移植到其体内, 使其脑组织的A2A受体仍保持缺失型。然后对移植效果进行鉴定, 并对模型的生理指标进行观察和评价。结果发现: 骨髓移植6周后, 受体小鼠的白细胞性染色体基因由雌性变为雄性; 骨髓中A2A受体阳性细胞率为94.85%, 而脑内A2A受体mRNA与A2A受体基因敲除小鼠比较, 无显著差异。模型小鼠除心率略低于野生型小鼠外, 在呼吸频率、脑含水量以及脑内谷氨酸含量等生理指标上均与野生型小鼠和A2A基因敲除小鼠无显著差异。     

小鼠脑组织腺苷A2A受体缺失模型的建立与评价

制备了脑组织腺苷A2A受体基因缺失的小鼠模型并对该模型进行评价。在采用2次6.2 Gy X线间隔照射对敲除A2A受体基因的雌性C57BL/6小鼠进行清髓处理后, 将野生型雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞移植到其体内, 使其脑组织的A2A受体仍保持缺失型。然后对移植效果进行鉴定, 并对模型的生理指标进行观察和评价。结果发现: 骨髓移植6周后, 受体小鼠的白细胞性染色体基因由雌性变为雄性; 骨髓中A2A受体阳性细胞率为94.85%, 而脑内A2A受体mRNA与A2A受体基因敲除小鼠比较, 无显著差异。模型小鼠除心率略低于野生型小鼠外, 在呼吸频率、脑含水量以及脑内谷氨酸含量等生理指标上均与野生型小鼠和A2A基因敲除小鼠无显著差异。     

脊髓A1型星形胶质细胞在外周炎性痛中的动态变化

目的研究外周炎性痛小鼠痛行为以及脊髓A1型星形胶质细胞的动态变化,为阐明炎性痛的病理机制提供实验基础及理论依据。方法雄性C57BL/6小鼠16只,分为对照组8只和炎性痛组8只。小鼠右侧足底注射完全弗氏佐剂(CFA)建立外周炎性痛模型,对照组右侧足底注射相同体积生理盐水。在造模前以及造模后第1、3、5、7天检测小鼠机械刺激缩足阈值(MWT)和辐射热刺激缩爪潜伏期(PWL)的变化。以逆转录聚合酶链反应检测A1、A2型星形胶质细胞标志物在炎性痛不同时程脊髓内的动态表达变化。用免疫荧光法检测小鼠脊髓背角GFAP形态以明确星形胶质细胞激活,同时统计脊髓背角A1型星形胶质细胞标志物C3与GFAP共定位水平。结果炎性痛小鼠造模后患侧MWT、PWL均明显下降,小鼠出现机械性痛觉超敏与热痛觉过敏;且在造模后第3天,脊髓背角GFAP表达开始升高,表达量为1.84±0.10 vs 1.08±0.22(P0.05);炎性痛第7天,A1型星形胶质细胞标志物Serping1、H2-T23的mRNA水平均显著升高(P0.05),A2型星形胶质细胞标志物S100a10、Ptx3的mRNA水平降低(P0.05);炎性痛组小鼠脊髓背角星形胶质细胞内C3的表达增加(P0.05)。结论炎性痛小鼠脊髓反应性星形胶质细胞向A1型极化增加,提示A1型星形胶质细胞可能参与了炎性痛的发生发展。     

用补体控制因子阻止异种移植排斥反应

京都府立医科大学第2外科教授周隆宏、赤见敏和和东雪基础研究所小组确认表达人补体抑制因子CD59基因的小鼠细胞株可避免人淋巴细胞的攻击。如能抑制排斥反应,将使异种移植的实用化前进一大步。赤见等于9月在东京召开的日本移植学会上发表了这项成果。该小组将阻碍补体反应的终因子(C9因子)活化的人细胞表面分子CD59的cDNA导入小鼠细胞株(A31)。重组A31细胞与人血清反应时,由补体介导的细胞障碍随血清浓度不同(3～25％)而抑制程度不同(浓度8％时能抑制94％、浓度25％抑制47％)。异种移植的最大难关是超急性排斥反应。在移植患者的血液流入移植脏器血管的同时引起排斥反应。