影响木薯次生胚状体发生及植株再生因素的研究

研究了在外植体的不同发育阶段中,碳源以及不同的生长激素配比对木薯次生胚状体诱导及植株再生的影响。结果表明：以固体成熟培养基上生长１５ｄ的胚状体子叶为外植体,次生胚状体的产量最高,达２９．３个成熟胚状体／１个外植体。在次生胚状体的诱导阶段,以麦芽糖（４０ｇ／Ｌ）代替蔗糖作碳源,能同时提高次生胚状体的产量（３２．５个胚次体／１个外植体）及植株再生频率（７４．３％）。２,４－Ｄ与ＰＰ３３３;（０．１ｍｇ／Ｌ）配合能提高植株再生频率到７７．６％。２,４－Ｄ与ＢＡＰ（２ｍｇ／Ｌ）或激动素（２．０ｍｇ／Ｌ）配合则大大降低了胚状体诱导及植株再生频率。     

无融合生殖油菜AMR—1花托离体培养的研究

报道了不同激素浓度对无融合生殖没菜花托器官分化效果的研究,结果显示：（１）以ＭＳ为基本培养基,以带有子房和花柄的花托为外植体离体培养,花托、花柄切口部位直接芽诱导的最佳激素配比为４．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．０１ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ,频率为５８．８２％,花托、花柄部位先形成愈伤组织,继而分化出丛生芽的最佳激素配比为５．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ,频率为８４．００％;（２）腋芽增殖的最佳     

外源激素对风信子再生花芽发育的控制

外源激素在诱导再生花芽花器官发生和控制它们的数目中的关键作用被进一步证实。首先通过２ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．１ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ的激素组合诱导风信子Ｈｙａｃｉｎｔｈｕｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ Ｌ．ｃｖ．Ｗｈｉｔｅ ｐｅａｒｌ）花芽从花被外植体发生,然后保持这种激素浓度,成功地控制了１００多片花被片的连续发生（自然情况下一个风信子花芽仅有６片花被片）。改变激素浓度（２ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０～０．０     

在1／3海水培养基上筛选豆瓣菜耐盐变异体

系统地研究了豆瓣菜（ＮａｓｔｕｒｔｉｕｍｏｆｆｉｃａｉｎａｌｅＲ．Ｂｒ）茎段外植体对６－ＢＡ,ＮＡＡ和２,４－Ｄ的反应,确定了ＭＳ培养基附加６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ为豆瓣菜愈伤组织诱导,继代培养基;ＭＳ培养基附加６－ＢＡ４．０ｍｇ／Ｌ为芽再生培养基;ＭＳ基本培养基为植株的生根的扦插繁殖培养基,将３２５个豆瓣菜茎切段外植体接种到含１／３海水的愈伤组织诱导培养基上,１７块外植体     

秦艽体细胞愈伤组织诱导及继代研究

本文报道了秦艽取叶、幼苗为外植体诱导愈伤组织试验。结果表明,取幼苗６７－Ⅴ培养基,２４－Ｄ２５ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,诱导频率最优,可高达１００％。继代培养,以６７％培养基,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,２４－Ｄ（１－１５）ｍｇ／Ｌ最优     

云南松成熟胚的体细胞胚胎的发生研究

云南松（Ｐｉｎｕｓ ｙｕｎｎａｎｅｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ）是我国特产的一种优良森林树种。本研究采用云南松成熟合子胚为起始外植体,在含２,４－Ｄ１０ｍｇ／Ｌ,ＫＴ和ＢＡ各４ｍｇ／Ｌ的改良Ｐ６培养基上得到胚发生培养物。将白色半透明的胚性愈伤组织（含早期原胚）在含２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＫＴ和ＢＡ各０．４ｍｇ／Ｌ的培养基上保持并增殖。在附加９,０００ｍｇ／Ｌ肌醇的高渗培养基（含ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ,ＫＴ     

风信子花被外植体年龄对花器官分化的影响

离体培养风信子（ＨｙａｃｉｎｔｈｕｓｏｒｉｅｎｔａｌｉｓＬ．）不同年龄的花被外植体诱导花器官直接再生的实验表明：１．在ＭＳ附加６ＢＡ２ｍｇ／Ｌ、２,４Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上,年龄Ｖ的外植体大量衰老,基本丧失器官再生能力,处于年龄段ＩＩ～ＩＶ的外植体可发生玻璃化反应。２．玻璃化反应的外植体转移至ＭＳ附加６ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ０．００５ｍｇ／Ｌ的培养基上继续培养３０ｄ后可再生正常的花被片,表明降低培养基中外源激素浓度能够阻止玻璃化反应继续发生。３．在ＭＳ附加６ＢＡ２ｍｇ／Ｌ、２,４Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上,外植体形态学下部可再生雌蕊状早期结构。平均每块外植体分化雌蕊状早期结构数以年龄Ⅲ的外植体最多     

本立芦荟组织培养pH分化特性及快速繁殖的研究

以木立芦荟的叶片、叶鞘、带腋芽的茎段为外植体进行试管培养,结果叶鞘和茎段可诱导形成愈伤组织,腋芽直接萌生。经试验筛选出各增减阶段最适宜的培养基为：⑴愈伤组织诱导,ＭＳ＋ＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１５ｍｇｌ;⑵腋芽萌生,ＭＳ＋ＢＡ０．３－０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１５ｍｇ／Ｌ;⑶丛生芽分化及继代,ＭＳ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１０ｍｇ／Ｌ;⑷生根,ＭＳ＋ＢＡ０．３－０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０     

南苜蓿组织和原生质体培养及转化试验

主要探讨南苜宿子叶和下胚轴外植体,子叶原生岳体培养中的器官发生及遗传转化。南苜蓿子叶和下胚细外植体培养在附加１ＡＡ０．５－１ｍｇ／Ｌ和细胞分裂素（ＢＡ或ＺＴ）０．５－２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上,在有当照的条件下诱导形成不定芽,进而再生成完整植株。子叶原生质体培养在附加２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ和ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ的Ｂ５液体培养基中,细胞分裂频率可达３０－４１％,原生质全来源的愈伤组织在ＭＳＢ培养基（Ｍ     

香艳梨离体培养研究

本试验以香艳梨的茎尖,不带芽茎段,带芽茎段,叶片,叶柄为试材,以１／２ＭＳ为基本培养基,分别附加０．５～２．０ｍｇ／Ｌ的６－卡基氨基嘌呤（６－ＢＡ）和０．１ｍｇ／Ｌ的萘乙酸（ＮＡＡ）、吲哚乙酸（ＩＡＡ）,２,４－二氯苯氧乙酸（２,４－Ｄ）进行离体培养研究。结果表明,试材用０．１％ＨｇＣｌ２灭菌５～６分钟为宜;在７月份接种感染率低,愈伤组织形成较快;茎尖,不带芽茎段,带芽茎段,叶片均可作为离体培养的外植体,叶片的脱分化,分化的效果尤为明显,叶柄不宜作外植体;１／２ＭＳ＋１．５ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ＋０．１ｍｇ·Ｌ－１ＮＡＡ有利于脱分化;１／２ＭＳ＋１．０ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ有利于分化;瓶外生根优于瓶内生根。本试验可为香艳梨的工厂化育苗提供参考。     

亳芍茎尖组织培养的研究

选取亳芍茎尖为试验材料,探究不同培养条件对亳芍组织培养的影响,结果表明:亳芍茎尖在1/2MS+6-BA 1.0 mg/L培养基上培养39 d后,茎尖分化出芽的同时也形成较多的丛生芽;丛生芽在1/2MS+6-BA1.0mg/L培养基上增殖速度最快;来自不同启动培养基上的丛生芽在相同培养基上,接种15 d后观察,不同来源的丛生芽长势不同,30 d后仍存在一定的差异;幼苗在1/2MS+IBA 0.1生根效果最好。     

柱花草nptII、hpt和bar基因优化转化体系的建立

以热研5号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.Ryan No.5)为材料,系统地研究了不同选择标记基因NptII,hpt和bar的柱花草转化体系.研究发现柱花草最适合基因转化的外植体是幼苗下胚轴.最佳愈伤组织形成和愈伤组织分化培养基为M S+NAA 1.0m g/L+6B-A4.0m gL/+3%蔗糖,pH6.最适宜外植体生根培养基是MS+N AA0mg/L+3%蔗糖(pH6).Glufosinate选择压力为0.15m g/L,Kanam ycin选择压力为20mg/L,Hygrom ycin选择压力为15m g/L.在以上的优化转化系统中,柱花草幼苗下胚轴分别侵染带NptII,hpt和bar基因的农杆菌(GV 3101)后,可获得30%愈伤组织具有kanamycin抗性,5%愈伤组织具有Hygromycin抗性,50%的愈伤组织具有Glufosinate抗性.     

桃下胚轴高频离体再生体系的建立及优化

以6个桃品种的下胚轴为外植体,研究不同基因型、不同基本培养基及植物生长调节物质组合等对桃下胚轴离体再生不定芽的影响.结果显示:不同基因型桃下胚轴再生率差异显著;QL为'97-8-4'和'甜桃王'的最适基本培养基,MS为'金童5号'的最适基本培养基;植物生长调节物质用2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA或单独使用2.0 mg/L BA的再生效果好.'97-8-4'在QL+2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA+100 mg/L肌醇的培养基中再生率最高,为94.44%;'甜桃王' 在QL+2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA+100 mg/L肌醇+500 mg/L CH的培养基中再生率最高,为80.42%;'金童5号'在QL+2.0 mg/L BA+0.04 mg/L NAA+200 mg/L肌醇的培养基中再生率最高,为78.00%.     

小麦遗传转化受体系统建立的研究

选用‘小偃22’和‘宁春16’小麦品种的成熟胚和幼胚进行培养,研究不同种类的胚和培养因子对愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,幼胚和成熟胚的愈伤组织诱导率无明显差异,但较高浓度的2,4-D有利于成熟胚的诱导,而幼胚培养时2,4-D浓度的影响效果因品种而异;两种外植体分化率的高低与KT/IAA的配比均有密切关系,但高浓度的激素水平不利于成熟胚的分化;诱导培养基中低浓度的2,4-D有利于所诱导的愈伤组织的分化。同时,在诱导培养基中添加低浓度的KT能显著提高两品种成熟胚愈伤组织的分化率;各种培养基处理与品种间都存在显著的互作效应,‘小偃22’成熟胚培养的最佳培养基组合为MSD 3.0 mg/L 2,4-D和MSD 0.5 mg/LIAA 1.0 mg/L KT,幼胚培养为MSD 4.0 mg/L 2,4-D和MSD 0.5 mg/L IAA 1.0 mg/L KT;‘宁春16’成熟胚培养为MSD 4.0 mg/L 2,4-D和MSD 1.0 mg/L IAA 1.0 mg/L KT,幼胚培养时为MSD 1.0 mg/L 2,4-D和MSD 2.0 mg/L IAA 2.0 mg/L KT。     

根癌农杆菌介导转化谷子的影响因素

利用GUS报告基因,建立了农杆菌介导的谷子(Setaria italica)遗传转化体系,并研究了多种影响因素对转化效率的影响,包括受体基因型、外植体类型、菌液浓度、培养基中乙酰丁香酮的浓度、侵染时间和共培养时间.确定了最优的转化条件为:以谷子幼穗诱导的愈伤组织为外植体,用低浓度的农杆菌菌液侵染30～40min,然后在含有0.1mmol/L乙酰丁香酮的LS培养基上共培养2d.     

杂景天愈伤组织诱导及红景天苷测定

以杂景天的子叶、胚轴为外植体,接种在附加不同激素组合的MS培养基上诱导愈伤组织产生,愈伤组织经继代培养后,用高效液相色谱检测红景天苷含量.结果显示,杂景天的子叶是诱导愈伤组织的理想外植体,子叶在MS 1 mg/L BA 0.5 mg/L 2,4-D和MS 1 mg/L BA 0.5 mg/L NAA培养基上的愈伤组织诱导率较高(81.8%、80%).愈伤组织有红、绿2种类型.HPLC检测显示红色愈伤组织不含红景天苷,绿色愈伤组织红景天苷含量为0.288 6%.表明利用组织培养生产红景天苷是可行的.     

平阳霉素对小菊品种离体培养的影响

利用0、1、2、4、8 mg/L平阳霉素（PYM）对小菊品种‘意大利红’、‘银星’离体培养的叶片和茎段进行诱变处理20d后,再转移到不添加PYM的培养基中进行愈伤组织的诱导和分化.结果表明：PYM对‘意大利红’、‘银星’叶片和茎段愈伤组织的诱导和分化具有明显的抑制作用;随着PYM浓度的增加,2个品种叶片与茎段愈伤组织的诱导和分化均呈明显的下降趋势,8 mg/L PYM处理后的愈伤组织诱导率和分化率均为最低;2种不同来源的外植体相比,茎段的愈伤组织诱导率和分化率均高于叶片;2个品种相比,‘银星’的愈伤组织诱导率和分化率高于‘意大利红’;品种与PYM浓度的互作、外植体类型与PYM浓度的互作以及品种、外植体、平阳霉素浓度三者的互作也对愈伤组织的诱导率和分化率产生不同的影响,但品种与外植体类型互作对愈伤组织的诱导率和分化率的F测验结果无显著性差异.     

向日葵离体再生体系的建立

为了建立高效的向日葵离体再生体系,从基因差异、外植体取材、生长素和细胞分裂素浓度、附加物的添加等方面出发,对向日葵愈伤诱导、分化、生根等过程进行了系统优化。结果表明：杂交材料相对于自交材料更容易实现再生;最佳外植体是生长4 d的子叶;最佳愈伤诱导培养基是MS培养基 (MS) +2.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤 (6-BA)+0.5 mg/L奈乙酸 (NAA)+1.0 mg/L激动素 (KT),诱导率最高可达100％;最佳分化培养基是MS+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+0.3 mg/L硝酸银 (AgNO3)+0.2 g/L活性炭 (AC),芽分化率可达71％;最佳生根培养基是1/2 MS+0.6 mg/L吲哆丁酸 (IBA),生根率最高为77％。方差分析表明,材料基因型、外植体生长时间、激素、AgNO3、AC对向日葵再生呈现显著性影响。     

三尖杉外植体来源与培养基成分对愈伤组织生长的影响

为了建立和优化获得有效生物碱成分的三尖杉愈伤组织的培养技术和方法,以大连地区移栽自庐山植物园的三尖杉(Cephalotaxus)植株为原料,就外植体种类、基本培养基种类、激素种类和浓度等因素对愈伤组织诱导、生长的影响进行了系统的研究和归纳。实验发现,幼茎外植体因其出愈率早、诱导率高而最佳;培养基MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导率达91%,继代培养基中一定浓度的NAA(1.0～3.0mg/L)有利于愈伤组织的产生,但是高浓度的NAA(8.0mg/L)则对愈伤组织的生长有抑制作用,其在MS基础培养基上较在B5和1/2MS培养基上褐化轻,生物量增长快,冬季诱导的愈伤组织,其诱导率普遍高于夏季所诱导的愈伤组织。结果表明,以11月份三尖杉幼茎为外植体,以MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为诱导培养基和继代培养基,继代6～8代,每代培养30～35d,收获愈伤组织或细胞培养物,该程序是获得大量三尖杉愈伤组织的较佳培养程序。     

一种快速、高效花生植株再生体系的建立

快速、高效、重复性好的植株再生体系是转基因育种的基础;本研究以14份不同花生品种的胚小叶为外植体,利用不同激素浓度、组合和不同花生基因型筛选最佳芽诱导培养基、伸长培养基和高效再生基因型。结果表明最佳丛生芽诱导培养基为MSB;＋0．2mg·L-1NAA＋6mg·L-1 6-BA,诱导率为89．50％;最佳伸长培养基为MSB5＋0．2mg.L-1 NAA＋3mg’L-1 6-BA和MSB;＋O．2mg·L～NAA＋4mg·L-1 6-BA＋2mg·L～GA,交替培养,每个丛生芽伸长数达到7．24,时间缩短至3-4周。不同品种再生率的变幅在25．51％～93．01％,大于80％的品种有‘麻油1-1’、‘弗落蔓生’、‘濮花23号’、‘海花1号’。利用‘弗落蔓生’在15周内得到了生根组培苗。