抗人细胞角蛋白7(CK7)单克隆抗体的制备及鉴定

用KLH偶联合成细胞角蛋白7(CK7)优势表位多肽片段（C14）免疫小鼠,经细胞融合技术制备CK7单克隆抗体（mAb）,并收集临床组织进行免疫组化鉴定。C14多肽作为抗原具有良好的免疫反应性。本研究共获得了3株能稳定分泌抗CK7抗体的单克隆细胞株,选择亲和力较好的7A8单克隆抗体进行免疫组化鉴定,结果表明,本研究筛选的7A8单克隆抗体的质量浓度为0.49μg/mL时,与收集的临床标本均有良好的特异性反应,低于医院常用CK7检测试剂盒中抗体质量浓度2～5μg/mL,表现出较高的灵敏度。本研究筛选的7A8单克隆抗体为研发CK7快速诊断试剂提供了关键的原材料。     

BRCA1基因在人食管癌中的表达

目的本研究利用组织芯片检测BRCA1基因在人食管癌中的表达与食管癌的生长、分化和转移等临床特征的关系,期望找到BRCA1与食管癌发生、发展的关系。方法收集48例食管癌患者标本,分别取其肿瘤组织、癌前病变组织及正常组织制成组织微阵列,免疫组织化学SP法检测BRCA1蛋白的表达,分析BRCA1在各种组织的表达特点及其与肿瘤的关系。选择其中10例患者的上述组织的新鲜标本,采用Western blot检测BRCA1蛋白的表达。结果免疫组织化学结果显示,BRCA1在肿瘤组织阳性占70.50%,癌前组织阳性占43.10%,正常组织阳性占39.00%,食管癌组织与癌前病变组织、食管癌组织与正常组织相比BRCA1的表达均存在显著差异（P〈0.01）。BRCA1的表达与食管癌的病理分化有统计学上的差异（P〈0.05）。Western blot显示,BRCA1在食管癌肿瘤组织、癌前病变组织及正常组织中表达量依次降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;BRCA1在高、中、低分化程度的食管癌组织中表达量依次降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论BRCA1与食管癌发生发展有关,BRCA1的表达与食管癌的分化呈正相关。     

人转化生长因子β1 cDNA在COS－7细胞中的表达

在测定了ＴＧＦβ１全长序列的基础上,构建了两个ＴＧＦβ１的表达载体ｐＣＭＶβ和ｐＳＶＬβ;分别从转录水平和翻译水平检测了这两个载体在ＣＯＳ－７细胞中的表达。同时利用ＣＯＳ－７短暂表达系统,建立了ＴＧＦβ１的生物测活法;并分别研究了上清收获时间、表达载体、转染方法对ＴＧＦβ１表达的影响     

Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶在大肠杆菌中的表达及其初步纯化

Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶(RT)在抗病毒感染及AIDS治疗药物的设计中是一个重要的靶分子,并且可作为工具酶应用于逆转录PCR等分子生物学研究中。本研究将HIV-1RT基因经PCR扩增并修饰后克隆入大肠杆菌表达载体pBV220,所获重组子所表达的HIV-1RT蛋白占菌体总蛋白的8％左右,且经[~3H]dTTP掺入法证实该重组HIV-1RT具有RT聚合酶活性。用Q-Sepharose层析柱对重组HIV-1RT蛋白进行了初步纯化,所获纯化样品的RT聚合酶比活性(1.7×10~4U/mg)比纯化前的裂解上清提高612倍。     

B7-H1和B7-H4在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)中B7-H1和B7-H4的表达及其临床意义,并为OSCC的临床诊断、治疗、判断预后及预防等提供依据。方法:采用免疫组织化学S-P法检测B7-H1及B7-H4在60例OSCC及20例非肿瘤患者正常口腔黏膜组织(NOM)中的表达情况,分析两者与OSCC临床病理特征的相关性。结果:B7-H1在OSCC组织中表达显著高于在NOM组织中表达(29例,48.3%v4例,20%,x~2=4.969,P0.05);B7-H4在OSCC组织中表达亦显著高于在NOM组织中表达(31例,51.7%v5例,25%,x~2=4.310,P0.05)。B7-H1与B7-H4在OSCC组织的表达都与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度显著相关(P0.05),而与年龄、性别及肿瘤直径大小等无关。OSCC组织中B7-H1和B7-H4的高表达呈显著性正相关性(x~2=5.613 P0.05),60例组织中B7-H1和B7-H4共表达现象有11例(18.3%),NOM中未发现两者共表达现象。结论:B7-H1和B7-H4过表达与OSCC发生、发展及预后有关,可以作为预后指标。     

人胰腺内分泌细胞中CD 57免疫反应性的表达

CD57是一种分子量为110 KD的糖蛋白,它是人类自然杀伤细胞(NK)和杀伤细胞(K)的特异性表面抗原。用它免疫小鼠产生的抗CD57单克隆抗体可特异性识别人的NK 和K 细胞表面抗原。本文应用ABC 免疫组织化学染色结合葡萄糖氧化酶DAB-硫酸镍铵显色技术研究了CD 57在人胰腺的表达和分布。结果发现,CD 57免疫反应(CD 57一IR)细胞主要分布在胰腺的内分泌部(胰岛),偶见于胰腺外分泌部的腺泡和导管上皮中。多数CD 57-IR 细胞呈典型内分泌细胞的形态特征。相邻切片法证明大多数Glu,SS,HPP 和PS 免疫反应细胞呈CD 57阳性。胰腺内神经纤维亦呈CD 57阳性。少数呈CD 57阳性的NK 和K 细胞散布在胰腺结缔组织中。本文对CD 57免疫反应性在人胰腺内分泌细胞中表达的意义进行了讨论。     

Bmi-1和EZH2基因在小细胞肺癌中的表达及其意义

目的探讨Bmi-1和EZH2基因在小细胞肺癌中的表达及其意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2006-2009年非小细胞肺癌存档蜡块40例,采用免疫组织化学S-P法检测40例非小细胞肺癌及癌旁组织中Bmi-1和EZH2基因的表达水平,并采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对Bmi-1和EZH2基因的表达进行定量分析,用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果 1.Bmi-1在非小细胞肺癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达。非小细胞肺癌组织Bm i-1的表达明显高于癌旁组织,差异有显著性(P<0.05)。2.EZH2基因的表达EZH2基因在非小细胞肺癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达。非小细胞肺癌组织中EZH2基因的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。结论 EZH2和Bmi-1基因对肺癌的生长有着不同的调节作用,在肺癌的发生、发展中发挥重要的作用。     

人转化生长因子β1cDNA在COS—7细胞中的表达

在测定了ＴＧＦβ１全长序列的基础上,构建了两个ＴＧＦβ１的表达载达ｐＣＭＶβ和ｐＳＶＬβ;分别从转录水平和翻译水平检测了这两个载本在ＣＯＳ－７细胞中的表达。同时利用ＣＯＳ－７短暂表达系统,建立了ＴＧＦβ１的生物测活法;并分别研究了上清收获时间、表达载体、转染方法对ＴＧＦβ１表达的影响。     

Egr-1在小鼠和人组织中的表达及其与细胞增殖的关系

目的：探讨早期生长反应基因－1（Egr-1）在小鼠和人体组织和细胞中的表达及其与细胞增殖的联系,方法：应用原位杂交和免疫组织化学法对小鼠和人的不同组织进行Egr-1检测。结果：Egr-1mRNA和Egr-1蛋白阳性信号呈棕褐色。位于细胞浆和细胞核,生长活跃和增生的细胞可见相对的Egr-1表达。结论：Egr-1mRNA和Egr-1蛋白的高表达主要在生长活跃和增生的细胞,与细胞增殖有密切的关系。     

小鼠基质重塑相关7(MXRA7)基因产物在肝内互作蛋白质的鉴定（英文）

基质重塑相关7(matrix remodeling associated 7,MXRA7)基因于2002年被命名,但无论在人类或其他动物体系,该基因或其蛋白质产物的功能均未知。直至我们最近的研究表明,该基因可能参与眼睛发育或肝损伤及修复。在本研究中,应用酵母双杂交策略,用小鼠MXRA7诱饵载体对小鼠肝cDNA文库进行筛选,发现23种蛋白质(MUP1, Cpt1a, Mat1a, aldh1l1, Cytb, H2-K1, Psmb1, marc2, Atp5j2, Sec24D, Trf, Rdh7, Apoe, Glud1, Gmfb, Alb, Hdlbp, Pzp, Etnk2, Nrn1, Serpina1a, Apoa2, GNMT)可能直接或间接地与MXRA7蛋白发生相互作用。其中,主要尿蛋白1(major urinary protein,MUP1)或其同家族蛋白质占所有候选克隆的1/6,提示其很可能是小鼠肝内与MXRA7蛋白有较强相互作用的蛋白质。通过基因重组在Hepa 1-6肝癌细胞系中同时过表达MXRA7和MUP1蛋白,荧光染色证明这两种蛋白质在细胞内共定位,应用抗MXRA7或MUP1的抗体进行Pull-down检测,则证明二者共同存在于细胞裂解液中。另外,重组MXRA7蛋白和MUP1蛋白在无任何其他蛋白质的缓冲液体系中直接形成复合体。因此,至少在小鼠肝组织体系中,MXRA7蛋白可能通过与MUP1等蛋白质的相互作用而发挥作用。     

两种爬行动物胃肠道内分泌细胞的免疫组织化学比较研究

目的研究七种胃肠激素内分泌细胞在多疣壁虎及石龙子胃肠道的定位及分布。应用S-P免疫组织化学方法。方法结果5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)细胞在两种爬行动物胃肠道各段均有分布,但分布型各不相同;生长抑素(Somatostatin,SS)细胞仅在多疣壁虎胃贲门至十二指肠段分布,而石龙子胃肠道各段均有分布;胃泌素(Gastrin,Gas)细胞分布于多疣壁虎十二指肠和空肠段,石龙子则仅分布于胃幽门部;胰高血糖素(Glucagon,Glu)细胞和P-物质(Substance P,SP)细胞均分布于多疣壁虎胃中各段,而石龙子胰高血糖素细胞分布于回肠、直肠及胃体处,P-物质细胞则分布于除空肠外的胃肠道各段;胰岛素(Insulin,Ins)细胞和胰多肽(Pancreatic polypeptide,PP)细胞在两种爬行动物胃肠道各段均未检出。结论两种爬行动物胃肠道内分泌细胞的分布既存在着一定共性,体现了两消化生理的共同点;同时也存在着较大的种间差异。     

中华竹鼠胃肠道内分泌细胞分布型的研究

本文用免疫组织化学方法（ＰＡＰ法）对１０种ＧＩＥＣ在中华竹鼠（Ｒｈｉｚｏｍｙｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）１５个胃肠段中的分布作了观察和统计分析,以探讨中华竹鼠胃肠内分泌细胞与其特殊食性的适应关系．结果表明：中华竹鼠胃肠中可能至少有７种免疫反应活性内分泌细胞。与大熊猫相比,尽管都以竹类为主食,但由于取食行为不同,它们ＧＩＥＣ的分布型不尽相同．这些结果从一定程度上表明ＧＩＥＣ的分布不仅与食物组成相关。也可能与取食行为有关。     

中国对虾和日本沼虾胃肠道内分泌细胞的鉴别与比较

<正>甲壳动物的蜕皮、繁殖、神经活动、色素活动、心跳、渗透压以及血糖调节等各项生命活动均受内分泌激素的调控[1]。在脊椎动物中的研究表明,胃肠激素具有调节消化吸收过程、保护胃肠黏膜和控制动物摄食行为等多项     

竹叶青蛇消化道内分泌细胞的免疫组织化学定位

应用8种特异性胃肠激素抗血清对竹叶青蛇（Trimersurus stejnegeri）消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位。5－羟色胺细胞和生长抑素细胞在整个消化道中均有分布。5－羟色胺细胞以十二指肠和回肠密度为最高,空肠、直肠和幽门其次,胃体较低,食道和贲门中偶见;生长抑素细胞在十二指肠处数量最多,胃体、幽门和空肠其次,其余消化道各段偶见;胰高血糖素细胞只见于十二指肠和空肠;血管活性肠肽在贲门和胃体处有少量阳性细胞分布,食道中偶见。以上各处内分泌细胞的分布密度差异显著。未检出胃泌素、P－物质、胰多肽和胰岛素免疫反应阳性细胞。上述内分泌细胞的分布特点可能与竹叶青的摄食习性和生活环境有关。     

蝘蜒消化管内分泌细胞的免疫组织化学定位

目的阐明爬行动物蝘蜒消化管各段内分泌细胞的类型、局部分布、分布密度和形态学特征。方法应用免疫组织化学技术中链霉卵白素一过氧化物酶（S-P）法。结果在蝘蜒消化管内鉴别出5种内分泌细胞,即：5—羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、生长抑素（somatostatin,SS）、胃泌素（gastrin,GAS）、高血糖素（glucagon,GLU）、P-物质（substance P,SP）免疫活性（immnoreactive,IR）细胞。5-羟色胺免疫活性细胞是消化管中最主要的内分泌细胞类型,以不同密度分布于消化管各段,其中胃幽门部位分布密度最高。生长抑素免疫活性细胞在消化管内仅局限分布于胃部。胃泌素免疫活性细胞仅见于幽门和十二指肠部位。高血糖素免疫活性细胞仅分布于回肠和直肠。P-物质免疫活性细胞仅出现在直肠部位。蝘蜒消化管内分泌细胞形态多样：圆形、椭圆形、纺锤形、梭形、楔形、锥形以及不规则形。胃部多数内分泌细胞分布于胃腺中,食管和肠管中多数内分泌细胞则分布于上皮细胞间。结论蝘蜒和其它爬行动物胃肠内分泌细胞的分布存在一定共同特征,然而也存在着一些特有的差异。     

几种激素在鳜胃肠道内分泌细胞中存在的免疫细胞化学证据

用链酶亲和素－生物素过氧化物酶（Strept Avidin-Biotin-Complex,SABC）免疫细胞化学方法,使用4种兔抗消化 道激血清对鳜胃肠道中的内分泌细胞进行鉴别和定位。结果在鳜鱼胃的贲门、幽门及肠道中均发现不同程度地存在着生长抑素和五羟色胺免疫活性内分泌细胞。在鳜的贲门上皮和贲门腺之间,幽门上皮和幽门腺之间均分布有生长抑素免疫活性阳性细胞,在贲门腺和幽门腺处的分布较密。这些含五羟色胺的肽能神经元具有典型的APUD（Amine Precursor Uptake and Decarboxylation）细胞特征,提示鱼类的胃肠道同哺乳动物的胃肠道一样富含肽能神经元;为神经－内分泌系统的研究提供有力的形态学依据,另外两种抗血清－高血糖素和胃泌素的免疫细胞化学染色在鳜的胃肠道的各部位均未发现阳性反应。     

北京鸭消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

应用七种消化道激素抗血清，对北京鸭消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位，促胃素释放肽细胞大量分布于腺胃和肌胃。生长抑素细胞在腺胃和肌胃数量很多，在幽门部密集，且偶见于十地二指肠，胃素细胞在幽门部非常密集，并较多分布于整个小肠，肌胃内亦有少量。５－羟色胺细胞大量见于肠管各段，并偶见于幽门，少量胰多肽细胞见于腺胃、十二指肠和空肠，未检出胃动素和抑胃肽细胞。     

扬子鳄消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

应用７种特异性胃肠激素抗血清对扬子鳄消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位。５－羟色胺细胞在消化道各段都有分布,以十二指肠密度最高,食道、直肠其次。生长抑素细胞在胃幽门部非常密集,胃体中等,胃贲门部较少,十二指肠偶见。胃泌素细胞主要分布于十二指肠前段,空肠、回肠和直肠偶见。许多血管活性肠肽细胞分布于胃贲门部,胃体和胃幽门部少数。胰高血糖素、胰多肽和Ｐ－物质在消化道各段均未检出阳性细胞。结合扬子鳄的     

蝘蜓消化管内分泌细胞的免疫组织化学定位

目的阐明爬行动物蝘蜓消化管各段内分泌细胞的类型、局部分布、分布密度和形态学特征。方法应用免疫组织化学技术中链霉卵白素-过氧化物酶(S-P)法。结果在蜓消化管内鉴别出5种内分泌细胞,即:5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、生长抑素(somatostatin,SS)、胃泌素(gastrin,GAS)、高血糖素(glucagon,GLU)、P-物质(substance P,SP)免疫活性(i mmnoreactive,IR)细胞。5-羟色胺免疫活性细胞是消化管中最主要的内分泌细胞类型,以不同密度分布于消化管各段,其中胃幽门部位分布密度最高。生长抑素免疫活性细胞在消化管内仅局限分布于胃部。胃泌素免疫活性细胞仅见于幽门和十二指肠部位。高血糖素免疫活性细胞仅分布于回肠和直肠。P-物质免疫活性细胞仅出现在直肠部位。蝘蜓消化管内分泌细胞形态多样:圆形、椭圆形、纺锤形、梭形、楔形、锥形以及不规则形。胃部多数内分泌细胞分布于胃腺中,食管和肠管中多数内分泌细胞则分布于上皮细胞间。结论蜓和其它爬行动物胃肠内分泌细胞的分布存在一定共同特征,然而也存在着一些特有的差异。