促炎因子在心脏修复中的作用

肿 瘤 坏死 因 子 TN F)、白介 素 -1(IL-1)、白 介 素 -2(IL-2)以 及 白介 素 -6(IL-6)等 分子 ,叫 作 促 炎细 胞 因 (子 .一 般 认为 它 们不 属于 免 疫系 统,而 只是 与 组织 炎症 的起 始 有关 .促 炎因 子在 心 脏中 也 有表 达,它 的短 期表 达可 以 帮助 心 脏适 应外 界 压力 的损 伤 ,而其 长期 的 表达 却会 引 起明 显的 心 脏代 谢失 常 .主要 就 促炎 因子 在心 脏中 的 作用 作 一综 述 .     

Tbx18-Cre基因敲入小鼠的繁殖、鉴定及其应用

为了探讨Tbx18-Cre基因敲入小鼠(Tbx18:Cre knock-in Mus musculus)的繁殖、鉴定及Tbx18基因敲除小鼠和遗传示踪小鼠模型的应用,将Tbx18-Cre基因敲入杂合子小鼠进行繁殖,应用PCR法鉴定其子代基因型。将子代雌雄杂合子小鼠互交,应用H.E染色观察Tbx18基因敲除胚鼠心的形态学变化。将杂合子小鼠与RosaEYFP报告小鼠交配,应用心冰冻切片技术观察Tbx18:Cre/Rosa26REYFP双转基因遗传示踪胚鼠心内Tbx18阳性心外膜祖细胞发育命运。结果表明,用于繁殖、基因敲除研究及基因遗传示踪的子代基因型均符合孟德尔遗传规律。同时心H.E染色和心冰冻切片发现,Tbx18敲除小鼠心窦房结发育存在缺陷,而Tbx18阳性心外膜祖细胞是心发育重要的祖细胞来源。研究结果揭示,Tbx18-Cre基因敲除小鼠是研究先天性心脏病发病机制的理想模式动物,Tbx18阳性心外膜祖细胞可能是心脏病患者心脏修复和再生潜在的种子细胞。     

不同品系小鼠感染甲型流感病毒肺小血管内血栓形成

目的本实验旨在观察不同品系小鼠感染甲型流感病毒后肺组织内血栓形成的情况。方法使用H1N1病毒A/California/7/2009（CA7）株和H3N2病毒A/Brisbane/10/07株,对BALB/C小鼠、Scid小鼠、NOD/LTJ小鼠、BALB/C-nu小鼠、NOD-Scid小鼠和icosl-KO小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒。检测小鼠感染后肺组织病毒拷贝数并观察肺组织病理学改变。结果 H1N1和H3N2滴鼻攻毒的各组小鼠均染毒,病理表现为程度略有差异的间质性肺炎。13只H1N1病毒感染小鼠和6只H3N2感染小鼠在肺组织中观察到多个小血管内有血栓形成,血栓成分主要为纤维素和血小板。结论各品系小鼠感染H1N1和H3N2流感病毒后均可能出现肺组织内血栓形成。     

季节性流感病毒 H1N1 BALB / c 鼠肺适应株的建立及其分子机制简

目的 建立季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株,并对适应的分子机理进行研究.方法 以病毒滴鼻感染小鼠,通过在BALB/c小鼠肺组织中连续传代,观察小鼠存活情况及肺病理改变,来获得季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株.结果季节性流感H1N1 A/Brisbane/59/2007病毒野生型毒株,经过在小鼠体内进行8次传代后,毒力逐渐增强,从无致病力到致死率达到100%,对鼠肺适应株与野生型毒株进行基因比对,发现适应株HA基因发生了3个有义突变.结论 野生季节性低致病力H1N1流感病毒可经在小鼠中经过多次传代而获得高致病力H1N1鼠肺适应株,HA蛋白89位Thr至Ile的突变对毒力的增强起决定性作用.     

抗H5N1病毒嵌合IgA抗体基因的构建及其在CHO细胞中的表达

为了表达具有中和活性的抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,采用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗禽流感H5N1-HA鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因及相应的信号肽编码序列,分别与人免疫球蛋白IgA2重链恒定区、Kappa恒定区基因拼接,构建表达质粒pEF-IGHA9和pEF-IGK9,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO(CHO-dhfr-)细胞,用ELISA检测培养上清中嵌合IgA抗体的表达,对纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western blotting印迹分析。结果成功地在CHO细胞中表达了抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,为制备抗H5N1重组分泌型IgA预防性抗体制剂奠定了良好的基础。     

BMP信号途径与心脏的形态建成

Bone m orphogenic protein (B M P)是骨 形态 建 成蛋 白 ,最初 的 研究 显 示它 与骨 骼及 其 相关 组 织的 发育 有关 ,后 来发 现 它在 包 括心 脏在 内的 人 类各 种 器官 发育 中都 有 着很 重 要的 作用 ,因 此,阐明 B M P 信 号 调控 途 径在心 脏分 化 中的 机 制具 有非 常 重要 的意 义 .最 近 ,研究 发 现了 很多 和 B M P 有关 的 生长 因子 ,并 且得 知 了 B M P 信号 的部 分 传递 途 径,它通 过诱 导 N kx2.5、G A TA -4来调 控 心脏 分化 ,如 果 掌握 了其 分子 机 制,则可 以 治疗 各种 相关 的心 脏 疾病 ,使 心 脏损 伤可 以得 到 恢复 .     

猪流感病毒进化方式及其流行特点

摘要：猪在甲型流感病毒生态分布和遗传进化中占有重要地位。猪的呼吸道上皮同时具有禽和人流感病毒2种类型的受体,因此人和禽流感病毒都可以感染猪,猪被认为是禽、人流感病毒的中间宿主和不同来源流感病毒的基因“混合器”。猪流感病毒（Swine influenza virus, SIV）的进化方式包括基因重配、抗原漂移和宿主适应性进化,其中基因重配是主要进化方式。与人类季节性流感病毒相比,SIV在全球的流行情况各不相同,呈地方流行性,并具有明显的地区差异。全球范围内流行的SIV亚型主要有3种：H1N1、H3N2和H1N2亚型,其中各亚型内病毒基因来源又不尽相同。欧洲、北美及我国猪群中流行的流感病毒在遗传进化和基因来源方面各具特色。目前欧洲猪群中流行的主要是类禽H1N1、H1N2和H3N2病毒,其中后两者是基因重配病毒。从1998年开始,古典猪H1N1、“人-猪-禽”三源基因重配H3N2、H1N1和H1N2病毒共存于北美的猪群中,其遗传变异日趋复杂。在基因进化上,欧洲和北美基因重配的SIV是目前新的人类大流感病毒-“甲型H1N1病毒”-的母源病毒。我国猪群中流感病毒主要是古典猪H1N1和类人H3N2病毒,但近年来在我国猪群中分离到遗传上与欧洲和北美SIV高度相关的病毒,提示我国SIV的进化趋势值得关注。1970年代以来,全球已报道了50多起人感染SIV事件,表明SIV也是一种值得重视的人兽共患病,预示了SIV可能成为人类大流感毒株或为大流感毒株提供基因。鉴于SIV在甲型流感病毒生态学上的重要意义,以及对人类公共卫生的潜在威胁,建议应尽早启动我国SIV的常规监测工作,密切关注SIV的流行动态,掌握其分子遗传进化规律。同时,将SIV的监测工作纳入整个流感病毒（人和动物流感病毒）的监测网络,在信息上实现共享,从生态学的高度把握我国流感病毒的流行和进化趋势,这对保护动物健康和预防人类大流感都有重要意义。     

利用功能基因PCR芯片探讨过表达Slit2基因与老年小鼠淀粉样蛋白产生沉积的关系

目的通过对比老年Tg-Slit2小鼠与AD小鼠Tg-2567淀粉样蛋白产生和清除相关基因表达差异,初步探讨过表达Slit2基因与老年小鼠淀粉样蛋白产生沉积的关系。方法选取14月龄雄性C5BL/6小鼠、TgSlit2小鼠和Tg-2576小鼠作为实验研究对象,利用Aβ1-40和Aβ1-42抗体对小鼠脑组织进行免疫组化染色,同时通过脑总RNA提取、RNA质量鉴定、c DNA合成以及PCR芯片检测,获得功能基因表达情况,并对两种转基因小鼠与野生型小鼠AD基因表达进行差异化比较分析。结果 Tg-Slit2小鼠相比与同年龄的Tg-2576小鼠,脑组织中并未发现典型的Aβ沉积表型,脑组织功能基因芯片分析发现,与同年龄的C57BL/6小鼠相比,Tg-Slit2有16个基因显著上调,8个基因显著下调,而Tg-2576小鼠14个基因显著上调,17个基因显著下调。进一步对差异基因分析发现,三种小鼠鼠源的淀粉样蛋白前体基因APP表达无差异,而与Aβ产生相关的Psen2基因在Tg-2576小鼠中显著上调,与Aβ清除相关的LRP6和LRP8则发生显著下调,但这些基因在Tg-Slit2老年小鼠中并未发现显著改变。结论14月龄过表达Slit2小鼠未产生Aβ的沉积,Aβ相关基因也未显示出与Tg2576小鼠相似的改变。     

PLOD3基因3’调控区的人类特异突变改变miR-124a对PLOD3的调控

microRNAs(miRNAs)是一类在转录后水平调控基因表达的不编码蛋白质的小RNA(长度20-24个碱基).其中,miR-124a是一个在哺乳动物中枢神经系统高度表达的miRNA,在神经前体细胞向神经元分化的过程中起着举足轻重的作用.由于miRNAs特异性地识别靶基因的3'端调控区(3'UTR)的靶序列,因此,在人类起源过程中基因3'UTR的单核苷酸序列变异有可能导致miRNA调控的改变.通过靶基因预测和3'UTR区在哺乳动物代表物种间的同源序列比较,我们发现miR-124a的靶基冈中有一个基因(PLOD3)3UTR的靶位点中存在人类特异突变位点.利用体外报告基因系统,发现PLOD3基因3'UTR靶位点中所含的一个人类特异的突变导致miR-124a对PLOD3的调控效率降低.研究表明,miRNAs靶基因3'UTR的序列变异具有功能效应,它有可能足人类中枢神经系统在起源和演化中发挥关键作用的重要遗传机制之一.     

季节性流感病毒H1N1 BALB/c鼠肺适应株的建立及其分子机制

目的建立季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株,并对适应的分子机理进行研究。方法以病毒滴鼻感染小鼠,通过在BALB/c小鼠肺组织中连续传代,观察小鼠存活情况及肺病理改变,来获得季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株。结果季节性流感H1N1 A/Brisbane/59/2007病毒野生型毒株,经过在小鼠体内进行8次传代后,毒力逐渐增强,从无致病力到致死率达到100%,对鼠肺适应株与野生型毒株进行基因比对,发现适应株HA基因发生了3个有义突变。结论野生季节性低致病力H1N1流感病毒可经在小鼠中经过多次传代而获得高致病力H1N1鼠肺适应株,HA蛋白89位Thr至Ile的突变对毒力的增强起决定性作用。     

Expression of Notch receptors, ligands, and target genes during development of the mouse mammary gland

Notch genes play a critical role in mammary gland growth, development and tumorigenesis. In the present study, we have quantitatively determined the levels and mRNA expression patterns of the Notch receptor genes, their ligands and target genes in the postnatal mouse mammary gland. The steady state levels of Notch3 mRNA are the highest among receptor genes, Jagged1 and Dll3 mRNA levels are the highest among ligand genes and Hey2 mRNA levels are highest among expressed Hes/Hey target genes analyzed during different stages of postnatal mammary gland development. Using an immunohistochemical approach with antibodies specific for each Notch receptor, we show that Notch proteins are temporally regulated in mammary epithelial cells during normal mammary gland development in the FVB/N mouse. The loss of ovarian hormones is associated with changes in the levels of Notch receptor mRNAs (Notch2 higher and Notch3 lower) and ligand mRNAs (Dll1 and Dll4 are higher, whereas Dll3 and Jagged1 are lower) in the mammary gland of ovariectomized mice compared to intact mice. These data define expression of the Notch ligand/receptor system throughout development of the mouse mammary gland and help set the stage for genetic analysis of Notch in this context.     

Conditional ablation of Ezh2 in murine hearts reveals its essential roles in endocardial cushion formation, cardiomyocyte proliferation and survival

Ezh2 is a histone trimethyltransferase that silences genes mainly via catalyzing trimethylation of histone 3 lysine 27 (H3K27Me3). The role of Ezh2 as a regulator of gene silencing and cell proliferation in cancer development has been extensively investigated; however, its function in heart development during embryonic cardiogenesis has not been well studied. In the present study, we used a genetically modified mouse system in which Ezh2 was specifically ablated in the mouse heart. We identified a wide spectrum of cardiovascular malformations in the Ezh2 mutant mice, which collectively led to perinatal death. In the Ezh2 mutant heart, the endocardial cushions (ECs) were hypoplastic and the endothelial-to-mesenchymal transition (EMT) process was impaired. The hearts of Ezh2 mutant mice also exhibited decreased cardiomyocyte proliferation and increased apoptosis. We further identified that the Hey2 gene, which is important for cardiomyocyte proliferation and cardiac morphogenesis, is a downstream target of Ezh2. The regulation of Hey2 expression by Ezh2 may be independent of Notch signaling activity. Our work defines an indispensible role of the chromatin remodeling factor Ezh2 in normal cardiovascular development.     

Hypoxia-mediated activation of Dll4-Notch-Hey2 signaling in endothelial progenitor cells and adoption of arterial cell fate

Adequate response to low oxygen levels (hypoxia) by hypoxia inducible factor (HIF) is essential for normal development and physiology, but this pathway may also contribute to pathological processes like tumor angiogenesis. Here we show that hypoxia is an inducer of Notch signaling. Hypoxic conditions lead to induction of the Notch ligand Dll4 and the Notch target genes Hey1 and Hey2 in various cell lines. Promoter analysis revealed that Hey1, Hey2 and Dll4 are induced by HIF-1alpha and Notch activation. Hypoxia-induced Notch signaling may also determine endothelial identity. Endothelial progenitor cells (EPCs) contain high amounts of COUP-TFII, a regulator of vein identity, while levels of the arterial regulators Dll4 and Hey2 are low. Hypoxia-mediated upregulation of Dll4 and Hey2 leads to repression of COUP-TFII in eEPCs. Finally, we show that Hey factors are capable of repressing HIF-1alpha-induced gene expression, suggesting a negative feedback loop to prevent excessive hypoxic gene induction. Thus, reduced oxygen levels lead to activation of the Dll4-Notch-Hey2 signaling cascade and subsequent repression of COUP-TFII in endothelial progenitor cells. We propose that this is an important step in the developmental regulation of arterial cell fate decision.