快速提取棉花蕾期高质量RNA的改良方法

棉花组织中因富含棉酚、多糖和单宁等次生代谢物,RNA难分离,易降解,导致现有RNA快速提取试剂盒提取的棉花RNA产率低、质量差,无法应用于实验操作。针对棉花组织次生代谢物多的特点,以酸酚法为基础,结合RNA吸附柱,通过对幼苗期和蕾期棉花叶片RNA提取,总结出一种快速提取棉花组织RNA的方法。与热硼酸法、酸酚法及试剂盒法相比,所述方法具有步骤少、产率高、质量好等特点,操作简单、整个实验在1h内完成,可开发出提取多糖多酚类生物组织RNA试剂盒。     

棉花幼苗根总RNA提取的改进热酚法

获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物的不同而又有较大差异,棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此RNA提取难度较大,本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根RNA热酚提取法,该法可获得高质量棉根总RNA,并能成功进行反转录,制备cDNA。     

甜叶菊RNA分离方法研究

甜叶菊组织中酚类、萜类和多糖等代谢产物含量较高,RNA难分离,易降解,使用现有的方法提取甜叶菊组织RNA产率低、质量差,无法应用于实验操作.本文针对甜叶菊组织次生代谢物多的特点,以传统的CTAB法(cetyl trimethyl ammonium bromide)为基础,分别采用不同的方法进行RNA抽提和纯化.结果发现采用CTAB-LiCl法提取的RNA完整性好,且纯度高;传统的CTAB法提取的RNA完整性好,但有DNA和其它杂质的污染;高盐溶液法提取的RNA降解比较严重,同时还有杂质污染.结论说明CTAB-LiCl法适用于多糖类植物RNA的分离.     

一种从苏铁叶片中有效提取RNA的方法

由于苏铁（ Cycas revoluta） 叶片中含有大量的多糖多酚等次生代谢物, 常规RNA 提取方法很难获得优质的RNA。在常规的CTAB 法中加入了硼砂和β- 巯基乙醇来消除多酚和多糖的干扰, 得到了一个从苏铁叶片中有效提取RNA 的方法, 每克鲜叶片可获得约930μg RNA。A260 280 和A260 230 的纳米波长的吸收比值都约为2 , 表明RNA 的质量较好。获得的RNA 可用于Northern blot 和反转录PCR 等分析, 也说明RNA 的质量比较好。此外, 改进的提取方法也适合于含有次生代谢产物的其它植物, 同样可以获得优质RNA。     

蒙古沙冬青总RNA提取与mRNA分离方法的研究

蒙古沙冬青是分布于我国西北荒漠区的常绿旱生阔叶灌木,因其富含多糖和多酚等次生代谢物质,用常规RNA提取方法难以从中获得高质量总RNA.本研究通过在热酚法的RNA提取液中加入高浓度的KAc和β巯基乙醇,从该植物的不同样品中提取到高质量总RNA,并用筛选到的合适试剂盒分离到高纯度的mRNA.所得到的总RNA和mRNA已被成功应用于基因克隆和SMART全长eDNA文库的构建.     

富含多糖草莓果实总RNA提取方法的改进

以草莓果实为模式实验材料,将Chomczynski提出的常规RNA提取方法与Kenneth等提出的改进方法相结合,并做了进一步改进,建立了一种简单实用的从富舍多糖的植物材料中提取总RNA的方法。先利用冷的丙酮去除色素类物质,再利用乙二醇丁醚去除多糖,从而有效克服了从富含色素和多糖娄物质的植物材料中提取RNA的困难;获取的RNA样品在纯度和浓度上都可以满足PCR及Northern杂交等分子生物学实验的要求。     

改良Trizol法快速提取棉叶片总RNA

棉叶片组织中存在含量较高的棉酚、多糖等次生代谢物质,使用单纯的Trizol很难获得高质量的RNA。首次采用改良Trizol法成功从棉叶片中快速的提取了总RNA,其所提的总RNA完整性好、纯度高,能进一步满足分子生物学的试验要求。     

一种适用于RT-PCR的石榴籽粒总RNA提取方法

为从石榴籽粒中提取高质量的RNA,以便进行后续分子生物学研究,针对石榴籽粒富含次生代谢物的特点,采用CTAB法并进行了改良,利用氯仿/异戊醇替代其他方法中的"异硫氰酸胍"和"Trizol试剂"进行反复抽提去除蛋白,无水乙醇去除多糖,LiCl消化DNA。结果显示:改良CTAB法提取的石榴籽粒总RNA的28S rRNA、18SrRNA条带清晰,完整性较好;OD260 nm/OD280 nm比值为1.9960,纯度较高。在此基础上通过反转录、PCR扩增出符合预期大小的Actin基因片段,表明该方法提取的RNA可满足后续RT-PCR等分子生物学试验研究。     

一种快速提取小麦叶片总RNA的方法

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键.同种植物不同器官的组织由于组成分的差异,提取RNA的方法也存在不同的难点.在苯酚法和氯化锂沉淀法的基础上,改进并提出了一种适合小麦叶片总RNA的快速提取方法,消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染.该方法提取的小麦叶片总RNA,完整性好、纯度高,可用于RT-PCR、N orthern杂交、RACE等实验操作,而且简单经济、快速、实验结果稳定,重复性好,还适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取.     

CTAB法提取中草药材滇紫草细胞的总RNA

介绍一种适合富含次生产物的中草药材滇紫草细胞总RNA的提取方法——CTAB法。采用CTAB作为去污剂,分别用氨仿和水饱和酚反复抽提以及LiCl沉淀以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,最后用纯乙醇沉淀获得RNA。该方法不但能获得完整性好和纯度高的总RNA,而且操作简单、快速、成本低廉,对其它富含次生物质的植物特别是中草药材组织总RNA的提取具有借鉴意义。     

苎麻不同组织总RNA的有效分离

从植物组织中提取总RNA是进行植物分子生物学某些方面研究的必要前提,通过选用5种不同的试剂,我们找到一种新的RNAplant分离试剂,可以很有效的提取苎麻叶、茎皮、雌花、果的RNA,且质量很好,可以进行cDNA的合成和RT—PCR等下游实验,并对不同试剂提取和多糖、多酚的去除进行了讨论．     

一种广泛适用的RNA提取方法

分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而RNase、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程.现利用硅藻土对RNase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的RNA提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含RNase的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种RNA提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,得率高的RNA.RT-PCR实验表明,提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究.硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是异硫氰酸胍法的3倍多.此外,将分离提取的总RNA经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段RNA,以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环RT-PCR,结果证明,富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后续实验.     

A rapid method for extraction of cotton (Gossypium spp.) genomic DNA suitable for RFLP or PCR analysis

Extraction of high-quality genomic DNA fromGossypium (cotton) species is difficult due to high levels of polysaccharide, oxidizable quinones, and other interfering substances. We describe a procedure that consistently permits isolation of cotton genomic DNA of satisfactory size and quality for RFLP and PCR analysis, as well as for most routine cloning applications. Several antioxidants, phenol-binding reagents, and phenol oxidase inhibitors are used throughout the procedure, and most polysaccharides are eliminated early in the procedure by isolation of nuclei.