CK2 β的蛋白表达与纯化及其RNA沉默的研究

蛋白激酶CK2是一个丝氨酸/苏氨酸特异性的激酶,通常以异源四聚体形式存在,由两个催化亚基(CK2α和CK2α′)和两个调节亚基CK2β组成。CK2激酶α亚基含有和其它蛋白激酶的催化功能域同源的激酶功能域。CK2激酶β亚基在调节a亚基的基本活性方面起着很复杂的作用。通过CK2β的结合活性,CK2α改变它的活性和作用底物。本研究成功的表达和纯化了CK2β蛋白,并且构建了CK2β的S iRNA载体,为其进一步功能研究做好准备。     

重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ,将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子,阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列,结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ,命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变,即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ,结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ;另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ,Ｖａｌ→Ｍｅｔ;Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ,Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功,将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础．并为利用ｐＴ７－７表达载体构建其他重组质粒建立了一套成功的方法     

促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶

促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶（mitogen-activated protein kinase phosphatases,MKPs）是一类丝／苏氨酸和酪氨酸双特异性的磷酸酶。它在细胞分化、增殖和基因表达过程中起着重要的作用。MKPs可以选择性地结合促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）,对MAPK进行去磷酸化,从而调节MAPK信号通路的活性。另一方面,MAPK也可以激活MKPs,它们的相互作用确保了细胞内信号的精确传递,并参与细胞功能的调节。     

蛋白激酶C在小鼠卵母细胞体外成熟和受精中的作用

蛋白激酶是一类重要的丝／苏氨酸蛋白激酶。本实验以小鼠为实验动物,研究了PKC在卵母细胞体外成熟、活化和受精中的可能作用,及两种PKC亚型在卵母细胞中的定位。PKC激活剂PMA可以阻止GV期卵母细胞在体外恢复减数分裂,该作用可被PKC抑制剂CalphostinC抵消,但不能被PLCγ抑制剂U73122或PKCδ专一性抑制剂Rottlerin所克服。Western印迹显示PKCα和βI在卵母细胞发育过程中恒量表达。激光共聚焦显微术研究发现,受精或受到活化刺激后PKCα转位到卵母细胞膜上,同时皮质颗粒排放,说明PKCα可能参与调节卵皮质反应。本实验首次在小鼠中研究了PLCγ与受精的关系,发现不存在PKC对PLCγ的正反馈调节。此外,本研究还对小鼠卵巢中对PKCα和βI进行了蛋白定位研究。     

揭示蛋白激酶CK2生物学功能——亚基敲除/敲减北大核心CSCD

蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,可催化细胞内多种蛋白质的磷酸化,由2个催化亚基CK2α或α'以及2个调节亚基CK2β组成的异源四聚体结构。为深入了解CK2的结构与功能,通过运用同源重组敲除、条件性敲除及RNAi引起的基因敲减技术分别对其3个亚基进行敲除与抑制,发现在CK2亚基敲除与抑制后,可对个体生殖、胚胎发育、肿瘤、代谢以及衰老造成重要的影响,说明CK2各亚基具有重要的生物学功能。本文就敲除与敲减蛋白激酶CK2任一亚基后其功能变化的进展作一综述。     

蛋白激酶B的PH结构域可溶性表达与纯化及其二级结构分析

蛋白激酶B(亦称为Akt)是一种蛋白质丝氨酸 苏氨酸激酶 ,因其与蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)具有相对高的同源性 ,而被命名为PKB .作为磷脂酰肌醇 3激酶 (PI3 kinase)的下游分子 ,它广泛参与细胞各种功能的调节 .PKB对代谢的影响主要表现为促进蛋白质的合成 ,促进糖原的转运[1] .同时 ,PKB还在细胞增殖与调控中发挥重要作用[2 ] .PH结构域 (pleckstrinhomologydomain)是一种存在于多种信号蛋白质和细胞骨架相关蛋白质中的功能性区域 .它通常由 7个反向平行的 β片层和C末端的一个α螺旋构成 .PH结构域的配体具有一定的多样性…     

蛋白激酶C对酪氨酸蛋白激酶系统的调节

本文论述了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对生长因子受体激活的Ｒａｓ／ＭＡＰＫ途径的多种调节,其中,有直接的也有间接的,有激活也有抑制。这些不同水平不同性质的调节使细胞对外来刺激作出相应的反应。由于ＰＫＣ和Ｃａ＾２＋是肌醇磷脂系统中十分重要的两个组分,本文所论述的也是目前所知的肌醇磷脂系统对酪氨酸蛋白激酶系统调节的主要过程。     

人膀胱癌转化生长因子α的研究

应用Northern印渍杂交和放射免疫分析技术证明了膀胱癌组织和细胞中TGFαmRNA的表达,并发现TPA能提高人膀胱移行上皮癌BIU-87细胞中TCFαmRNA和TGFα活性分子的水平,但对TGFα的功能受体(EGF受体)具有负调节作用。提示TGFα在膀胱肿瘤细胞的恶性增殖过程中起一定作用,蛋白激酶C的激活可能是调节TGFα基因表达的途径之一。     

IAA对小麦胚芽鞘质膜蛋白磷酸化的影响

磷酸化／ 脱磷酸化机制是众多信号转导过程中的重要环节,很多信号物质被细胞受体识别后引发蛋白激酶和蛋白磷酸酶活性变化,通过磷酸化／ 脱磷酸化进一步调节多种酶活性而产生各种生理效应。在对生长素ＩＡＡ 的信号转导的研究中,发现ＩＡＡ 处理的小麦胚芽鞘质膜蛋白中蛋白激酶的活性和蛋白磷酸化程度都发生改变,并找到两种受到调节的蛋白激酶。钙离子通道抑制剂ＬａＣｌ３ 阻断了ＩＡＡ 的这种作用,表明Ｃａ２＋参与了ＩＡＡ的信号转导过程。     

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路是广泛存在于各种细胞中的一条信号转导途径,由一组级联活化的丝／苏氨酸蛋白激酶组成,对于细胞周期的运行和基因表达具有重要调控作用。MAPK包括多个成员,活化后向核内迁移,磷酸化包括转录因子在内的核蛋白和膜受体,实现对基因转录和其他事件的调节。MAPK激酶（MAPKK）是MAPK的上游激活分子,催化MAPK的Tyr和Thr残基双特异性磷酸化。Mos是脊椎动物生殖细胞中特有的MAPKK,通过MAPKK／MAPK途径活化成熟促进因子,启动卵母细胞成熟发育并维持中期阻滞。MAPK的下游分子包括MAPK活化的蛋白激酶（MAPKAPK）、核转录因子、热休克蛋白和细胞质磷脂酶A2等,执行由MAPK所介导的细胞生命活动调节功能。     

IAA对小麦胚芽鞘质膜蛋白磷酸化的影响

磷酸化／脱磷酸化机制是众多信号过程中的重要环节,很多信号物质被细胞受体识别后引发蛋白激酶和蛋白磷酸酶活性变化,通过磷酸化／脱磷酸化进一步调节多种酶活性而产生各种生理效应。在对生长素ＩＡＡ的信号转导的研究中,发现ＩＡＡ处理的小麦胚芽鞘质膜蛋白中蛋白激酶的活性和蛋白磷酸化程度都发生改变,并找到两种受到调节的蛋白激酶。钙离子通道抑制剂ＬａＣｌ３阻断了ＩＡＡ的这种作用,表明Ｃａ％２＋参与了ＩＡＡ的信号转导     

SGK研究进展

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶（SGK）是一个与PKB/AKT等第二信使蛋白具有极高的同源性的Ser/Thr蛋白激酶,与目前巳发现的绝大多数蛋白激酶只受磷酸化/去磷酸化调节机制显著不同的是,SGK还存在快速转录水平上的调节机制,它可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点参与离子通道调节、细胞增殖,存活的信号传导。本文就SGK的结构、活性调节、功能和现在的研究进展作一综述。     

大豆叶片衰老过程中质膜蛋白激酶自磷酸化状态和催化活性的变化

以大豆幼苗初生叶为材料研究了衰老过程中质膜蛋白激酶自磷酸化状态和催化活性的变化,结果发现质膜上一个57kD的蛋白激酶分子上有多个自磷酸化位点,而且自磷酸化反应能提高该酶催化组蛋白H1磷酸化的激酶活力。进一步的研究表明诱导衰老处理造成的57kD蛋白激酶自磷酸化状态的变化,可能对调节它在衰老过程中催化活性的变化起重要作用;而外源6－BA预处理则能够维持57kD蛋白激酶体内高自磷酸化状态,保持该激酶在衰老过程中的催化活力。对衰老和6－BA过程中质膜上39和47kD蛋白激酶自磷酸化状态变化的研究表明,这两种激酶可能参与大豆叶片对6－BA刺激信号的传导和／或应答反应过程。     

蛋白激酶研究进展：Ⅰ.结构和分类

蛋白激酶含有２５０～３００个氨基酸残基构成的催化功能域,包括１２个功能亚域．这些氨基酸序列折叠成为一个核心催化结构．根据蛋白激酶功能域氨基酸序列比较分析可以找出各蛋白激酶在进化上的亲缘关系,这是蛋白激酶的分类基础．蛋白激酶可分为二大类,一类是丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,另一类是酪氨酸蛋白激酶．丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶在进化上出现较早,可分为几个组,每个组又分为许多家族．酪氨酸蛋白激酶在进化上出现较晚,亲缘关系较紧密,同属于一个组,该组也分为许多家族．最近发现的许多双底物特异蛋白激酶,分散在丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的不同家族中．     

PP2A的结构和功能新进展

PP2A是一种丝／苏氨酸磷蛋白磷酸酶,通过可逆性磷酸化使已磷酸化激活的蛋白质脱磷酸,在信号传导中承担负性调节的作用。由一个催化亚基和两个调节亚基构成。：PP2A是一种多功能性酶,底物为众多体内的转录因子和蛋白激酶;酵母,果蝇和小鼠的动物模型的研究中已经发现PP2A在细胞周期调控,形态以及发育中的作用;同时它又在信号转导的级联反应中与其他磷酸化酶和激酶相互作用,构成调节大分子调控下游信号的转导。催化亚基活性主要由转录后水平磷酸化和甲基化的状态调控。     

蛋白激酶CK2与DNA断裂修复

蛋白激酶CK2（酪蛋白激酶Ⅱ）是真核细胞中普遍存在的一种信使非依赖的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,它底物众多,功能广泛。DNA断裂修复是一个涉及很多种酶和蛋白的过程,CK2在其中起着很重要的作用。     

血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶

血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶（SGK）是一种新发现的丝／苏氨酸蛋白激酶,与其他蛋白激酶显著不同的是．SGK的转录、活性和在细胞内定位受到不同因素的调节,是多种胞内信号途径的交汇点,参与了细胞存活与凋亡、离子通道调节等过程,与高血压、糖尿病性肾病等疾病密切相关。     

中枢神经系统L-型电压门控钙通道的功能调控与脑缺血

中枢神经系统L 型电压门控钙通道 (L typevoltage gatedcalciumchannels ,L VGCCs)由α1C(D)亚基和辅助亚基组成。α1C亚基的C 端包含多个功能结构域 ,可分别与钙调素、钙调蛋白酶、cAMP依赖性蛋白激酶、Src家族酪氨酸蛋白激酶 (Srcfamilyproteintyrosinekinases ,SrcPTKs)等相互作用 ,从而参与L VGCCs的功能调控。SrcPTKs介导的两种钙通道———L VGCCs和N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate ,NMDA)受体的对话可能是缺血性脑损伤的重要机制     

蛋白激酶C在小鼠卵母细胞体外成熟和受精中的作用

蛋白激酶是一类重要的丝/苏氨酸蛋白激酶。本实验以小鼠为实验动物,研究了PKC在卵母细胞体外成熟、活化和受精中的可能作用,及两种PKC亚型在卵母细胞中的定位。PKC激活剂PMA可以阻止CV期卵母细胞在体外恢复减数分裂,该作用可被PKC抑制剂calphostin C抵消,但不能被PLCγ抑制剂U73122或PKCδ专一性抑制剂Rottlerin所克服。Western印迹显示PKCα和βⅠ在卵母细胞发育过程中恒量表达。激光共聚焦显微术研究发现,受精或受到活化刺激后PKCα转位到卵母细胞膜上,同时皮质颗粒排放,说明PKCα可能参与调节卵皮质反应。本实验首次在小鼠中研究了PLCγ与受精的关系,发现不存在PKC对PLCγ的正反馈调节。此外,本研究还对小鼠卵巢中对PKCα和βⅠ进行了蛋白定位研究。     

稻属中一个高度保守和组成型表达酪氨酸／丝氨酸－酸酸双特性蛋白激酶基因的克隆与分析

从水稻中克隆了一个在稻属植物中高度保守和组成型表达的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶基因（OsSTK）。该基因包含两个外显子和一个114bp的小内含子序列,预测编码一个419个氨基酸的蛋白质。该基因推导的氨基酸序列与其它已知序列的一致性均低于52％。利用从不同种和类型的野生稻克隆的部分该基因序列构建的系统树与野生稻的分类和进化关系相一致。OSPKN-端拥有一段富含丝氨酸、碱性氨基酸和带电荷氨基酸的特异性导肽序列,其中包含“GDGDGDGDG”短重复序列。由于该基因蛋白激酶结构域中的VIb,VIII和XI亚结构域中同时具有酪氨酸蛋白激酶和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的特性,推测该基因可能同时具有催化酪氨酸和丝氨酸、苏氨酸磷酸化的双重功能。