反义RNA在基因调控中的作用

反义RNA是指与靶RNA具有互补序列均调节RNA,它通过与靶RNA的碱基配对而起负调控作用,转录产生反义RNA的基因称为反义基因。 向1981年Tomizawa等首先报道了反义RNA在质粒ColEl DNA复制中的调控作用以来,这方面研究进展较快。     

《反义RNA和DNA》

《反义RNA和DNA》(Antisense RNA and DNA)由James A.H.Murray编著,1992年 Wiley-Liss出版社出版,401页。反义RNA和DNA是对基因活动进行高度选择性操作的技术。“反义”顺序互补编码链,能特殊地阻断基因表达。反义顺序通过碱基配对,同编码RNA结合,干扰蛋白质的翻译,从而降低蛋白质生产总量。该技术同选择作用相结合,有着广泛应用,可以降低或完全阻断任何基因表达。它对在生物体内,操纵基因功能,进行科研、医药或农业活动,都具有巨大潜力。     

DNA只有一条链能被转录吗

1981年,Tomizawa(美)首先发现在细菌Escherichiacoli体内的有义DNA(即以前认为不具有转录能力的DNA链)可转录形成一种不翻译表达的反义RNA对质粒(细菌体内一种小的DNA双链环)的复制进行调控。因为质粒的复制需要以一种特殊的RNA作为引物(详细的机理可参阅《生物学通报》1990,4《关于DNA复制的引物和DNA聚合酶》一文)而根据碱基互补原则,对应的反应RNA显然可以与它互补结合,从而使它丧失作为引物的能力。这样,细菌就可以通过对反义RNA转录数量的控制,达到调控质粒复制的目的。在随后短短的几年中,研究人员不断在病毒和细菌     

反义RNA转录——基因表达调控的一种表观遗传学机制

反义RNA(antisense RNA,AS-RNA)是一种存在于细胞内的非编码RNA,反义转录在哺乳动物基因组中广泛存在,可能在基因表达的相关调控机制中起着重要作用。目前研究发现,ASRNA主要是通过表观遗传学上的改变,对基因进行调控。DNA甲基化水平的改变,组蛋白修饰引起的染色质构型重塑,以及其它非编码RNA的调控作用均与AS-RNA有着密切的关系。     

登革2型病毒PrM基因的重组甲病毒RNA介导的抗病毒作用的研究

将扩增的登革 2型病毒株PrM基因导入pSFV载体的SP6启动子下游 ,筛选出含该基因正、反向插入的重组质粒DNA。用SpeI酶分别将重组的和辅助的质粒DNA线性化 ,并将其体外转录成 5′末端含帽子结构的RNA。再将这两种RNA共转染BHK细胞。然后将转染的宿主细胞用登革 2型病毒株攻击 ,并分别观察含正、反义PrM基因的重组甲病毒RNA介导的抗病毒效果。通过碱基序列测定 ,筛选出含PrM基因正、反向插入的pSFV PrM重组质粒。并获得了经重组RNA与辅助RNA共转染细胞而产生的重组病毒颗粒。含有反义PrM基因的重组病毒RNA ,在宿主细胞中具有抗登革 2型病毒复制的作用 ,而且强于含正义PrM基因的重组病毒RNA。     

Applied Biosystems完善反义产品生产设施

Applied Biosystems,Inc.(ABI)(Foster City,CA)已建成大规模(克数量级)生产高品质合成DNA寡核苷酸产品设施.该公司致力于反义技术和DNA探针市场.根据一项合同,它计划生产一批DNA产品,用以满足反义技术公司进行临床实验的需要.ABI已与ISIS Pharmaceuticals(Carlsbad,CA)达成协议,向ISIS提供药用DNA.天然存在于细胞中的某些酶和核酸酶破坏反义寡核苷酸,因此研究者改变了反义RNA和DNA的糖-磷酸     

新的改进的反义药物即将问世

反义药物就要从理论变成现实了吗?由于定靶和降解困难以及亲和性低,反义寡核苷酸仍不能用于治疗。然而,某些工业人士说,多亏了反义寡核苷酸研究的最新进展,这一状况就要改变了。研究人员试图使人造的单链DNA选择性地结合RNA,从而阻止那些不想要的蛋白的生成。 Gilead Sciences,Inc(Foster City,CA)提供了一种技术,能提高反义药物对其RNA靶子的亲和性。方法很简单,就是在反义化合物的T和C碱基上加一个丙炔基团。这样处理得到的寡核苷酸对RNA的亲和力比标准反义分子大10～100倍。这种丙炔“兰”不作用于A和G碱基,有报道说,Gilead正在解决这一问题。     

反义及正义表达癌基因c-Ha-ras重组质粒的构建

c-Ha-ras癌基因通过其产物p21蛋白的点突变或过量表达使细胞恶变。国外一些实验室的初步研究表明,导入一段与c-Ha-ras基因转录出的mRNA(sense RNA,正义RNA)顺序互补的RNA(anti-sense RNA,反义RNA),有可能通过阻断DNA复制,RNA转录或蛋白质翻译等过程,减少p21蛋白的合成,从而使转化细胞逆转。为了进一步系统研究反义c-Ha-ras RNA在转化细胞逆转中的     

反义RNA寡核苷酸及其与脂质体的复合物对于乙型肝炎病毒的抑制

我们设计合成了特异性靶向乙型肝炎病毒(HBV)mRNA的反义RNA寡核苷酸P-2987、X-60和X-519.在瞬时转染pHBV1.3质粒(含有1.3拷贝的HBV基因组)的HepG2细胞和整合了HBV基因组的HepG2.2.15细胞中,转染2μmol/L的反义RNA寡核苷酸,ELISA和实时定量PCR结果表明,这3条寡核苷酸可以明显抑制HBV的复制和抗原表达.在HBV转基因鼠中,尾静脉注射反义RNA寡核苷酸,结果表明,肝脏中HBV的复制得到了抑制,但是血清中抗原含量和HBV DNA拷贝数没有明显变化.反义RNA寡核苷酸X-519与脂质体的复合物可以增强其对于HBV在肝脏中复制的抑制作用.在通过高压尾静脉注射pHBV1.3质粒建立的HBV急性感染模型中,反义RNA寡核苷酸X-519可以显著地抑制HBV在肝脏中的复制以及降低血清中病毒抗原水平和DNA拷贝数.上述实验结果说明,X-519及其与脂质体的复合物对于HBV的复制和抗原表达起到明显的抑制作用,可能作为一种潜在的针对HBV的基因治疗药物.     

反义RNA寡核苷酸及其与脂质体的复合物对于乙型肝炎病毒的抑制（英文）

我们设计合成了特异性靶向乙型肝炎病毒(HBV)mRNA的反义RNA寡核苷酸P-2987、X-60和X-519.在瞬时转染pHBV1.3质粒(含有1.3拷贝的HBV基因组)的HepG2细胞和整合了HBV基因组的HepG2.2.15细胞中,转染2μmol/L的反义RNA寡核苷酸,ELISA和实时定量PCR结果表明,这3条寡核苷酸可以明显抑制HBV的复制和抗原表达.在HBV转基因鼠中,尾静脉注射反义RNA寡核苷酸,结果表明,肝脏中HBV的复制得到了抑制,但是血清中抗原含量和HBV DNA拷贝数没有明显变化.反义RNA寡核苷酸X-519与脂质体的复合物可以增强其对于HBV在肝脏中复制的抑制作用.在通过高压尾静脉注射pHBV1.3质粒建立的HBV急性感染模型中,反义RNA寡核苷酸X-519可以显著地抑制HBV在肝脏中的复制以及降低血清中病毒抗原水平和DNA拷贝数.上述实验结果说明,X-519及其与脂质体的复合物对于HBV的复制和抗原表达起到明显的抑制作用,可能作为一种潜在的针对HBV的基因治疗药物.     

反义技术研究进展

过去几年目睹了反义技术的爆炸性发展,文章较全面地评述了反义技术的主要内容和近几年来的研究进展,它们包括几类受人注意的DNA类似物、RNA和Ribozyme.。此外,基于研究现状还展示了反义技术的前景。     

生物技术简讯

基因组装 DNA 合成仪Pharmacia LKB 生物技术公司开发了两种新型 DNA 合成仪,即 Gene Assembler Special 和 Gene Assmbler 4 Primers。Gene Assembler Special 是用于合成高质量的寡聚物,用于研究反义DNA 和 RNA。寡聚物具有生物素或荧光素标记,或磷酸化的或用3'-改良核苷酸以及硫代磷酸酯标记。为了满足快速增长的需求,公司目前准备生产一系列新型应用调谐试剂。Gene Assemble 4 Primes 是     

人U6基因POI Ⅲ启动子表达反义VEGF cDNA抑制SMMC-7721肝癌细胞VEGF表达的观察

 由 RNA聚合酶启动子在细胞内转录高浓度反义 RNA是抑制靶蛋白的一种有效手段 ,有报道 POI 启动子转录小分子 RNA存在效率不高 ,带有较多的非特异性序列等缺点 ,为了克服这些问题 ,表达反义 VEGF RNA的人 U6基因表达盒对人肝癌细胞株 SMMC- 772 1 VEGF表达的抑制作用进行了研究 .首先 PCR扩增 2 0 0 bp VEGF c DNA以正、反向插入人 U6 sn RNA.通过测序证实反向插入的正确性 .采用细胞原位杂交 ,RNA酶保护分析 ,Northern印迹来证实反义 RNA表达的情况 ,利用 RT- PCR方法研究了其对人肝癌细胞株 SMMC- 772 1 VEGF表达的抑制效果 .细胞原位杂交结果显示 U6启动子转录产物主要分布于细胞核内 ,细胞浆内亦有表达 ,RNA酶保护分析显示 U6基因 POI 启动子能高表达所需大小反义 RNA,Northern印迹结果显示脂质体 lipo-fectamine介导含 U6基因 POI 启动子的质粒转染人肝癌细胞株 SMMC- 772 1后 1 2 h即有表达且可持续表达 6 d. RT- PCR证实 U6基因 POI 启动子转录的反义 VEGF RNA能有效抑制SMMC- 772 1细胞 VEGF的 m RNA表达 .已有的研究结果揭示 POI 启动子是反义基因治疗中一种好的选择     

反义RNA及其抗病研究现状

反义RNA(antisense RNA)是一种与特定mRNA互补的RNA分子,它天然存在于原核细胞中.反义RNA与特定的mRNA结合后可阻止后者的转录和翻译,具有调节基因表达的功能.因此,利用这一特性,人工构建一些相应的反义RNA系统不仅可用于癌症的治疗,抑制病毒的生长以及其它抗病治疗,还可结合转基因技术培养出抗病动物.(一)反义RNA的作用机理反义RNA作用的基本原理是通过碱基配对原则与mRNA结合,形成双链以阻止后者的正常表达.反义RNA的作用方式推测有以下几种:1.在细胞质内与mRNA形成RNA:RNA二聚体,使后者不能与核蛋白     

反义技术研究进展

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合 ,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译 ,从而抑制目的基因的表达。与基因敲除(geneknockout)等功能缺失性研究方法相比 ,反义技术具有投入少 ,周期短 ,操作简单等优点 ,因此受到了广泛的关注。对几种常用反义技术的研究进展及存在的问题进行概述。     

真核基因反义RNA研究进展

反义RNA是指能与特定mRNA互补的RNA片段。本文介绍了近年来真核基因反义RNA研究的一些进展,包括不同基因反义RNA的作用,反义RNA抑制作用的特点,以及反义RNA的抑制机理。反义RNA对基因表达具有高度专一性的调控作用,因此可利用它研究特定基因在细胞生长、分化中的作用,同时,反义RNA系统也可用于抑制有害基因的表达,从而为治疗提供新的途径。     

鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对淋巴瘤细胞Jurkat生长的影响

探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)反义RNA是否对人淋巴瘤细胞Jurkat的生长具有抑制作用。含反义RNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Rodc用脂质体转染Jurkat细胞,G418筛选ODC表达抑制的细胞株,MTS法分析细胞增殖,Western blotting检测细胞中ODC蛋白表达水平,半定量RT-PCR检测细胞中ODC mRNA含量,流式细胞术检测细胞周期的变化,DNA片段化分析细胞凋亡。结果显示,成功获得ODC表达抑制的淋巴瘤细胞株J/o,ODC反义RNA转染细胞后,引起Jurkat细胞生长缓慢和S/G2细胞周期停滞,细胞对抗癌药物DFMO敏感性显著增加。由此证明,ODC反义RNA能抑制人T淋巴瘤Jurkat细胞的生长,具有治疗人白血病的潜在应用价值。     

反义RNA技术

反义RNA(antisence RNA)是一种与特异mRNA互补的RNA分子,它通过配对碱基间氢键作用与对应的RNA形成双链复合物,抑制RNA的翻译过程。利用人工合成或生物体合成特定互补RNA片段(或其化学修辞产物)抑制或封闭基因表达技术,称为反义RNA技术。本文综述了反义RNA作用机理,合成途径,并展示了该技术在研究基因功能,防治肿瘤、遗传病以及人工免疫等方面广阔的应用前景。一、反义RNA抑制基因表达机理许多实验证明,原核类生物如细菌、粘菌,     

pRNA的结构、功能及其研究近况

在噬菌体phi29中, 基因组DNA的包装需要由病毒基因组编码的pRNA参与, 6个pRNA分子通过由pRNA分子间相互作用形成的六聚体来启动DNA转运马达, 这个过程由ATP提供能量。RNA纳米技术将pRNA与siRNA、核酶、反义RNA等分子稳定结合, pRNA作为一种载体把它们准确运输到癌细胞和病毒感染细胞的作用靶点, 从而发挥它们各自的功能。作为一种非编码RNA, 对pRNA的深入研究将有助于我们了解生命起源问题, 并有着广阔的应用前景。