如意皇后粗肋草愈伤组织及丛生芽诱导培养基优化

本研究以粗肋草‘Red Valentine’带侧芽的根茎为外植体,研究不同培养基类型、不同外源激素及浓度、不同转接周期对其愈伤组织及丛生芽诱导的影响,进而优化如意愈伤组织和丛生芽诱导培养基。结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+2.0 mg/L 2,4-D和1/2MS+0.5 mg/L TDZ+2.5 mg/L 2,4-D;最佳愈伤组织分化培养基为1/2 MS+0.4 mg/L TDZ,最佳转接周期为30 d;最佳丛生芽诱导培养基为5.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA和1/2 MS+0.5 mg/L TDZ,最佳转接周期为30 d。优化培养基后愈伤组织及丛生芽诱导效率更高。本研究通过设计优化试验,筛选出了愈伤组织诱导及丛生芽诱导的最佳培养基,为粗肋草属植物的快速繁殖及规模化生产提供了一定的理论指导。     

玉米原生质体的植株再生

以玉米花粉诱导产生的胚性愈伤组织,在 N6基本培养基附加激动素2 mg/l,6-苄基氨基嘌呤1mg/l,2,4-D 0.3 mg/l,水解酪蛋白500 mg*l 及谷酰胺250 mg/l 的培养基上进行转代培养。用转代培养一年半后的胚性愈伤组织分离原生质体,原生质体培养在附加激动素0.2 mg/l,6-苄基氨基嘌呤0.1 mg/l,2,4-D 0.5 mg/1,水解酪蛋白200 mg/l,谷酰胺100 mg/l及椰乳296的原生质体培养基 Z_2中。培养4—6天后,原生质体的再生细胞进行第一次分裂;培养3星期后发育成肉眼可见的小愈伤组织。此后,需添加降低糖浓度的同样原生质体培养基 Z_2共两次。待再生愈伤组织长到直径2—4 mm 大小时,把它们先后转经第一及第二(即Z_3及 Z_4)分化培养基上诱导器官分化。最后在 Z_4分化培养基上同时有胚状体的发生及植株的分化。     

影响籼稻体细胞胚胎发生几个因素的研究

以 IR36、IR50、IR52及 IR54等品种的幼穗及成熟种子为材料,研究了蔗糖浓度、2,4-D、NAA、激动素及脱落酸对体细胞胚胎发生、结构的保持及植株分化的影响。6%蔗糖有利于胚性愈伤组织的诱导;3%的有利于胚性结构的保持及植株分化。当培养基中不含2,4-D,而含激动素与 NAA 时,幼穗直接出芽;当不含激动素而含2,4-D与 NAA 时,外植体产生非胚性愈伤组织;当不含 NAA 而含2,4-D 与激动素时,外植体产生胚性愈伤组织。认为,2,4-D与激动素是籼稻体细胞胚胎发生的基本因素,而 NAA 的作用是不明显的。不同外植体(幼穗与成熟种子)的体细胞胚胎发生,对2,4-D 与激动素的反应略有不同,幼穗更为敏感。在继代培养基中,加入低浓度的脱落酸有利于胚性结构的保持。随着继代世代的延续,分化培养中愈伤组织所表现出的绿色生长点状物不能发育成完整植株。     

水稻花粉植株的诱导及其后代观察

研究了水稻(Oryza sativa)花药的离体培养及其花粉植株后代的表现,得到如下结果: 1.用加有2,4-D 1—5毫克/升的Blaydes培养基培养水稻花药,诱导出水稻花粉愈伤组织。采用花粉处于单核期的花药进行培养比较合适。 2.诱导愈伤组织成苗,以二次诱导法效果较好。即将愈伤组织种植在低浓度激素的培养基上(IAA 0.05—0.5毫克/升,激动素1—2毫克/升),在此培养基上分化快,芽点多,但芽不易伸长;芽点出现后再移到激素浓度较高的培养基上(IAA 2毫克/升,激动素4毫克/升),很快出现幼苗。 3.水稻花粉植株二代,田间表现和室内分析结果表明基本整齐一致,没有分离。杂种F_1花粉植株后代在许多性状上超过双亲,有选种价值。说明水稻花药培养用于育种是可能的。     

体外培养和遗传育种

将lcm长的蒺藜草Cenchrus ciliariscv.75花序切段培养在补加有2,4-D(lmg / 1), 3-IAA(Smg / 1)和激动素(o.5mg / 1)的MS培养基上.然后置于25℃,- 16小时光周期下培养.4-6天后开始发生愈伤组织,21天后获得了良好增殖的愈伤组织.通常每隔一周在同样培养基上进行一次继代培养.经12-- 14周生长     

射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的研究

目的:建立射干愈伤组织的诱导体系。方法:采用MS培养基为基本培养基,研究不同浓度激素配比及不同AgNO_3浓度对射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的影响,并利用显微技术鉴定其愈伤组织类型。结果:射干无菌苗真叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 5 mg·L~(-1)+NAA 1. 0mg·L~(-1)+AgNO_315mg·L~(-1),花蕾愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 0 mg·L~(-1)+NAA 1. 0 mg·L~(-1),诱导率均高于60%,其中2,4-D对射干愈伤组织诱导至关重要,AgNO_3对射干真叶胚性愈伤组织的形成有一定的影响。结论:花蕾是射干愈伤组织诱导较理想的外植体材料,获得的高效愈伤组织诱导条件将为后续射干细胞悬浮体系的成功构建奠定基础。     

"灵发素"直接诱导马铃薯愈伤组织分化试管薯

1 植物名称马铃薯(Solanum tuberosum)中薯2号. 　　2 材料类别无菌试管苗. 　　3 培养条件愈伤组织诱导培养基:(1)MS 2,4-D 2 mg*L-1(单位下同).诱导块茎培养基:(2)MS 2,4-D 2 “灵发素“[1,2] 7.以上培养基均加0.7%琼脂、3%蔗糖,pH 5.8.放置于实验室内,没有设置特定温度与光照条件. 　　……     

骨干玉米自交系丹598遗传再生体系的建立

目的:以玉米骨干自交系丹598的幼胚为外植体,诱导愈伤组织建立遗传再生体系。方法:探讨胚龄、培养基种类、2,4-D浓度对愈伤组织诱导的影响。结果:在授粉后16～18 d,2,4-D浓度为2.0 mg/L时诱导最佳;设置N6、NB、改良NB、MS、MB等5种培养基,筛选出改良NB培养基为最佳诱导培养基;分化培养基中添加1 mg/L激动素、0.5 mg/L 6-卞基嘌呤和0.5 mg/L萘乙酸能促进绿苗分化和根系生长。结论:建立了玉米自交系丹598的优良再生体系,为以后的基因转化工作打下了良好基础。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化研究

以2个小麦品种成熟胚为外植体进行离体培养,研究了不同预处理、不同2,4-D浓度及与KT组合、不同蔗糖浓度等因素对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:4℃低温预处理可提高愈伤组织的出愈率及再生苗率,2个材料的出愈率及再生苗率均达到90%和30%以上;在不同预处理条件下,2,4-D浓度对出愈率及再生苗率的影响与基因型有关,2,4-D浓度为1~2 mg/L更有利于愈伤组织诱导及分化;附加KT能缓解高浓度2,4-D对再生苗率的抑制作用,而对于在1、2 mg/L 2,4-D的培养基中附加KT则不表现这种作用;蔗糖浓度则在30 g/L条件下更有利于愈伤组织诱导。因此通过4℃低温预处理,在MS基本培养基中附加1~2mg/L 2,4-D及30 g/L蔗糖亦可促进小麦成熟胚愈伤组织的诱导和分化。     

不同浓度激素对野生细叶结缕草愈伤组织的诱导与分化的影响

以野生的细叶结缕草的匍匐茎为外植体,MS为基本培养基,研究2,4-D和BA及2,4-D和IAA不同浓度组合对其愈伤组织诱导与分化的影响。研究表明:(1)5.0mg/L的2,4-D对愈伤组织诱导有很大的促进作用;(2)匍匐茎诱导愈伤组织宜采用MS 2.0mg/L 2,4-D 4.0mg/L IAA,产生的愈伤组织分化情况也较好。     

小麦(Triticum aestivum)幼叶愈伤组织的诱导及器官的形成

小麦发芽四天的第一片幼叶切段在含有2,4-D 并略加修改的 PRL-4培养基上,可以形成愈伤组织,并由愈伤组织生根、出苗形成再生植株。愈伤组织出现频率及生长速度与叶段部位及2,4-D 浓度有关。在2,4-D 浓度4ppm 以内,能诱导产生愈伤组织的部位是从基部至其上1 cm 左右的区域。激动素(KT)和6-苄基腺嘌呤(BA)均明显抑制愈伤组织的形成。解剖学观察表明愈伤组织来源于维管束鞘部位细胞的分裂。最后讨论了小麦叶肉原生质体培养未能成功的原因。     

川芎叶柄愈伤组织的诱导和植株再生

植物名称:川芎(Ligusticum chuanxiong Ho-rt.sp.nov.) 材料类别:栽种当年9月下旬采集的基出叶叶柄和第二年4月中旬采集的茎生叶叶柄,切成长5毫米左右的小段,每试管接种3枚。培养条件:以MS为基本培养基,蔗糖3％,琼脂0.7—0.8％,pH5.8。每升培养基里的激素成份为:诱导愈伤组织加2,4-D 2毫克和激动素1毫克或NAA1毫克和激动素0.5毫克;分化丛生小     

不同激素对小麦盾片再生能力的影响

选用10种含不同浓度2,4-D、Dicamba及2,4-D与Dicamba组合的诱导培养基和3种含0.01mg.L-1 2,4-D和不同浓度ZT的分化培养基,研究Dicamba、2,4-D、ZT对愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明:2,4-D与Dicamba组合的诱导激素在再生分化上显著优于2,4-D和Dicamba。以添加1.5mg.L-1 2,4-D和0.5mg.L-1Dicamba为诱导培养基,分化培养基添加1mg.L-1 ZT和0.01mg.L-1 2,4-D对愈伤组织分化效果为最佳,绿苗分化率最高可达90%。分化培养基中1mg.L-1 ZT有利于根的分化。该研究结果为建立高效、稳定的新疆主栽小麦品种的遗传转化系统奠定了基础。     

绞股蓝组织培养的研究

绞股蓝外植体在不同激素浓度的MS培养基上培养,经过正交试验选择了四种最适培养基配方。形态观察和同工酶测定结果表明,在MS基本培养基中添加NAA(1.0～2.0mg/L)可促进愈伤组织和根的生长;添加6-BA(2.0mg/L)也能诱导愈伤组织,并能分化丛生芽;而在6-BA(1.0mg/L)中加入低浓度的NAA(0.1mg/L)和2,4-D(0.1mg/L),对诱导愈伤组织和丛生芽的分化有增效作用。经染色体观察和试管苗大田试种,未发现遗传性变异。     

大豆未成熟胚培养中高浓度植物生长素的作用及其植株再生

用大豆(Glycine max(L.)Merr.)未成熟胚为外植体,在含高浓度 NAA 或2,4-D 的培养基上可诱导绿色结构体和体细胞胚状体。叶状、花状和喇叭形状的绿色结构体在含30mg/l2,4-D 的 MS-1培养基上可重新愈伤组织化。这种由高浓度2,4-D 诱发并保持的愈伤组织,转到低激素水平的培养基上后,能诱导出大量的同类形状的新结构体。绿色结构体可以进一步发育成叶丛状,但顶端不伸长。使用含2m g/l GA,和0.1mg/l IBA 的培养基,能促进顶端伸长和根的发育,获得正常植株。由未成熟胚的子叶(其时种子长度约4—6mm)诱导的愈伤组织具有再生能力。在含高浓度2,4-D(5-30mg/l)的培养基上诱导出的愈伤组织具有较高的产生绿色结构的潜力。而高浓度 NAA(10mg/l)培养基产生的愈伤组织具有较强的产生根状体的潜力。培养的外植体或愈伤组织在含5mg/l 2,4-D 的培养基上,不需要经常的继代培养,即可长期保存。     

狗牙根颖果胚性愈伤组织的诱导和胚性细胞的超微结构及植株再生

以普通狗牙根[Cynodon dacylon(L.)Pers.cv.'Suncitv']颖果为外植体,以MS为基本培养基,外加浓度在2.0～6.0mg/L的2,4-D,能高频率地诱导出高质量的胚性愈伤组织,其中以4.0 mg/L为最佳.胚性愈伤组织最佳继代及分化的培养方法为:用MS 2,4-D 4.0mg/L继代1～2次,然后转入1/2 MS 2,4-D 2.0 mg/L中继代1～2次,再在无激素的1/2MS中光照培养10 d,最后在MS 6-BA 3.0 mg/L中诱导分化,分化成苗率达31.7%.经电镜观察发现,胚性愈伤组织结构紧密,细胞较小,内容物丰富,而非胚性愈伤组织结构疏松,细胞巨大,内含一大液泡,几无细胞器.     

白刺花胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发

探讨不同因素对白刺花下胚轴、子叶2种外植体胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发的影响。以B5和MS为基本培养基,研究2,4-D、6-BA和TDZ对白刺花下胚轴和子叶胚性愈伤组织的诱导;在MS培养基上添加不同浓度2,4-D,研究胚性愈伤组织增殖情况;采用ABA,探究对体细胞胚发生的影响。结果表明:下胚轴比子叶更易诱导胚性愈伤组织,筛选出2种外植最佳的胚性愈伤组织诱导培养基均为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L 6-BA,胚性愈伤组织诱导率分别为77.3%和41.0%。15.0 mg/L ABA、0.2 mg/L 2,4-D和2.0 mg/L 6-BA有利于体细胞胚发生,1/3MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+2.0 g/L活性炭+25 g/L蔗糖+7 g/L琼脂的培养基可使体细胞胚萌发率达80%以上,再生植株移栽成活率高达90%。白刺花外植体种类及培养基类型均会影响胚性愈伤组织的诱导,其中下胚轴诱导效果优于子叶;MS培养基较适合启动细胞脱分化形成愈伤组织,2,4-D对胚性愈伤组织的增殖保持有调控作用,ABA有利于体细胞胚的发生。     

阔鳞鳞毛蕨孢子的无菌繁殖

以阔鳞鳞毛蕨（Dryopteris championii）成熟孢子为外植体,研究了不同植物生长调节剂及浓度对其孢子萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化及生根的影响。结果表明：1/2MS＋2%蔗糖为孢子萌发最适培养基,20 d后萌发率达65%;诱导愈伤组织的最适培养基为MS＋KT 0.5 mg.L-1＋2,4-D 1 mg.L-1,诱导率达39.8%,愈伤组织为绿色颗粒状;颗粒状愈伤组织在MS＋KT0.2 mg.L-1的培养基中生长出大量丛生芽,转化率可达66.3%;MS＋IAA 0.2 mg.L-1＋NAA 0.2 mg.L-1培养基可有效促进幼孢子体苗生根。     

濒危中药材太白米组织培养及总黄酮含量测定

以太白米(Notholirion bulbuliferum)地下小鳞茎为外植体,通过在MS基本培养基添加不同浓度2,4-D、KT、TDZ和NAA,研究不同植物生长调节剂对太白米愈伤组织诱导的影响.结果显示,4种植物生长调节剂在不同水平上对愈伤组织诱导有显著作用(2,4-D、TDZ,P<0.01;NAA、KT,P<0.05),诱导愈伤组织的最佳激素组合是0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.5 mg·L~(-1) NAA+0.2 mg·L~(-1) KT+0.1 mg·L~(-1) TDZ,愈伤组织在该培养基上继代培养有不定芽分化,如用相同浓度ZT代替KT则分化的不定芽增多.HPLC分析显示野生小鳞茎、愈伤组织和不定芽中总黄酮含量无显著差异,分别为干重的13.3%、11.4%和11.9%.     

THIDIAZURON对乌蔹莓(Cayratia japanica)体细胞胚胎发生的影响

乌蔹莓的未授粉子房外植体培养于附加不同浓度2,4-D(0,0.05,1.0,1.5,2.0mg/L单位下同)单独作用或2,4-D 与 TDZ(0.002)或 KT(0.05)结合使用的改良 MS 培养基上,诱导胚性愈伤组织。在附加2.4-D(0.5-1.0)和 TDZ 的培养基上得到最好的结果;愈伤组织诱导频率高可达86—87%。愈伤组织鲜重平均可达100mg/外植体以上。2,4-D 与 KT 结合使用时的诱导效果也较其单独使用时为好;TDZ 或 KT 与生长素结合使用时,尤其在2,4-D