荧光漂白恢复技术在细胞生物学中的应用

荧光漂白恢复(FPR)技术已发展成为定量测定细胞膜分子的流动性的方法之一。本文着重介绍了FPR技术应用于测定细胞膜中和细胞质内分子的运动,这些测定将有助于研究活细胞中膜分子的运动方式、功能及其相互关系。     

荧光漂白后恢复技术及其在活细胞分子机制研究中的应用

荧光漂白后恢复（FRAP）是一项利用荧光探针研究活体细胞中各类分子迁移特性的技术。简要介绍了FRAP技术的原理和具体实施要求,列出了动态比和扩散系数的计算公式,并例举了近几年FRAP技术在细胞分子机制研究中的应用。     

用荧光漂白恢复技术研究竹红菌乙素在小鼠肝癌细胞内的扩散过程

利用竹红菌乙素自身的荧光特征,在ＦＰＲ装置上直接测定了乙素在ＡＨ细胞内的侧向扩散系数和荧光漂白的恢复率。实验结果表明乙素在ＡＨ细胞内的扩散系数Ｄ＝３．２×１０＾－９ｃｍ＾２／ｓ＾－１荧光漂白恢复比率Ｒ＝９７．８％,上述实验说明乙素在细胞膜内与生物大分子之间没有形成共价键形式的结合状态。     

激光时间分辨荧光谱仪＊以及荧光各向异性测量

就时间相关单光子计数荧光谱仪的工作原理、实验装置的建立等问题进行了探讨。利用国产的红离子锁模激光同步泵浦腔倒空输出染料激光器等器件与进口的时幅转换器、定时恒分器建成了激光时间分辨荧光谱仪,时间分辨率为８０ｐｓ。本文还建立了荧光各向异性的测量方法,利用该方法对Ｒ－ＰＥ的旋转弛豫时间进行了测量,并与英国Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ公司生产的２９９Ｔ型荧光谱仪的测量结果进行了比较,结果证明仪器及方法都是可靠的。     

超短脉冲技术测量癌细胞荧光光谱与荧光寿命

研究用于癌症诊断与治疗的光敏剂血卟啉（hematoporphyrin derivative,HPD）的超快光动力学过程,采用超短脉冲激光光谱技术和皮秒时间相关单光子计数系统,测量经血卟啉培养的活体癌细胞与正常细胞的荧光光谱、荧光寿命特性及荧光峰值强度随时间变化曲线,并测量单一细胞内部不同位置的荧光寿命特性,观测到：癌细胞样品在645 nm处具有特有的光谱谱峰;癌细胞样品荧光寿命的快成分约150 ps慢成分约1200 ps,而正常细胞样品快成分约300 ps慢成分约2500 ps;癌细胞样品的荧光峰值强度经12小时衰减约10%,而正常细胞样品衰减约55%;在细胞内部荧光寿命300 ps的快成分十分显著,且中心部位血卟啉浓度最高.癌细胞与正常细胞的荧光光谱、荧光寿命特性及荧光峰值强度随时间变化曲线相差十分明显,反映了癌细胞与正常细胞对血卟啉亲和特性有显著的差异,测量结果确认了荧光光谱技术诊断与治疗癌症的可行性,并对发展超短脉冲激光光谱技术早期诊断与治疗癌症具有重要的指导意义和临床应用价值.     

时间分辨荧光免疫分析技术研究现状及进展

时间分辨荧光免疫分析是一种新型的超微量的免疫标记分析方法,集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身,且无放射性污染等.本文主要介绍了时间分辨荧光免疫分析的原理、优点,螯合剂的种类,以及各种分析技术及其应用现状和进展.     

IgG-Eu-IDPA对抗原IOV的时间分辨荧光免疫检测

镧系螯合物已经被广泛应用于高灵敏度的时间分辨荧光免疫分析.但是,使用紫外光激发镧系螯合物会对生物分子和细胞产生很大的损害.合成了能够被可见光(最大波长565nm)激发的IgG-Eu-IDPA,并测量了IgG-Eu-IDPA的光谱属性,如荧光寿命、在不同pH值和不同浓度环境下的荧光强度.在自制的时间分辨荧光仪上使用IgG-Eu-IDPA作为荧光探针,检测IOV抗原.数据显示,它的灵敏度远远高于传统的荧光仪.结果表明,IgG-Eu-IDPA能够在高灵敏度的原位和活体分析中作为一种新的、有潜力的荧光探针.     

人体鼻咽组织的时间分辨自体荧光光谱研究

实验研究了在397 nm半导体脉冲激光激发下,人体离体鼻咽正常和癌变组织在600 nm荧光发射波长处的时间分辨自体荧光光谱特性。利用双指数衰减方程对时间分辨自体荧光光谱进行拟合后,获得相应的荧光强度随时间的指数衰减方程以及荧光平均寿命。人体鼻咽癌变和正常组织在600 nm处的自体荧光平均寿命分别为(2.94±0.51)ns和(4.29±0.71)ns,两者之间存在显著的差异。应用时间分辨光谱技术的诊断灵敏度和特异性分别为75%和100%。初步表明了时间分辨自体荧光光谱在早期鼻咽癌诊断的应用价值,该方法可望与传统的稳态荧光光谱结合起来,进一步提高早期鼻咽癌荧光诊断的准确率。     

一台自制的激光漂白荧光恢复测量装置

细胞表面的蛋白质是能够侧向运动的,那末,它的运动方式是扩散还是流动?如果是扩散,它的扩散系数是多少?1974年蒲慕明等用光漂恢复法测出了视网膜视杆外节盘膜中视紫红质的扩散系数。同年,Peters等利用荧光素能被光漂以及异硫氰基荧光素能与膜蛋白结合的特点,测定了红细胞膜蛋白的扩散系数,从而扩大了光漂恢复技术的应用范围。以后,Jacobson等又改用了激光光源,改为激     

蜂毒素自聚集过程中间态的荧光光谱研究

应用荧光光谱及其一阶导数谱对蜂毒素在ＮａＣｌ诱导下的自聚集进行了研究,伴随蜂毒素自聚集的发生其内源荧光发射峰的峰宽在过渡点附近出现展宽并呈现出极大值,用二态转换模型可以对荧光发射谱进行较好的拟合,提示蜂毒由单体向四聚体的转化过程中不存在稳定的中间态。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2的荧光光谱学研究

用荧光光谱方法研究了江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2(NPLA_2).研究结果表明NPLA_2分子中确实含有一个色氨酸残基.且位于NPLA_2分子表面;我们还发现荧光探针bis-ANS在NPLA_2分子上有一结合区,其解离平衡常数为11.6μmol/L ;利用结合了的bis-ANS与NPLA_2分子中色氨酸残基之间的能量传递计算出两者之间的距离为17.7(?).     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2的荧光光谱学研究

用荧光光谱方法研究了江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2(NPLA_2).研究结果表明NPLA_2分子中确实含有一个色氨酸残基.且位于NPLA_2分子表面;我们还发现荧光探针bis-ANS在NPLA_2分子上有一结合区,其解离平衡常数为11.6μmol/L ;利用结合了的bis-ANS与NPLA_2分子中色氨酸残基之间的能量传递计算出两者之间的距离为17.7(?).     

竹红菌乙素对菌紫质荧光的影响

用荧光光谱方法研究了竹红菌乙素与菌紫质的相互作用。通过竹红菌乙素对菌紫质吸收光谱,对菌紫质荧光猝死的浓度和温度的依赖性以及竹红菌乙素对明暗适应菌紫质的荧光猝灭等研究表明,竹红菌乙素是一种新型的荧光猝灭剂,它对菌紫质的荧光猝灭属于动态猝死过程。竹红菌乙素对明暗适应菌紫质荧光猝灭的差别,说明这种猝灭剂可用于生物膜体系的蛋白质构象变化的研究。     

荧光显微镜观察大蒜油对腹水癌细胞的影响

用吖啶橙染色,荧光显微镜观察大蒜油对—S180,昆明小鼠,U14 C57BL/6J小鼠和L1210DBA小鼠的癌细胞作用的影响,结果表明大蒜油有直接破坏癌细胞的DNA,RNA和分裂中期染色体的作用。给药后2—6小时作用最强,12小时后癌细胞数逐渐恢复,因此给药间隔不应超过12小时。我们研究证实大蒜油有明显的抗癌作用,为临床应用提供有力的依据。     

初期采脂对马尾松木材构造的影响

广东省韶关林场采用标准的采脂工艺,在其马尾松人工林进行了两年的初期采脂试验。 在这些马尾松的采脂树的采脂盘上,主要呈现泌脂和木材增生,而在其下方距离0.5m的影响盘上。仅有一些创伤轴向树脂道和树脂囊。创伤树脂道使其邻近的轴向管胞的形状不规则,又与树轴倾斜近45°。 从山中试验区不同的松树林分,在其对照盘(对照树的)、影响盘上,自髓向外每隔一个生长轮的离析材料;另在采脂盘上密切邻近采脂面两侧,自圆盘周围向内各选4轮材料;分别测定轴向管胞的长度,得知这些30(20)年生的马尾松树仍在幼态期间,其管胞长度一般是增加的;至于采脂面两侧的管胞却显出不同程度的减短,其中一些管胞呈现种种不规则形状。     

时间分辨反射确定生物组织光学性质的方法研究

通过考虑吸收系数对漫射常数的影响,改进了时间分辨反射中两点测量生物组织光学性质的方法,对约化散射系数与吸收系数之比较小的生物组织进行了模型测量,结果表明此种不仅减小了测量的系统误差,而且扩展了两点测量法的应用范围。同时也较为详细地讨论了有效时间的选择和光源与探测点间的距离对测量结果的影响。     

甲基磺酸乙酯(EMS)对水稻离体幼穗影响的初步研究

用不同浓度的EMS处理水稻离体幼穗,测定培养初期的呼吸强度、细胞色素氧化酶活性和同工酶以及苹果酸脱氢酶同工酶,发现低浓度的EMS对细胞呼吸强度以及细胞色素氧化酶活性有刺激作用,而高浓度的EMS则表现为抑制效应。呼吸强度和酶活性与幼穗培养力之间具有平行关系。研究结果表明,EMS的原初生理效应是影响幼穗细胞的代谢过程,幼穗体细胞诱导频率的改变是幼穗培养初期供能系统受到影响的结果。     

几种虫生真菌附着胞的荧光显微及扫描电镜观察

本研究通过对细脚拟青霉、蝉拟青霉、玫烟色拟青霉、金龟子绿僵菌和莱氏野村菌在疏水表面产生附着胞的荧光显微镜观察和扫描电镜观察,明确五种虫生真菌均可产生附着胞,细脚拟青霉和金龟子绿僵菌产生单附着胞和复合附着胞两种形态,均呈椭圆至长椭圆形,如遇到不适合浸染的部位,则重新产生芽管向前延伸直至找到适合入侵的部位。蝉拟青霉分生孢子多在顶端发芽成人字形,末端形成椭圆形附着胞,该拟青霉再生附着胞能力强。金龟子绿僵菌和莱氏野村菌附着胞表面有较厚的粘液层,而三种拟青霉附着胞表面均未见有粘液层。