改良CTAB法提取番石榴叶片总DNA

目的:从番石榴叶片中快速提取高质量的总DNA。方法:改良CTAB法。主要改进之处在于不用液氮,而是直接研磨硅胶干燥样品;用高浓度CTAB、低浓度乙醇与NaCl盐析相结合等方法去除多糖。结果:应用改良后的方法可以快速提取番石榴叶片总DNA,有效去除组织中的多糖、蛋白质,抑制提取过程中的组织褐变。提取的DNA可用于限制性内切酶酶切和PCR扩增。结论:传统CTAB法经过改良,可用于快速提取番石榴高质量DNA。     

改良CTAB法提取林木树种基因组DNA的研究

目的:验证改良CTAB法提取不同林木树种基因组DNA的效果,寻求一种对于不同林木树种基因组DNA提取普遍使用的方法。方法:采用改良的CTAB法提取22种木本植物基因组DNA,并对其进行定性、定量分析及酶切分析。结果:采用本法可以去除多糖和其他次生代谢物并获得高质量的DNA。结论:该方法可以作为一种适于在实验室进行的林木树种基因组DNA的提取方法。     

应用改良CTAB法提取树莓DNA最佳条件的探索

目的:改良CTAB法提取三种树莓叶DNA最佳条件的探索及检测DNA的完整度。方法:通过改良CTAB法提取树莓叶三个品种的基因组DNA。结果:经检测,所提样品OD260/OD280值在1.6~1.9之间,得率为198~396ng/μl,电泳条带较清晰,无明显拖尾现象;提取最佳条件为水浴时间90min、CTAB抽提液浓度3%时,发现DNA完整性较好、纯度较高,可以满足相关的分子生物学研究需要。结论:该研究可以为树莓叶分子生物学的后续研究的开展奠定实验基础。     

苎麻总DNA提取的CTAB法优化方案

根据苎麻组织自身含有较多的本分类,粘状物及黄酮类等次生代谢物质的特点,对CTAB法进行优化后用于提取苎麻组织总DNA。在研磨过程中加入抗氧化剂PVP,提取缓冲液加入终浓度6%的PVP和4%的β-巯基乙醇,可防止整个提取过程中溶液变褐;在第2次用氯仿/异戊醇抽提时,加入10%的CTAB和4%的NaCl高盐溶液,以除去多糖。经几种改良方案提取总DNA的ISSR-PCR扩增结果验证,以同时加入抗氧化剂和高盐溶液的CTAB-4法效果最好。     

一种改良的植物DNA提取方法

植物组织中含有大量多糖、多酚、酯类等次生代谢产物, 要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况, 该文提出一种改良CTAB植物DNA提取方法(mCTAB), 并以10种常见植物为实验材料, 与4种常用的植物DNA提取试剂盒作对比。结果表明, mCTAB法提取的DNA产率高且质量好, PCR扩增成功率也较高, 而提取成本显著低于DNA提取试剂盒, 可有效用于植物DNA条形码等研究的植物DNA提取。     

应用CTAB法对砂梨品种DNA提取效果的研究

为了获得质量较好的DNA,我们采用CTAB法对11个砂梨品种的叶片DNA提取情况进行了研究,发现参试样品中一些样品的蛋白质含量较多,而另外一些样品的多糖、酚类物质含量较高。对于蛋。白质含量较多的这类材料,适当增加24：1的处理次数能够使蛋白质沉淀下来;对于多糖、酚类物质含量较高的材料,用5mol／L的NaCl和3mol／L的NaAc等处理能够有效的降低多糖含量。另外,对研磨样品的加入量和PVP的加入时间进行了对比,最后用双酶切、电脉检测等不同的分析方法对所得到的DNA提取物的浓度和纯度进行检测,发现加入样品量在0．3g左右、在研磨后的粗提液中加入PVP,所得到的DNA质量较好.     

CTAB法提取野野村菌基因组DNA

针对用常规方法难以提取野野村菌基因组DNA的问题,通过选用添加甘氨酸的不同培养基和不同培养时间获得的菌丝体,采用液氮研磨结合CTAB法提取野野村菌DNA,电泳检测及计算OD260/OD280值。结果表明,在添加0.3%甘氨酸的麦芽汁-酵母膏(YE)培养基中振荡培养培养3d的菌丝体适合于DNA提取,用CTAB法获得的基因组DNA,长度约为20kb,且OD260/OD280在1.8左右,达到基因组DNA-DNA杂交的要求。     

高盐沉淀CTAB法提取温室菊花基因组DNA

根据温室菊花植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对CTAB法加以改进:在待沉淀液中加入1/2体积5 mol·L～NaCI.改进后的方法获得的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰.以提取的DNA为模板,用一对引物扩增菊花中18S基因,得到条带单一,大小与已知一致,说明获得的DNA可以进行PCR扩增,EcoR I 酶切基因组DNA图谱表明,提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,可以满足相关的分子生物学研究.     

一种提取银杏中DNA的方法

对改进的SDS和CrAB两种提取DNA的方法进行了比较试验,通过DNA浓度和纯度测定及琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示,用改进的SDS法可从银杏幼叶和愈伤组织中获得DNA,其浓度分别为0.867μg·μ     

利用改良CTAB法快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA

为了能快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA,以微胚乳玉米幼叶为试材,采用改良CTAB法和传统CTAB法提取微胚乳玉米基因组DNA,并对所提取的DNA通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增等方法进行检测。两种方法所得基因组DNA的OD260/OD280在1.8~1.9之间,电泳条带清晰,无蛋白质和RNA污染,DNA无明显降解,其浓度和纯度都适合基因工程实验操作的条件。改良CTAB法与传统CTAB法相比更简便快捷,可实现大批量的不同样本基因组DNA的同时提取,提供了一种简便、快捷、有效和实用的微量提取微胚乳玉米基因组DNA方法,可满足以PCR为基础的分子生物学研究。     

一种改进的丝状真菌DNA提取方法

以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA.改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需茵体量少,而得到的基因组DNA比用传统的CTAB法得到的基因组DNA产率高,纯度好、且步骤简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA.这种方法得到的基因组DNA可用于大部分分子生物学基本实验如PCR和DNA的酶切等.     

一种改进的丝状真菌DNA提取方法

以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料, 使用优化的CTAB法提取基因组DNA。改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨, 所需菌体量少, 而得到的基因组DNA比用传统的CTAB法得到的基因组DNA产率高、纯度好、且步骤简单, 适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。这种方法得到的基因组DNA可用于大部分分子生物学基本实验如PCR和DNA的酶切等。     

CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒提取食用菌DNA

目的:为探索从食用菌子实体中快速分离和纯化DNA的方法.方法:以三种栽培的食用菌为材料,采用CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒进行基因组DNA的分离和纯化.结果:与对照相比,结合法提取DNA样品的电泳条带更规则、清晰,并且DNA的酶切效率显著高于对照.结论:该结合法是一种快捷、高效提取纯化食用菌子实体DNA的方法.     

适于涡虫基因组DNA快速制备的改良的CTAB法

提取得到高质量的DNA样品是进行分子生物学研究的必要前提。为了找到一种适用于提取涡虫基因组DNA的常规方法,我们以东亚三角头涡虫为材料,分别用改良的CTAB法、SDS法、SDS-蛋白酶K法对涡虫的基因组DNA进行了制备,并对3种方法制备的涡虫基因组DNA进行了检测与比较。根据比较结果,我们认为改良的CTAB法最适合于涡虫基因组DNA的快速制备,为涡虫的分子生物学研究打下了基础。     

一种新的CTAB加入方法对A群脑膜炎球菌荚膜多糖分子大小的影响

目的探讨CTAB不同的加入方法对A群脑膜炎球菌荚膜多糖分子大小的影响。方法采用分次加入手动搅拌和持续加入机械快速搅拌两种CTAB加入方法,纯化获得荚膜多糖粗糖,分别编为B组和C组。将两组荚膜多糖粗糖分别纯化获得精糖,分别编为D组和E组。以Sepharose CL-4B凝胶层析纯化获得荚膜多糖并检测其KD值。结果 B组荚膜多糖粗糖的KD值介于0.34~0.35之间,C组荚膜多糖粗糖的KD值介于0.03~0.05,进一步用苯酚纯化获得精糖后KD值D组介于0.34~0.36之间,E组介于0.22~0.28之间。两组相比KD值显著降低。结论CTAB的加入过程对A群脑膜炎球菌荚膜多糖的分子大小有明显的影响,CTAB沉淀时进行快速而充分的搅拌,纯化获得的荚膜多糖相对分子质量更大。     

改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA

旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法.分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果.结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮.两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别.该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定.因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测.该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别.     

一种高效的哺乳动物粪便DNA提取通用方法

以粪便为材料提取动物DNA进行动物保护遗传学和分子生态学研究的关键是能否提取到高质量的粪便DNA.然而提取方法通用性不好和产物质量不高等问题阻碍了粪便DNA分析技术的推广.本文介绍的改进型十六烷基三甲基溴化铵提取法可广泛适用于各食性哺乳动物粪便DNA提取,在11种不同食性动物的粪便DNA提取实验中验证了它的可靠性和通用性.本方法成本低廉(3元/样),用实验室常规试剂即可完成粪便DNA提取,其产物纯度高于专用试剂盒QIAamp DNA Stool Kit,在拥有超过专业试剂盒提取效果的同时尽可能的降低了实验成本,有利于粪便DNA技术的推广.