小麦全蚀病菌致病性遗传规律研究*

利用弱致病性白化突变菌株与强致病菌株进行有性重组,研究了小麦全蚀病菌(禾顶囊壳小麦变种,Gaeumannomyces gramimis var. tritici)致病性的遗传规律。结果表明,以接种株地上部干重为致病性指标时,该菌对小麦的致病性为数量遗传性状,估计控制致病性的基因数为5 ~ 7个。弱致病菌株与强致病菌株杂交F1代致病性由弱至强呈连续分布,子代致病性的平均水平接近种亲代致病性的平均值。致病性的遗传力为54.36% ~ 71.00%,平均为62.32%。致病性表型易受环境因素的影响。菌落颜色与致病性无明显相关。     

传染性法氏囊病病毒野毒株的致病性及其vp2基因比较

对4个IBDV野毒株的致病性和它们的vp2基因高变区序列同时做了比较分析。结果表明,4个IBDV毒株在致病性程度上存在较大差异。其中有一个是真正的超强毒,即GX8／99,其他几个虽然达不到真正超强毒的毒力,但也比经典的标准毒的致死性高得多。在vp2基因高变区,这4个IBDV野毒株与超强毒参考株HK46同源性很高,在DNA水平为96．8％～99．5％,在氨基酸(aa)水平为96．6％～100％o而与疫苗毒D78有很大差异,分别只有91．7％～93．6％和91．8％～93．2％。说明IBDV毒株的vp2基因高变区确实与其致病性有一定关系。特别是SD-1／97、SD-3／98、JS-30／99株之间及其与HK46在DNA和aa水平的同源性高达98．4％和98．6％以上,SD-3／99、JS-30／99株之间及其与HK46的氨基酸同源性为100％。然而,致病性特别高的GX8／99株病毒与其他3个野毒株及HK46在DNA和氨基酸水平的同源性相对较低,在DNA和aa水平的同源性只有96．8％～9712％和96．6％～97．9％。相对于国内的流行毒株和香港超强毒参考株HK46,GX8／99株在致病性和VP2高变区都已发生了一定的变异。     

犬冠状病毒大熊猫株纤突蛋白全基因的克隆与序列分析

在国内首次对犬冠状病毒大熊猫野毒株(CCVDXMV)纤突蛋白基因进行了克隆和序列测定。该基因全长4362bp,编码1453个氨基酸,N端前18个氨基酸为推测的信号肽序列,后1435个氨基酸构成成熟蛋白。与GenBank中已发表的11个CCV毒株s基因相比,s基因核苷酸序列同源性在40．2％-99．5％之间;推导的氨基酸序列同源性在15．9％-99．O％之间。DXMV株s基因变异区主要集中在该基因前1／2处,其中350．370、439．478、1718．1818三个区域碱基变异较大,而1060．1700区却十分保守。基于s全基因及其蛋白的聚类分析表明,DXMV株与K378、NVSL和USpatent株亲源关系最近。推导的DXMV株s蛋白氨基酸序列潜在的N-联糖基化位点与CCV强毒V54相同,为34个,比Insavc．1弱毒多一个;其中第566．568位糖基化位点为多数强毒拥有而弱毒没有的。另外,DXMV株S蛋白疏水性及抗原表位与其它毒株有一定的差异,这些差异对DXMV株致病性和免疫原性等影响尚待进一步的研究。     

定向选育衣康酸高产菌株的研究

以衣康酸生产菌土曲霉Ａ９００２为出发菌株,经紫外线及亚硝基胍复合诱变后再行定向选育,即在以衣康酸为唯一碳源的培养基中富集不能同化衣康酸的菌种,将将它们涂布在含乌头酸酶抑制剂（单氟醋酸）的高糖、高衣康酸平板培养基上,最后从中而筛选出一支衣康酸氧化酶弱,乌头酸酶活强,并耐自身代谢产物的高产突变株Ａ９００３。此菌株在摇瓶培养７２ｈ后,产酸为９．２％,转化率为５８．１％,在１００ｍ＾３发酵罐生产性试验中,     

210株肠道致病菌的分类及耐药性分析

目的：探讨本地区肠道致病菌的分类及主要致病菌的耐药性,给临床治疗腹泻疾病提供指导。方法：药敏试验采用K-B法,用WHONET4软件进行数据分析。结果：210株肠道致病菌中,志贺菌属占70％,沙门菌属占3％,致病性大肠埃希菌占4．8％,副溶血弧菌占3．8％,阴沟肠杆菌占3．3％,鼠伤寒沙门菌占2．4％,霍乱弧菌占1．9％,其他占10．8％等;在志贺菌属中,福氏占87％,宋内占13％。福氏和宋内志贺菌对三代头孢和IMP较敏感,对复方新诺明耐药率较高。结论：福氏志贺菌是肠道的主要致病菌;临床怀疑菌痢时,应首选三代头孢、IMP。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJ株致弱过程中遗传变异和致病性分析

为了研制高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)弱毒疫苗,将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)TJ株进行了致弱驯化,在Marc-145细胞上对其进行了连续传代,每5～10代进行噬斑克隆纯化病毒。对致弱过程中不同代次病毒进行遗传变异及致病性分析。结果表明,TJ株在致弱过程中各基因均存在不同程度的变异,至第140代,共有58个氨基酸发生突变,同时在非结构蛋白nsp2区域,在不连续的30个氨基酸缺失(481位和533～561位)之后又出现连续120个氨基酸的缺失,与VR-2332相比,该缺失位点位于推定氨基酸序列的628～747位。动物接种试验结果表明,TJ株经Marc-145细胞传至第20代时,病毒对猪的致病性明显减弱,推测TJ株在这一传代过程中非结构蛋白nsp2-nsp5、nsp7和结构蛋白GP5所发生的遗传变异对病毒毒力致弱起到一定作用。     

溶藻弧菌的毒力相关基因及其对小鼠的致病力

【目的】通过多重PCR检测和小鼠动物实验,对溶藻弧菌环境分离株的毒力因子进行评估,以期获得较强致病菌株和弱致病菌株之间的差别,并初步探讨该菌毒力因子对小鼠的致病机理。【方法】采用多重PCR体系检测毒力相关基因,我妻氏血平板溶血实验和平板酶活实验检测溶藻弧菌株的溶血素和胞外酶;以昆明小白鼠为实验动物,攻毒方式为灌胃和腹腔注射,根据小鼠的致病症状和死亡情况来分析和对比溶藻弧菌的胞外分泌物以及菌体本身的毒性。【结果】10株溶藻弧菌产淀粉酶、卵磷脂酶的比例为100%,脂肪酶、明胶酶次之(为70%),脲酶均未被检出;神奈川现象阳性菌株率为60%。毒力基因检测的结果显示10株溶藻弧菌中toxR、Collagenase、tlh、FlaA、ompW、AspA、fur这些与毒力有关的基因均有分布,而toxS、trh、tdh、UreR并未检出。10株溶藻弧菌中的VA009对小鼠显示了较强的致病性,能造成腹腔积液,经腹腔注射感染此菌后7 d内死亡率高达80%。【结论】不同的溶藻弧菌对小鼠的致病性存在较大差异,溶藻弧菌菌体本身比胞外分泌物对其毒性的贡献要大,而副溶血弧菌的毒性则由其胞外分泌物起主要作用;比较我们筛选出的强致病菌株与弱致病菌株,其上述毒力基因的分布并没有差别,说明溶藻弧菌可能存在一套与副溶血弧菌不同的独立的毒力基因系统。     

儿童细菌性腹泻病原菌分布及耐药性分析

目的 了解小儿细菌性腹泻的病原菌分布及耐药情况。方法 对773例临床上疑为细菌性腹泻病的患儿的粪便标本进行培养、鉴定及药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测。结果 773例标本中分离出阳性菌株671株,总检出率为86．6％。其中埃希菌属、志贺菌属及耶尔森菌3种致病性细菌占阳性菌株的54．5％,肠杆菌属、非发酵菌群、酵母样真菌、肠球菌属、变形杆菌属、克雷伯菌属和枸橼酸杆菌属等条件致病菌占阳性菌株的45．5％。埃希菌属及志贺菌属对头孢他啶及氨曲南耐药率低（16．4％以下）,而肠杆菌属等条件致病菌对常用抗生素耐药率均较高。G^-杆菌中ESBLs的检出率为38．3％,其中大肠埃希菌占66．7％。结论 埃希菌属是儿童细菌性腹泻病的主要致病菌（50．2％）,且耐药率及ESBLs产生率高,但肠杆菌属等条件致病菌检出率也较高（45．5％）,且耐药率高,可能与抗生素广泛使用,肠杆菌群失调有关,应引起高度重视。     

猪瘟病毒糖蛋白E0基因的克隆及其表达研究*

用ＲＴ－ＰＣＲＡ法扩增分别获得了中国猪瘟病毒强毒石门株和免化弱毒株糖蛋白Ｅ０基因ｃＤＮＡ,并克隆到ｐＧＥＭ Ｔ载体中测定其核着酸序列和推导出其对应氨基酸序列;结果表明这两个毒株间的Ｅ０基因核着酸序列同源性为９５．３％,氨基酸序列同源性为９４％,有１４个残基的差异;与几个代表毒株ＡＬＤ株、ＧＰＥ株、Ｂｒｅｓｃｉａ株、Ａｌｆｏｒｔ株和国外测得的免化弱毒Ｃ株相应序列进行比较,所测石门病毒核苷酸序列与上述各株对应序列的同源性分别为９８．０％、９７．１％、９２．７％、８６．８％和９５．４％;氨基酸序列同源性分别为９     

临床常见G^＋致病菌的种类及耐药性的研究

目的：调查我院常见G^＋致病菌的种类及其对目前常用抗生素的耐药现状,为临床医生合理选用抗生素提供数据资料。方法：从3286个样本中分离到206株G^＋致病菌,用全自动微生物分析仪-VITEK32进行菌种鉴定及药敏实验。结果：206株G^＋致病菌经鉴定属于6大类,其中金黄色葡萄球菌,74株,占35,9％;溶血葡萄球菌,47株,占22．8％;表皮葡萄球菌,47株,占22．8％;肠球菌属,33株,占16．0％;肺炎链球菌,3株,占1．5％;β-溶血链球菌,2株,占1．0％。肺炎链球菌和β-溶血链球菌仅对检测的14种抗生素中的少数敏感。在对14种抗生素的耐药性实验中,药效普遍较差的抗生素为：青霉素、庆大霉素、苯唑西林。它们三者的平均药敏感率依次为：16．52％、18．42％和21．07％：结论：临床G^＋致病菌的耐药性问题已非常严峻,合理的选择和使用抗生素已十分重要．     

1株枯草芽胞杆菌体外拮抗6种肠道致病菌的研究

目的研究枯草杆菌BS-3株对大肠埃希菌等6种肠道致病菌的拮抗作用。方法通过在体外BS-3菌株分别与大肠埃希菌等6种致病菌混合培养后,观察不同时间内各菌的菌量变化。结果BS-3菌株与6种肠道致病菌混合培养24、48、72和96h,其菌量逐渐增加;6种致病菌的菌量随着培养时间延续逐渐减少,其中产毒性大肠埃希菌、致病性大肠埃希菌和宋内志贺菌与对照组比较差异更明显。结论BS3菌株在培养生长过程中,可抑制大肠埃希菌等6种肠道致病菌的生长。     

不同致病型马立克氏病病毒DNA聚合酶基因序列比较

为了分析马立克氏病病毒(MDV)致病型与其DNA聚合酶基因的关系,本研究比较了9个不同致病型的该基因的同源性关系,这包括四种不同致病型的国际参考株即弱毒疫苗株CV1988／Ripens株、强毒株GA、超剜毒株Md5和特超强毒株648A;中国疫苗株814、中国强毒参考株Jing-1及3个中国野毒株。结果表明：MDV的DNA聚合酶基因非常保守,在比较的9个毒株间,该基因上游约369个碱基的调控序列的同源性在96．7％～100％之间,该基因编码的1220个氨基酸序列的同源性在99．2％～100％之间。尽管不同毒株在一些位点上出现了氨基酸的变异,但这些变异与病毒的致病型或地域分布没有明显的关系。     

临床常见G-致病菌的种类及耐药性的研究

目的:调查我院常见G—致病菌的种类及其对目前常用抗生素的耐药现状,为临床医生合理选用抗生素提供数据资料。方法:从3286个样本中分离到742株G—致病菌,用全自动微生物分析仪--VITEK 32进行菌种鉴定及药敏实验。结果:742株G—致病菌经鉴定属于14大类,其中铜绿假单胞菌,170株,占22．91％;大肠埃希氏菌,145株,占19．54％;鲍曼不动杆菌,100株,占13,48％;产酸克雷伯菌,84株,占11．32％;其它10种G—致病菌所占的比例均小于8％。鲍曼不动杆菌、嗜麦芽假单胞菌、产气肠杆菌三种菌对检测的17种抗生素中的极少数敏感。在对17种抗生素的耐药性实验中,药效普遍较差的抗生素为:替卡西林、头孢呋辛、头孢噻吩三者的平均药敏感率依次为:20．72％、17.21％和11．71％。结论:临床G—致病菌的耐药性问题已非常严峻,降低G—致病菌的耐药性和控制其传播以迫在眉睫。     

丹东市熟肉制品中食源性致病菌污染状况的调查研究

为了解丹东市熟肉制品中沙门菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌的污染及菌相分布状况,为丹东市熟肉制品中致病菌污染提供本地资料,以及熟肉制品卫生监督提供科学依据。依据国标方法以及采用全自动酶联免疫荧光快速筛选仪进行筛选和BBL Crystal细菌鉴定仪鉴定,对130份样品分别进行上述致病菌分离、血清学和生化鉴定。结果共检出致病菌15株,总检出率为11．5％,酱卤类检出率为14．0％、烧烤类检出率为7．5％、白切类检出率为12．5％,其中沙门菌4株、单核细胞增生性李斯特菌4株和金黄色葡萄球菌7株。说明丹东市熟肉制品中存在食源性致病菌污染,其中金黄色葡萄球菌污染最严重。     

PCR-RFLP检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点突变

四川农业大学谭炳乾、王红宁和叶如俊等先生利用PCR-RFLP法检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点的突变。他们测定了16株猪源致病性沙门氏菌对5种常用氟喹诺酮类药物的最低抑菌浓度（MIC）。结果表明对此5种药物的耐药率在31．2％～56．2％。分别以质粒和染色体为模板,应用PCR扩增16株沙门氏菌的gyrA基因,以后所有菌株均获得以染色体为模板的扩增产物,还从1株鼠伤寒沙门氏菌获得了以质粒为模板的扩增产物。     

鸭副粘病毒WF01 D株F基因的测序与蛋白特性分析

用鸭副粘病毒凤阳分离株WF01 D作9～10日龄SPF鸡胚的尿囊腔接种,成功增殖了该病毒,采用一步法RT-PCR技术扩增WF01 D病毒的F基因,获得了1条长约1．7kb的特异性条带。用PCR产物直接测序。测序结果表明,扩增片段大小为1782bp,含有1个1662bp的开放性阅读框,编码554个氨基酸。核苷酸同源性分析表明：WF01 D株与国内外其他NDVF基因的同源性为84．5％～97．0％,其中与国内标准强毒株F48E9的同源性为86．6％,说明WF01 D与国内外的传统毒株有较大变异。与Taiwan95株和J株的同源性为93．6％和97．0％,说明WF01 D与Taiwan95株和J株亲缘关系较近,具有较高的相似性。F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112Arg-Arg-Gln-Lys-Arg-Phe117,表明为NDV的强毒株。蛋白疏水性和抗原性分析表明与标准强毒F48E9株相比没有太大的变异。     

抗氰交替途径参与马铃薯软腐病菌对马铃薯块茎的侵染

马铃薯软腐病菌中的强致病菌Ｅｃｃ、弱致病菌Ｅｃｃｂ在马铃薯块茎中诱导抗氰交替途径运行的能力依次为Ｅｃｃ、Ｅｃｃｂ。即病原菌的致病性越强,诱导抗氰交替途径的能力越强,显示病原菌对寄主植物的侵染过程与寄主植物体内抗氰交替途径的运行密切相关。ＳＨＡＭ抑制剂试验表明病原菌对寄主植物的侵染过程中寄主植物中抗氰交替途径的运行可增强寄主植物的感病性。信号传导试验显示ＬａＣｌ３、ＬｉＣｌ可通过促进体内抗氰交替途径     

B．animalis V9对腹泻动物的保护性作用及其机制研究

目的研究益生菌B.animalis V9对腹泻动物的保护作用及其对腹泻致病菌的拮抗效果。方法采用自制的腹泻SPF鼠,喂服B．animalis V9,观察并检测腹泻致病菌,并在体外试验益生菌B．animalisV9对腹泻致病菌的拮抗作用。结果SPF鼠致泻动物模型喂食B．animalisV9,剂量为1．0×10^8CFU/（只·d）,3d后腹泻治愈率为90％,死亡率为9％,对照组自然恢复率为16％,死亡率为41％,其余仍有不同程度的腹泻现象。B．animalis V9在体外对志贺痢疾杆菌、沙门菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌有不同程度的拮抗作用,共同培养60h后均未检测到上述4种致病菌。结论B．animalisV9可以有效的对腹泻小鼠进行治疗,其机制在于B．animalisV9对致泻菌株具有一定程度的拮抗作用。     

东亚飞蝗虫病原褪色沙雷氏菌的鉴定与检验

病原褪色沙雷氏菌的有效分离与鉴定对控制由褪色沙雷氏菌引起的养殖东亚飞蝗感染病均具有一定的参考与应用价值,同时将为对蝗灾的生物防治研究提供借鉴。对从发病死亡的养殖东亚飞蝗中分离的10株细菌,进行了表观分类学指征、16S r RNA基因序列与系统发育、人工感染的致病作用等方面的检验与分析。结果表明为沙雷氏菌属的褪色沙雷氏菌,对供试养殖东亚飞蝗显示强致病性。褪色沙雷氏菌对东亚飞蝗有强致病性,是蝗虫养殖的重要致病菌。     

东亚飞蝗虫病原褪色沙雷氏菌的鉴定与检验北大核心CSCD

病原褪色沙雷氏菌的有效分离与鉴定对控制由褪色沙雷氏菌引起的养殖东亚飞蝗感染病均具有一定的参考与应用价值,同时将为对蝗灾的生物防治研究提供借鉴。对从发病死亡的养殖东亚飞蝗中分离的10株细菌,进行了表观分类学指征、16S r RNA基因序列与系统发育、人工感染的致病作用等方面的检验与分析。结果表明为沙雷氏菌属的褪色沙雷氏菌,对供试养殖东亚飞蝗显示强致病性。褪色沙雷氏菌对东亚飞蝗有强致病性,是蝗虫养殖的重要致病菌。