超薄切片染色后一种简易快速的洗涤法

超薄切片在电镜观察之前染色这一关是比较麻烦,也是比较重要的一关。现在LKB公司虽然已经生产出一种超薄切片自动染色器,每次同时能染色25个铜网,给超薄切片染色带来了很大的方便。但是该仪器价格昂贵(近一万美元),很不经济。因此目前大多数工作者仍以传统的方法进行染色,即液滴染色法。但用这种传统的方法染色是很麻烦的,尤其是在染色后     

薄切片的放射自显影术

薄切片是指厚度为0．5～1μm的树脂类切片。文献中称它为厚切片（thicksection）或半薄切片（semithinsectio）,籍以与电镜观察用的薄切片（thinsection）区别。我国已习惯称电镜用的切片为超薄切片,因此,把这类切片称薄切片就能说明其比超薄切片厚,比普通石蜡切片薄的特性。用薄切片作放射自显影具有下列优点：（1）改善分辨力：放射自显影象的分辨力与样品的厚度成反比,薄切片的厚度低于普通石蜡切片,所以其分辨力高于用石蜡切片制作的放射自显影象的。（2）减少人工假象：用薄切片作放射自显影,不需去除包埋剂,因此,提供了平正…     

用发环捞取冰冻蚀刻复型膜

发环是实验胚胎学术中常用的工具,用来割取胚胎组织。在电镜术中也曾有人用来捞取超薄切片,将之放到带有支持膜的铜网上,但目前各实验室都不采用此方法。生物组织冰冻蚀刻复型膜同样需要将膜捞到铜网上才能进行电镜观察。原来我们采用吸管捞取法,或用铜网捞取,结果发现在频繁的清洗过程中,复型膜往往粘贴在玻璃壁上,或     

动物细胞压制标本方法

在观察动物各器官组织的细胞形态时,常用切片法制作标本。但制作切片需一定的设备,制作技术也较复杂。用压制标本的方法既简单,效果又好,如用脊髓压制成脊髓神经细胞标本,可见细胞质内的尼氏体和神经细胞突起。压制标本法是把一些较软的组织或经药剂处理使之变软的组织,用双载片加玻璃纸垫衬挤压,使其变成薄膜状,再经过其他制片步骤制成显微观察标本。下面举两例介绍本方法的步骤、特点。     

硅烷化氨基树脂用作电镜标本的水溶性包埋介质

氨基树脂可以在存在水的情况下固化,从而可以避免生物样品中的脂类因接触脱水用的有机溶剂而造成的流失。掺入少量的低分子量聚乙二醇(PEG-400)可以降低甲醛—戊二醛—尿素合成的氨基树脂固化块的脆性。固化后的标本用双三甲基硅基乙酰氨(BSA)处理,可降低树脂的亲水性,提高超薄切片的质量。蛙卵经过戊二醛固定、锇酸再固定、单宁酸媒染和醋酸铀整体染色(G-O-T-U处理),氨基树脂包埋和硅烷化反应(APE-Si处理);切片后用醋酸铀和/或柠檬酸铅复染,可以见到卵黄粒脂蛋白的晶格和边缘区中的小“脂泡”结构,后者是常规的Epon 812包埋法难以清楚显示的。硅烷化氨基树脂可以作为研究脂类超微形态的一种电镜标本的水溶性包埋介质。     

环氧树脂厚切片的染色

供电子显微镜观察的超薄切片,一般用各种环氧树脂作包埋剂。用环氧树脂的包埋头也能切成厚1—2微米的切片,供光学显微镜观察。这种厚度的切片与几百埃计算的超薄切片相对而言,可称之厚切片或半薄切片。在超薄切片之前,用环氧树脂包埋头先切     

介绍一种超薄切片中细胞定位的薄层包埋方法

电子显微技术中,对研究材料中的特定组织或细胞的定位在超薄切片时是最困难的一步。曾提出的用还氧树脂厚切片重新包埋的方法以及类似的厚切片重新粘贴法在克服这一困难上有很好的效果。对于单细胞或分离的原生质体,以及花粉和萌发的花粉管等材料,电镜样品的制作常用离心进行材料的收集、固定、脱水和渗透等步骤,并按寻常的方法     

蕲蛇酶（Acutobin）对家兔及大鼠血小板超微结构的影响

目的 应用电镜研究蕲蛇酶对血小板超微结构的影响以探讨用药后血小板减少的原因。方法 （１）家停（Ｎ＝６）静脉注射蕲蛇酶前及注射蕲蛇酶（１ＡＵ／ｋｇ及３ＡＵ／ｋｇ）后４ｈ心脏采血,制备血以标本及超薄切片,同时摘取脾及肺按常规制作超汪切片,进行电镜观察;（２）大鼠（Ｎ＝４）腹腔注射蕲蛇酶３ＡＵ／ｋｇ后分别于２、８、１６及２４ｈ摘取脾、肺脏制作标本进行是观察。结果 蕲蛇酶１ＡＵ／ｋｇ静脉注射组的家兔,血小     

应用于电镜生物制样的几项技术

随着电镜技术的不断发展,生物制样方法也日益丰富,虽然透射电镜超薄切片样品制备、扫描电镜常规及“O-D-O”冷冻断裂样品制备等方法已成为规范的手段,并被广为应用,但广大生物工作者对这些规范方法中的个别处理步骤,仍在探索用新的处理技术取代、完善或丰富它们。笔者基于自己工作实践并综合有关文献,对以下几项技术作些介绍。     

将电子显微镜所拍摄的负片制成24毫米×36毫米幻灯片的简易快速方法

在做学术报告和技术交流时,大都将不同规格的电镜底片制作成24毫米×36毫米的幻灯片。通常把电镜所拍摄的负片制成幻灯片时,先要把负片印成相片,用相机把相片用色盲片翻拍下来,再用色盲片拷贝成幻灯片。这些过程不但时间长,手续繁杂,而且经多次翻拍,每次很难保证不丢失细节,有的还要借助于体积较大,结构较为复杂的翻拍机进行。     

一种冰冻刻蚀装置的设计及应用

冰冻刻蚀(或断裂)技术与其他常规电镜技术相比具有许多优点。样品的快速冰冻可起到物理固定的作用这不仅减少了化学固定引起的人为改变,而且也省去了固定和脱水等步骤;对生物标本进行不同时期的冰冻可以得到不同阶段的细胞复型;在膜的研究方面;它可与生物化学方法相辅,同样起到生物化学方法所起的弱化膜疏水键的作用,从而使两层疏水性面的任何侧面的三维结构暴露出来,远比超薄切片所得到的两维片层结构要丰富。     

伦敦白胶和茶：一种既快又安全的用于透射电子显微镜的细菌样品制备方法

【目的】检测乌龙茶提取物是否可作为电子染色剂取代醋酸双氧铀用于细菌细胞染色,使其能在透射电子显微镜下进行观察。【方法】利用伦敦白胶对细菌样品(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌)进行胶块的制备,再在复染铅与不复染铅这两种情况下对超薄切片样品进行3种不同染色剂的电子染色,之后在透射电子显微镜下观察比较其不同之处。这3种不同的染色剂分别是醋酸双氧铀、0.05%乌龙茶提取物以及0.1%乌龙茶提取物。首先将带有超薄切片样品的铜网悬浮于不同的待比较染液中10?15 min,若需进一步用柠檬酸铅复染,则将经3次蒸馏水冲洗过后的铜网再次悬浮于柠檬酸铅染液中8?10 min。【结果】复染铅的情况下,在透射电子显微镜下无论是大肠杆菌还是金黄色葡萄球菌,利用3种电子染色剂进行染色的结果均非常相似。【结论】实验结果表明,在观察细菌结构中,乌龙茶提取物可以替代醋酸双氧铀进行透射电子显微镜样品的电子染色。     

少量贴壁培养细胞电镜原位包埋方法的探讨

该文探讨了对少量贴壁培养细胞较易操作且能保存较好超微结构的透射电镜样品包埋的方法。将Hela细胞分为三组:(1)不使用环氧丙烷,将树脂胶囊直接倒扣包埋于塑料培养皿;(2)不使用环氧丙烷,将细胞爬片倒扣包埋于胶囊;(3)使用环氧丙烷并将细胞爬片倒扣包埋于胶囊。将三组带有细胞的树脂胶囊进行超薄切片,电镜观察后发现,第一种方法包埋简便,超薄切片上无细胞缺失孔洞,且超微结构保存较好。     

染色体显带和姐妹染色单体“色差”的电镜研究

本工作以中国仓鼠Don细胞和人的外周血淋巴细胞作为研究材料,经适当低渗和固定,用水面漂膜气干法使染色体充分铺展在Parlodion载膜上,然后通过水面下沉法制成电镜铜网标本。染色体标本经过酸、碱、酶、热等多种处理,得到未经染色的电镜水平的G带、C带、Cd带、C亚分带、R带以及未经任何差别染色处理的姐妹染色单体“色差”。电镜观察结果表明,染色体结构上的松紧是带谱的物理基础。G带似乎反映了染色体内在结构原有的紧缩程度的差异性,各种处理可以使这一差异性增强,甚至发生转变,从而出现多种带谱。姐妹染色单体“色差”可能是由于BrdU等碱基类似物不同程度的掺入DNA,致使DNA和蛋白质的结合发生变化,从而不同程度地影响了染色单体的螺旋和凝集,导致姐妹染色单体在结构上发生致密和疏松的差异。     

观察壳状地衣结构的切片制作方法

可先采集标本连同附属物(一块岩石或树皮)保存好。用前1—2天把壳状地衣连同附属物浸于水中。待地衣由褐变绿张开后,用镊子取一大片标本,底面向上,用三片双面刀片(中间的一片稍抬高些)在壳状地衣的中部横切,取其最薄一片横切片,切面向上放在载片中央的水滴中,盖上盖片即可观察。在低倍镜下,中     

电镜Formvar膜制备要点

在光学显微镜下研究各种对象时,标本都是放在载玻片上,但在电镜下,由于电子不能穿透玻璃,所以不能用玻片作为标本的支持物,于是便采用一种很薄的电子透明薄膜附着在金属网上作为支持膜,用以支持所要观察的各种样品。金属载网一般有直径3毫米与2毫米两种,常用的载网是铜质的,故称铜网,铜网上的这层薄厚度约200A。如果膜太薄时,样品容易漂移或被电子束打破,膜太厚时,分辩率将降低。支持膜除了有一定的厚度和机械强度外,这层膜还应具有透明,在电镜下无可见的结构及与所装载的样品不起化学反应等特性。常用的支持膜有火棉胶膜和Formvar膜。高分辩研究时用碳膜或微筛膜(即带孔的膜)。由于Formvar膜     

电子显微镜超薄切片常规技术

本文将简要介绍国内电子显微镜(简称电镜)超薄切片的常规技术,供初学者便于了解和使用这种技术。表1介绍了人的眼睛借助仪器可以观察的范围。在电镜日常工作中,如何提高电镜的分辨率使之达到预期的目的,标本制备工作是十分重要的环节。也是电镜工作中最繁重、最艰巨的工作。这方面国内外均有专著出版。现结合前人的经验和国内一些实验室常用的方法和操作规程加以介绍。     

显示环氧树脂厚切片中多糖,蛋白质和脂类的细胞化学方法

用花生(Arachis hypogaea L.)种子的子叶组织作为模式材料,Epon 812包埋的组织进行厚切片后,按下列三步染色。第一步,PAS 反应:(1)在0.5%高碘酸(0.3%硝酸配制)中10分钟;(2)自来水洗1—2分钟,蒸馏水经过;(3)锡夫试剂中30分钟;(4)偏亚硫酸氢钠溶液三次洗涤,每次2分钟;(5)自来水洗5分钟,蒸馏水经过。第二步,苏丹黑 B 液染色:(1)70%酒精中1—2分钟;(2)新鲜配制的0.3%苏丹黑 B 液(70%酒精配制)中染色,40—60℃,30分钟至1小时;(3)70%酒精中分色1分钟;(4)自来水冼,蒸馏水经过。第三步,考马斯蓝染色:(1)7%醋酸中1—2分钟;(2)1%考马斯蓝(7%醋酸配制)中染色,60℃,20分钟;(3)0.1%醋酸液中分色1分钟;(4)自来水冼5分钟,蒸馏水经过;(5)自然干燥或在40℃电热温箱中烘干。干燥后的切片用甘油胶封固。经这三步染色的切片,细胞内的多糖、脂类和蛋白体同时被显示:淀粉粒及纤维素的细胞壁为樱红色,油滴为黑色,蛋白体为蓝色。制片能长期保存。     

简易霉菌活体标本制片法

青、曲霉活体标本制片方法如下: 1.载片的夹法取宽2—3厘米刨平木板条(长度视选用器皿内径长度而定),每组四根,用胶筋先将每二根一端扎好固定,然后将干净的载片夹入中间,载片每端夹入3—5毫米。载片安排好后,再分别将木条的另一端用胶筋固定好(如图示)。     

一种重包埋方法的应用

目前普遍使用的简单定向方法,是先在包埋对使样品定向,以后再将聚合好的包埋块切一张大面积的1—2微米的厚切片,经光学显微镜检查找出所需要的部位,做好标记,然后对照厚切片修整样品再作超薄切片。Grimley 曾报道一种简单的重包埋方法,将包埋的组织块简单地切成一张1—8微米的厚片,贴在盖玻片上染色后,在光学显微镜下找出需要进行电镜观察的部位,标上记