小鼠骨髓细胞的染色体制备

在实验教学中,我们借鉴有关方法,经过多次实践,证明用小鼠骨髓细胞作动物染色体的制备实验,方法简便可靠,结果明显.现介绍如下,供高等院校或中学生物学实验参考. 1.前处理实验用小白鼠(重25克左右),腹腔注射0.1毫升0.1％的秋水仙素溶液. 2.取材注射后2.5—3小时,用乙醚将小鼠麻醉(或直接处死小鼠),立即取出股骨,剔净肌肉. 3.低渗用剪刀将股骨两端剪开,用注射器吸入1毫升0.05M氯化钾低渗液,插入一端,冲洗出骨髓细胞,滴于培养皿中的载玻片上(载玻片置于二根玻棒之上).再加入适量的低渗液,并用滴管展开.盖上培养皿,在37℃下低渗处理20分钟. 4.固定低渗后,往培养皿中缓缓注入甲醇、冰醋酸固定液(3:1),盖上培养皿,固定100分钟.换入无     

小鼠中期染色体制备方法探讨

目的:寻找小鼠细胞中期染色体制备过程中理想的取材方法和低渗的最佳时间,以及制片时滴片的最佳高度。方法:根据以往小鼠染色体制备方法的基本步骤,在取材方面进行对比,同时分别设置4个加入低渗液的时间和4个滴片高度进行试验对比。结果:各低渗时间段和各滴片高度所制备的结果存在一定的差异性,制备成功率和良好率最高的低渗时间为25 min,滴片高度为20 cm。结论:取材骨髓比较容易和简洁制备中期染色体,最佳低渗时间为25 min,最佳滴片高度为20 cm。     

快速制备小鼠外周血细胞染色体

在实验研究中,选择和建立适当的动物模型是一项很重要的工作。我们在急性辐射损伤的有关实验中,从细胞染色体观察的需要出发,常选用小白鼠。由于应用外周血细胞体外培养一般费时较长(需3—5天),加上培养条件要求较高,因此带有一定局限性。同时,由于人为培养条件常引起一些不应有的染色体变化,如间隙、断裂和其他结构异常等;或由于培养过程中细胞死亡,和随后生长过程中自然修复,而使某些染色体畸变丢失,会影响一些研究的真实性。我们参考部分资料,     

小鼠卵母细胞减数分裂染色体的制备

PreparationofMeioticKarytypeofMouseOocyteLiChaojunYanLeipingZhangXiranChenYifeng(BiologyDepartmentofNanjingNormalUniversity,Nanjing210097)哺乳动物的卵母细胞的减数分裂过程中存在两次自发的停滞现象,第一次是在第一次减数分裂前期的双线期,这一静止期持续很长时间,一直到动物性成熟后卵母细胞进入发有周刎,在保住腺激素的作用下,卵母细胞的第一次减数分裂才重新启动．完成第一次减数分裂后．又停滞在第二次减数分裂的中期,在椅子或化学因素刺激的作用下,完成第二次减数分裂[4]．因此,对哺乳动物的卵母细胞在一…     

小鼠卵母细胞减数分裂染色体的简易制备

正常的减数分裂是有性生殖的前提,它保证了上下代之间染色体结构和数目的稳定性。几乎所有的核型异常都来自减数分裂过程中的错误,这些错误包括同源染色体不配对、染色体不分离(首次和二次不分离)、染色体结构畸变等。卵母细胞减数分裂过程中存在着两次停滞期,其中第一次停滞期长达几个月至几年甚至几十年。在此期间卵母细胞受环境或自身病变的影响,极容易发生染色体畸变。有报道表明,卵母细胞比精母细胞在减数分裂过程中更容易发生错误。     

快速制备小鼠外周血染色体的方法

小鼠骨髓细胞染色体制片早有报道川。近 年来对难度较大的小鼠外周血培养的染色体制 片也有报道^[2,3],但由于耗时较长,效果不够理 想。为此,我们在PrasadE9〕和Clement等[53试验 的基础上摸索出了一套小鼠外周血染色体的快 速制备法（总共只需要6小时左右）。     

制备绒毛细胞染色体的研究

在以往工作的基础上,建立了制备绒毛细胞染色体的24小时培养并结合酶解的方法。主要特点是将解离细胞、低渗处理与秋水仙素处理合并为一个步骤。用这种方法能使绒毛细胞染色体的制作成功率明显提高,并对研究内容进行了讨论。 Abstract:A study of enzymolysis for chromosome preparation from chorionic villus was established upon previous work .Essential feature of this technique was to merge cell separation from the cytotrophoblastic layer,treatment with hypotonic solution and colchicines treatment into one step.This technique significantly improved the success rate of chromosome analysis from CVS.The results of the study were discussed.     

小鼠网织细胞腹水瘤染色体的研究

本文首次报告了我国建立的小鼠实验肿瘤模型网织细胞腹水瘤(Ascitesreticulum-cell sarcoma,简称ARS)的核型及带型分析结果。ARS是超二倍体肿瘤,染色体众数为44(37.7％)。发现有七条标记染色体。文中着重描述了ARS染色体的形态学特征,G带和C带分布以及核仁组织者区(NORs)的定位。     

CRISPR系统介导的小鼠细胞染色体标记

细胞基因组生物学功能的发挥依赖于其染色质空间组成方式和动态活动,而对染色体的动态变化进行研究的首要任务,就是通过一种简单而有效的方法实现基因组中特定序列的标记。近年来,随着CRISPR技术的发展,应用其对特定基因进行标记将成为研究染色体动态变化的有力手段。该研究中,对CRISPR系统的sgRNA支架序列进行F+E修饰,增强了dCas9蛋白复合体对DNA的结合能力,获得支架序列增强型CRISPR(enhance sgRNA scaffold-CRISPR,Esgs-CRISPR)系统。接着,进一步将Esgs-CRISPR标记系统与PB转座系统以及Tet-on系统相结合,构建了适用于稳定标记细胞的质粒系统,即PB-Tet-on-Esgs-CRISPR(PTE-CRISPR)系统。在PTE-CRISPR质粒中插入特定的sgRNA序列,通过脂质体转染成功标记了小鼠神经瘤母细胞(mouse neuroblastoma cell line-2A,N2A)的端粒和卫星序列。通过与表达转座酶(PB transposase,PBase)的质粒共转染小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC),该研究成功标记了mESC的端粒及卫星序列,并通过流式细胞术筛选获得了标记端粒和卫星序列的稳转细胞系。该研究实现了CRISPR系统介导的mESC染色体特定基因序列的标记,为进一步研究活细胞内染色体结构和动态变化提供了基础。     

腹腔饲养细胞制备方法的改进

腹腔饲养细胞制备方法的改进蒋春雷（第二军医大学神经生物学教研室,上海２００４３３）在组织细胞培养中,存在细胞浓度依赖性,单个或少数分散的细胞不易生长繁殖。在利用淋巴细胞杂交瘤技术合成单克隆抗体的细胞融合、克隆化等过程中,均直添加饲养细胞。小鼠腹腔细胞...     

绒毛滋养层细胞直接制备染色体方法

本方法对绒毛滋养层细胞直接制备染色体作了改进。分别将制片手法,低渗液配制,秋水仙素浓度与固定时间等方面给以改良。后三者不同于Simoni及国内报道,作者认为低渗液成分,秋水仙素浓度与固定时间是不可分割与相互影响的。此法所得分裂相中,染色体形态及分散良好和显带清晰,方法稳定,有利于孕早期诊断的染色体结构分析。     

哺乳动物早期胚胎细胞染色体的制备

实验动物外周血及骨髓细胞染色体的制片 技术,已作为一种检测手段,广泛地应用于ik 遗传、动物分类学以及医学的研究中。为了探 索理化因素对动物和人体的影响以及人类群体 中染色体的多态现象,也必须分析染色体。近 年来,在实验动物领域内,科研工作者围绕着单 性生殖、细胞融合、非整倍体和多倍体的诱发, 以及早期胚胎发育过程中DNA 的晚复制等方 面,开展了大量的工作,并已取得了一定的进 展。当前,迫切需要一种简便可靠的检查动物 胚胎早期发育阶段的核型的技术。     

小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策

动物骨髓细胞具有数量多且分裂旺盛的特点 ,可以直接利用其进行染色体标本的制备 ,这种方法具有方便快捷、不需体外培养和无菌操作 ,并且可以真实地反映完整机体所受环境影响的优点 ,常用于环境中致畸、致突变因素的检测和小型动物染色体的研究 ,在临床上也常用于白血病、多发性骨髓瘤等恶性血液病的研究。小鼠骨髓细胞染色体制备实验也是遗传学及细胞生物学的重点实验之一。1　问题的提出一个优良的动物骨髓细胞染色体制片应该是 :全部染色体较集中 ,其中各染色体分散均匀且互不重叠 ,染色体长度适中 ,能清晰地显示出着丝点位置 ,染色体呈…     

小鼠单卵裂球体外培养及染色体制备

为了探索研究了植入前胚胎染色体病（包括平衡易位）诊断的可行性方法,作者进行了单卵裂球体外培养、染色体制备及显带技术研究,在Ｂ２培养基加血清进行培养的基础上,比较了在两种没处理因素进行体外培养时小鼠单卵裂球增殖情况,Ｂ２培养基加血清再加输卵管包埋进行培养,其单卵裂球体外增殖率为５０％（８７／１７４）,单卵裂球染色体制备成功率为２７．６％;Ｂ２培养基加腹水过滤液进行培养,其单卵裂球体外增殖率为３３％（     

利用转基因小鼠及转染色体小鼠产生人抗体的研究进展

自单克隆抗体（mAb)技术问世以来,解决了生命科学的许多重要问题,但其鼠源生导致的HAMA反应在大大限制了它在人体治疗中的应用,因此,制备人抗体成了亟待解决的难题,转入Ig基因组小鼠与转梁色体小鼠 的构建成功为解决这一难题提供了可行途径,本文就这两条小鼠的构建及其在制备人抗体中的应用进展作一综述。     

小鼠肿瘤细胞染色体核仁组织者的细胞化学观察

本文报道用Ag-AS染色技术对几种小鼠肿瘤细胞(Ehrlich腹水瘤,肉瘤180,淋巴瘤1号)核仁组织者(NORs)的观察结果,发现肿瘤细胞的NORs即18 S+28 S rDNA或核糖体基因的位置和大小与正常细胞的不同。正常小鼠细胞有3—6条染色体带有银染色的核仁组织者(Ag-NORs),分布位置都紧靠在着丝点下方;而三种小鼠肿瘤细胞都有一个中等大小的近端着丝点染色体,其Ag-NOR的位置移至长臂的中部。小鼠淋巴瘤1号     

利用新生子叶制备牡丹染色体的研究

首次报道了利用牡丹(P．suffruticosa)种子的新生子叶制备染色体,同时比较了根尖染色体的核型,结果表明:牡丹子叶和根尖染色体核型数据一致,2种方法获得的染色体数均为2n=10,核型公式为2n=2x=10=6m 2sm 2st,全套染色体未见随体;2种方法获得的染色体形态结构基本相同。相对根尖而言,牡丹种子的新生子叶面积大,容易获得更多的试材,说明利用新生子叶制备染色体更适合遗传学实验研究。     

利用染色体区段混合BAC探针鉴定食管癌细胞中的染色体畸变

染色体畸变是恶性肿瘤细胞的重要遗传学特征, 文章旨在应用BAC DNA克隆鉴定食管癌细胞中的染色体臂和染色体区段的畸变。针对染色体各区段选取5~10个1 Mb BAC DNA, 分别混合制备成特定染色体区段的BAC DNA混合克隆, 然后将染色体臂上覆盖所有区段的上述混合克隆进一步混合制备成特定染色体臂BAC DNA混合克隆。利用简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(Degenerate oligonucleotide primed PCR, DOP-PCR)标记染色体臂探针, 利用切口平移法(Nick translation)标记染色体区段探针, 并对食管癌细胞中期染色体进行荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)分析。正常人外周血淋巴细胞中期染色体FISH结果显示, 上述方法标记的探针具有较高的特异性。进一步利用染色体臂混合探针, 确定了多个食管癌细胞中的染色体重排所涉及的特定染色体臂; 利用染色体区段混合探针, 鉴定出KYSE140的t(1q;7q)衍生染色体中1q上的断点范围位于1q32-q41。文章成功建立了1 Mb BAC DNA混合克隆探针标记技术, 并鉴定出多个食管癌细胞中的染色体臂和染色体区段畸变, 不仅为利用M-FISH技术鉴定肿瘤细胞中的染色体畸变提供了更为准确的方法, 而且还可能进一步将该法推广应用于恶性血液病的核型分析以及产前诊断。     

介绍一种显示小型寄生线虫染色体的方法——利用马来丝虫虫卵制备染色体

在利用马来丝虫生殖腺制备染色体的同时,以该雌虫子宫内虫卵为材料,对Imai法加以改动,用来探索制备丝虫染色体的方法,获得较满意的效果。操作步骤如下: 1、将马来丝虫雌虫置于培养液RPMI1640 20％小牛血清(含4μg/ml秋水仙硷)中     

用整体解离法制备两栖类蝌蚪细胞染色体

长期以来,两栖类蝌蚪细胞染色体标本的制备一直沿用压片法,该法可靠性较差。作者根据蝌蚪期细胞分裂旺盛的特点,用整体蝌蚪为材料,在秋水仙素处理的同时,利用两栖类分离液解离并辅以匀浆器离散组织,使得一次操作能获得大量分散适度的中期分裂相染色体。整体解离法简便可靠,能制得质量较好的染色体玻片标本。