三七总皂苷生物合成与关键酶调控的研究进展

三七总皂苷(PNS)属于达玛烷型三萜皂苷,是中国传统珍贵药材三七的主要活性成分,三七总皂苷在中枢神经系统、心脑血管系统、血液系统、免疫系统以及抗纤维化、抗衰老、抗肿瘤等方面均具有较好的生理活性.三七总皂苷是以达玛烯二醇为前体,在P450单加氧酶和糖基转移酶催化下形成.另外,三七总皂苷与植物甾醇共享前期代谢途径.该文对近年来国内外有关三七总皂苷的生物合成途径及关键酶基因的最新研究进展进行综述,并探讨了代谢工程在三七总皂苷生物合成中的应用前景.     

三七总皂苷抗肝纤维化作用机制的研究进展

肝纤维化是各种慢性肝病共同的病理基础,是慢性肝病发展到肝硬化、肝癌的必经途径。寻找有效的抗肝纤维化药物是近年研究的热点,其中对三七的研究也取得了很大进展。现综述近几年三七皂苷在保护肝细胞、抑制肝星形细胞活化、促进肝星形细胞凋亡、抑制细胞外基质的合成及促使其降解等方面的作用及可能机制,同时也阐述了三七总皂苷在抗肝纤维化中的重要意义及应用前景。     

复合酶解法提取三七皂苷的实验研究

以三七提取液中总皂苷的含量和提取物得率为指标,考察了乙醇回流法、渗漉法、纤维素酶解法、果胶酶解法、复合酶解法的优劣,并采用单因素法和四因素（纤维素酶用量、果胶酶用量、酶解温度、乙醇浓度）三水平正交设计法对复合酶解法提取工艺条件进行优选,得到如下较理想的提取工艺条件：纤维素酶用量为15U／g（生药）、果胶酶用量为140U／g（生药）,酶解pH值为4．5,酶解温度为50℃,乙醇浓度为80％,提取时间为2．5h。所得三七提取液中总皂苷的含量为12．01％,提取物得率为35．82％。     

三七总皂苷的药用生物学活性研究进展

三七总皂苷是中药三七的主要有效成分,对中枢神经系统、心血管系统、血液系统等具有抗炎、抗纤维化、抗衰老、抗肿瘤等方面的生物学活性,是现代中药、药理等领域的研究热点.近年来随着研究的不断深入,三七总皂苷的生物学活性被进一步发现,其用途也越来越广.本文就三七总皂苷在生物学方面的研究情况和用途进行综述,并对其前景予以讨论.     

三七总皂苷原粉和超微粉的理化性质比较研究

通过对药用植物三七总皂苷原粉和超微粉的粉体粒度、电位、显微结构、红外光谱、溶解速度这几项理化性质的研究,判定两种粉体的优劣,为三七总皂苷超微粉的市场推广提供依据。实验结果表明,三七总皂苷原粉经纳米化处理后成为三七总皂苷超微粉,其化学结构没有发生变化,但显微结构从条状的晶体变为由纳米球紧密排列的不规则形态,其粉体平均粒径也从1 122.4 nm缩小到153.4 nm,完成了从微米到纳米的转变,其水溶液也变为稳定的胶体溶液。运用高效液相色谱法,在模拟人体环境的条件下,发现三七总皂苷超微粉比三七总皂苷原粉早1 min完全溶解。说明三七总皂苷超微粉比三七总皂苷原粉颗粒更小,更易溶于水,更易与人体吸收。     

发酵辅助提取对三七总皂苷提取物生物活性的影响

以DPPH自由基清除法、FRAP及Fe3+还原力法测定抗氧化能力,抑菌圈及最低抑菌浓度评价抑菌活性,对比发酵法与常规提取法所得三七总皂苷提取物活性差异,探讨微生物发酵提取三七总皂苷及其组分含量变化对生物活性的影响。结果显示,相比常规提取,发酵提取所得三七总皂苷含量提高35.36%,稀有皂苷组分Rh1、F1、Rg3含量增多,活性测试显示其DPPH清除的IC50由1.226降至0.377 mg/mL,对Fe3+还原力提高,对金黄色葡萄球菌、青霉菌等的抑制活性增强。结果说明发酵辅助提取能提高三七总皂苷的有效溶出,实现成分间转化,同时还能提高提取物生物学活性,具有重要的实际应用价值。     

三七总皂苷对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的作用

目的：探讨三七总皂苷对大鼠脊髓损伤（SCI）后运动功能恢复的作用。方法：正常SD大鼠随机分为5组（n=8）：正常对照组（Normal）、假手术组（Sham）、脊髓损伤（SCI）和脊髓损伤+三七总皂苷组（PNS）（n=8）。所有大鼠分别在造模前及造模后第1、3、7、14、21和28天接受运动功能评分（BBB）和运动诱发电位（MEP）检查,观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果：造模后,Sham组、PNS组、SCI组BBB评分低于正常;MEP波幅低于正常;潜伏期较正常延长。PNS组与同期SCI组比较,第7、14、21、28天的BBB评分差异有统计学意义（P<0.05）;第7天、14天、21天、28天,MEP检查波幅（Amp）和潜伏期（Lat）组内有显著差异,并且与同期SCI组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：三七总皂苷可促进大鼠SCI后运动功能的恢复。     

三七总皂苷对家兔离体小肠平滑肌自发收缩活动的影响

目的：观察三七总皂苷对家兔离体小肠平滑肌收缩活动的影响,并探讨其作用机制。方法：取健康家兔,雌雄不拘,将小肠离体后恒温灌流,观察三七总皂苷对家兔小肠自发收缩活动的影响;在灌流液中分别加入BayK8644、左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）后再加入三七总皂苷,研究其作用机制;在无钙台式液中加入rynodine后再加入三七总皂苷,研究其作用机制。结果：三七总皂苷剂量依赖性的抑制家兔离体小肠平滑肌收缩的幅度。BayK8644和L-NAME均可完全阻断三七总皂苷对家兔小肠平滑肌收缩活动的抑制作用。在无钙台式液中,三七总皂苷显著抑制rynodine引起的细胞内钙收缩活动。结论：三七总皂苷显著抑制家兔小肠平滑肌的收缩活动,其抑制收缩活动机制可能是：增加小肠平滑肌NO浓度,从而抑制细胞外钙内流和内钙释放。     

三七总皂苷对斑马鱼胚胎初级和次级造血的抑制作用

目的探讨三七总皂苷(Panax notoginsenosides,PNSs)对斑马鱼胚胎造血的作用,为三七的药理学应用提供实验依据。方法通过乙醇提取得到PNSs,用50、100μg/mL的PNSs从75%外包时期开始处理斑马鱼胚胎。收集发育至不同时期的胚胎,检测药物处理后,斑马鱼初级造血和次级造血的分子标记的变化。结果 PNSs处理后,初级造血的分子标记gata1、hbbe3明显下降,生成的红细胞显著减少;PNSs处理还可以抑制造血干细胞(hematopoietic stem cell, HSC)发育。次级造血的分子标记runx1,cmyb在PNSs处理下表达下调,由HSC分化生成的T淋巴细胞分子标记rag1表达也显著降低。有意思的是,PNSs对斑马鱼初级和次级造血的抑制作用均呈剂量依赖效应。结论孕期可能需要慎重使用三七总皂苷药物。     

三七总皂苷及单体组合对ox-LDL诱导内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:研究三七总皂苷及其单体组合对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)粘附分子ICAM-1表达的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,加入100mg·L-lox-LDL刺激HUVECs,诱导单核-内皮细胞黏附,加入不同浓度的PNS及单体组合进行干预,蛋白染料法测定黏附值,RT-PCR检测HUVECs粘附分子ICAM-ImRNA的表达,Western-blotting检测HUVECs粘附分子ICAM-1蛋白的表达.结果:PNS各剂量组及单体组合组可有效降低单核-内皮细胞的黏附;ox-LDL可显著增加HUVECs的ICAM-1 mRNA及蛋白表达(P＜0.05);PNS各剂量组及单体组合组与ox-LDL组相比,均能显著降低ICAM-1的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).结论:抑制ox-LDL诱导的内皮细胞ICAM-1mRNA及蛋白的表达,可能为PNS抗动脉粥样硬化作用机制之一.     

三七总皂甙对人急性髓系白血病细胞株U937 的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的:观察三七总皂甙(panax notoginsenosides,PNS)对人急性髓系白血病细胞株U937凋亡的影响,并探讨PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:将处于对数生长期的U937细胞分为5组:正常对照组及PNS组(5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40mg/L),药物作用12 h、24 h、48 h后,CCK-8比色法检测PNS对肿瘤细胞的相对细胞活力的影响;流式细胞术检测PNS促进细胞凋亡的能力;RT-PCR和Western blot法分别检测不同浓度的PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:CCK-8分析显示,PNS在低浓度(≤40 mg/L)能明显抑制肿瘤细胞的活力,40 mg/L处理组较正常对照组细胞活力在3个时间点分别下降47%、72%、85%;与对照组相比,处理组的凋亡率显著增加,10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L实验组凋亡率分别上升7%、10%、43%;PNS能明显增加细胞内Bax mRNA及蛋白的表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结论:PNS具有抑制人急性髓系白血病细胞株U937的增殖抑制及凋亡诱导作用,并能影响Bax和Bcl-2蛋白的表达。文章探讨了PNS抑制肿瘤发展可能存在的作用机制,为将来进一步研发PNS作为白血病治疗药物奠定基础。     

白藜芦醇分子印迹聚合物微球的制备及特性评价(英文)

以聚苯乙烯微球为种球,白藜芦醇为模板分子,采用单步溶胀聚合法在N,N-二甲基甲酰胺体系中制备了单分散分子印迹聚合物微球。用扫描电镜对微球的结构和形貌进行了表征,并研究了微球的制备条件和吸附特性。微球的凹陷可有效地增加微球的比表面积和结合位点,从而提高了模板分子的结合速率及微球的印迹容量。     

干姜挥发油纳米乳的制备与表征

为提高干姜挥发油的水溶性及在制剂过程中的稳定性,尝试将干姜挥发油制备成纳米乳载药形式,并对其进行表征。本文将提取的干姜挥发油进行成分分析并测定HLB值,通过处方筛选确定乳剂配比,并对所得干姜挥发油纳米乳的类型、粒径分布、表面电位及稳定性进行表征。经实验测得干姜中含挥发油2.1%,为淡黄色或黄色液体,HLB值为8,以吐温-80和司盘-80为表面活性剂,乳剂的最佳体积配比为油∶乳化剂∶水=6∶1∶13,激光粒度仪测得平均粒径为41.4 nm,表面电位为-10.31±1.51 mv,离心稳定常数为21.83%。此方法所得干姜挥发油纳米乳稳定性好,在水中分散性能好、稳定,可有效减少挥发油的损失。     

滑菇多糖wPNP-a1的制备及结构分析

利用传统热水浸提法提取滑菇粗多糖(wPNP),进而用季铵盐沉淀法和Sephadex G-150凝胶色谱柱层析对wPNP进行纯化,得滑菇多糖wPNP-a1.以高效液相色谱(HPLC)、傅里叶变换红外光谱(FIR)、气相色谱(GC)、核磁共振(NMR)、环境扫描电子显微镜(ESEM)和原子力显微镜(AMF)等方法分析wPNP-a1的结构,结果表明,滑菇多糖wPNP-a1的分子量为419310 Da,具有一般类多糖的特征吸收峰,糖苷键为β-型,不含乙酰基,由木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比为3.91∶2.77∶1.91∶1;wPNP-a1的分子间排斥力较大,分子间吸引力较小,在云母表面呈直链状分布,链宽23 nm左右,链高0.7～0.8 nm.     

羟基喜树碱纳米颗粒超声反溶剂法制备工艺及表征

为提高羟基喜树碱的水溶性及其制剂在体内稳定性,运用超声反溶剂法对羟基喜树碱进行初级颗粒制备。本文根据羟基喜树碱在不同有机溶剂中的溶解度与其在去离子水中的溶解度的不同进行对比,对各项指标进行检测。筛选出制备羟基喜树碱初级颗粒的最佳条件为:HCPT-DMSO浓度为5 mg·mL-1、H2O∶DMSO=1∶1、H2O滴速为4 mL·min-1,超声时间为10 min。对羟基喜树碱初级纳米颗粒进行检测,SEM扫描结果显示其形貌规则,粒径为746 nm,与羟基喜树碱原粉颗粒相比,粒径明显减小并在其水溶液中分布更为均匀。     

Production and Characterization of Wine from Mango Fruit (Mangifera indica L)

Summary Mango (Mangifera indica L) is the most popular and the choicest fruit of India. A major portion (nearly 60–70%) of the total quantity produced is locally consumed and a sizable portion is exported to other countries. In the present study, six varieties of mango, which are abundantly available in the region were selected for wine production and the conditions for juice extraction were optimized. It was found that the mango juices were similar to grape juice in terms of sugar and acidity. After fermentation, the ethanol concentration was 7–8.5% w/v, the methanol concentration was slightly higher than that of grape wines and other volatile compounds were present in comparable amounts. From the physicochemical characteristics of the mango wine produced, it was observed that aromatic components were comparable in concentration to those of grape wine.     

一种新型单链抗体血栓导向显像剂的制备和部分性质研究

 利用对血栓部位活化血小板α 颗粒膜蛋白GMP 140有亲和特异性的单克隆抗体SZ5 1的血栓部位导向作用 ,并利用金属硫蛋白的高金属结合能力 ,在基因工程水平构建分子量适中的单链抗体血栓导向显像剂 .1分子单抗SZ5 1单链抗体 (ScFv SZ5 1)与 1分子小鼠金属硫蛋白 (MT Ⅰ )cDNA的重组基因拼接产物 ,在大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)pLysS中进行发酵表达 ,重组蛋白HLMT表达量为 4 0mg L发酵液 .该重组蛋白以包涵体形式存在于菌体中 .通过一种有效的包涵体制备方法可获得目的蛋白含量为 84 %的包涵体沉淀 .在优化的条件进行了包涵体的变复性 ,复性液先后经过Q SepharoseFF阴离子交换层析和SephadexG 5 0凝胶过滤层析进行纯化 .SDS PAGE鉴定了重组蛋白纯度达 95 %以上 .HPLC进一步证明了最终纯化产品的均一性 .质谱测定HLMT分子量为 384 31 3,与理论值基本相符 .等电聚焦电泳测定pI为 3 0 .Western印迹结果表明 ,HLMT中单链抗体部分具有与活化血小板α 颗粒膜蛋白GMP 140结合特异性 .原子吸收分光光度计法 (AAS)证明 ,HLMT中金属硫蛋白保持了原金属结合活性 .重组蛋白HLMT可以进一步进行核素标记实验和动物体内血栓显像实验     

大鼠脑红蛋白(NGB)可溶性原核表达和单克隆抗体制备及鉴定

脑红蛋白 (NGB)是新发现的脑特异的携氧蛋白 .为了对其功能进行深入的研究 ,应用已构建大鼠NGB基因编码区原核表达载体pGEX 4T 2 NGB转化的大肠杆菌BL2 1 ,获得可溶性表达产物 .用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化后作为抗原 ,免疫Balb c小鼠 .通过传统的细胞融合方法制备了抗大鼠NGB的单克隆抗体 ,并对全部 4株单抗进行了亚类和亚型、效价和特异性鉴定 .为NGB结构与功能的深入研究提供了重要工具     

灵芝孢子油微胶囊制备技术

灵芝孢子油是从灵芝孢子粉中提取的具有一定药理活性的脂质成分。为提高灵芝孢子油稳定性,以大豆分离蛋白和麦芽糊精为壁材,采用喷雾干燥法和冷冻干燥法制备灵芝孢子油微胶囊。通过试验优化了制备工艺条件并比较了两者干燥方式制备微胶囊的理化性质。结果表明：最佳工艺为大豆分离蛋白和麦芽糊精质量比1:1、固形物含量20%、均质压力30MPa、壁材芯材质量比4:1。两种干燥方式微胶囊流动性、溶解性均较好,差异不显著。但两种微胶囊形态差异较大,喷雾干燥微胶囊整体呈球状、表面紧密无裂缝有凹陷,包埋率为90.84%;冷冻干燥微胶囊结构疏松呈片状,表面多孔。因此喷雾干燥法更适合包埋灵芝孢子油。