获能期间精子蛋白的酪氨酸磷酸化

哺乳动物精了获能是精子与卵子成功受精的前提。蛋白酪氨酸磷酸化对精子获能十分重要。精了获能期蛋白酪氨酸磷酸化程度增高与sAC/cAMP/PKA途径、受体酪氨酸激酶途径和非受体蛋白酪氨酸激酶途径调节有关。获能过程中酪氨酸磷酸化蛋白分布于精子细胞的不同区域,蛋白的酪氨酸磷酸化与精子功能密切相关。     

转化淋巴细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性及细胞内源性底物的研究

本文对增殖期的淋巴细胞胰岛素依赖性酪氨酸蛋白激酶活性及内源性废物进行了分析研究。在纯化的健康人淋巴细胞中加入适量的植物血凝素(PHA),经过72h培养即成为转化淋巴细胞(增殖期淋巴细胞)。应用~(32)P参入实验,证实转化淋巴细胞胰岛素受体具有胰岛素依赖性的酪氨酸蛋白激酶活性,与未转化的对照组相比其活性增加约9倍。Scatchard分析表明转化后淋巴细胞膜表面胰岛素受体数增加3.5倍。应用抗酪氨酸磷酸酯抗体,对胰岛素作用前后的转化与未转化淋巴细胞内,酪氨酸残基磷酸化的蛋白进行了鉴定,结果表明:除了95kD受体β亚基自身磷酸化外,45kD蛋白质也明显磷酸化,我们命名它为PP45。我们认为PP45可能是淋巴细胞中胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶的主要内源性废物,它的磷酸化是胰岛素信息传递过程级联反应的初始步骤。     

G蛋白偶联受体失敏的分子机制

G蛋白偶联受体（GPCRs)受到激动剂持续刺激对易发生失敏。受体内化是GPCRs失敏重要分子机制。GPCRs在G蛋白产受体激酶（GRKs)、第二信使调节激酶等作用下发生磷酸化,磷酸化的GPCRs与抑制蛋白（arrestins)结合后导致受体与G蛋白失偶联,并通过胞吞由细胞膜表面向膜内转移,从而因GPCRs的内化而表现为失敏。     

蛋白激酶C在血小反聚集中的作用

利用＾３２Ｐ－ＮａＨ２ＰＯ４标记猪血小板,以蛋白激酶Ｃ的４０ｋＤ底物为蛋白激活的标志。用血小板激动剂在聚集浓度范围内处理血小板,结果表明,除了不能使猪血小板聚集的肾上腺素外,凝血酶等激动剂都使血小板４０ｋＤ底物蛋白磷酸化明显增加,同时３８ｋＤ,２６ｋＤ蛋白质磷酸化也明显增加,且４０ｋＤ底物磷酸化与血小板聚集有平行增加关系。     

蛋白激酶C在血小板聚集中的作用

利用￣（３２）Ｐ－ＮａＨ２ＰＯ４标记猪血小板,以蛋白激酶Ｃ的４０ｋＤ底物为蛋白激活的标志．用血小板激动剂在聚集浓度范围内处理血小板,结果表明,除了不能使猪血小板聚集的肾上腺素外,凝血酶等激动剂都使血小板４０ｋＤ底物蛋白磷酸化明显增加,同时３８ｋＤ,２６ｋＤ蛋白质磷酸化也明显增加,且４０ｋＤ底物磷酸化与血小板聚集有平行增加关系．蛋白激酶Ｃ在血小板聚集中可能起着重要的调节作用。     

细胞因子信号的部分负调控因子

免疫和造血细胞的生长、分化及其他功能受到细胞因子网络的控制。由于大多数细胞因子受体缺乏胞浆段的激酶结构域 ,配体依赖的酪氨酸磷酸化由非受体酪氨酸激酶来中介。细胞因子刺激后早期激活的主要酪氨酸激酶是Ｊａｎｕｓｋｉｎａｓｅ(ＪＡＫ)家族。事实上 ,ＪＡＫ ＳＴＡＴ途径是许多细胞因子激活基因转录最重要机制之一。当细胞因子结合到细胞表面的受体 ,引起受体的二聚化 ,进而活化ＪＡＫ激酶 ,活化的ＪＡＫ激酶反过来磷酸化细胞因子受体 ,导致其他的信号分子如ＳＴＡＴ家族蛋白的介入并被激活 ,活化的ＳＴＡＴ转入细胞核 ,激活大量细…     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein对PMA处理后A类清道夫受体表达的抑制

为研究清道夫受体与细胞内酷不氨酸蛋白激酶的关系,用酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein处理人U937细胞。分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化低密度脂蛋白[^125I]ox-LDL的结合、降解以及细胞内脂质蓄积的程度;并利用放射自显影的方法观察药物对细胞表面受体数目的影响,利用RT－PCR法进一步探讨药物作用的分子机制。结果发现genistein可以抑制细胞表达结合[^125I]ox-LDL,抑制细胞表面受全的表达以及细胞内降解[^125I]ox-LDL,抑制细胞内胆固醇脂的蓄积,并且抑制SR－A mRNA的转录,提示清道夫受体的活性可能与细胞内蛋白质酪氨酸磷酸化水平密切相关,genistein所引起的酪氨酸磷酸化水平下降可影响SR－A基因转录和翻译。     

CTGF与FGF在促成纤维细胞增殖过程中的基因反应差异

结缔组织生长因子(CTGF)是某些内皮细胞即刻早期基因反应产物,其与FGF具有类似的促进成纤维细胞(KMB-17)增殖的功能;在此促增殖过程中CTGF和FGF所诱导的基因反应有所差异,CTGF诱导细胞表达c-myc,而FGF促进c-fos表达增加;此外两种因子均诱导与酪氨酸磷酸化过程密切相关的src基因表达,免疫沉淀证实CTGF结合细胞表面受体后可诱导细胞内相应蛋白的酪氨酸磷酸化.     

Jak—STAT信号转导机制

许多细胞因子受体尽管缺少激酶结构域,但与配体结合后仍能诱导蛋白质的酪氨酸磷酸化。近年来的研究证明这一过程是由Ｊａｋ族蛋白质酪氨酸激酶的成员所介导的。Ｊａｋ激酶通过和受体的近膜区域的相互作用而与之缔合。配体结合引起受体聚合以及Ｊａｋ的酪氨酸磷酸化和激活,激活的Ｊａｋ又使受体和ＳＴＡＴ蛋白（信号转导物与转录激活剂）磷酸化、后直接参与基因转录的调控。本对这一新的胞内信号转导机制作一综述。     

酪氨酸磷酸化蛋白在体外获能豚鼠精子上的分布与表达

为研究豚鼠精子获能过程中蛋白酪氨酸磷酸化的变化规律,将豚鼠精子悬浮于改良的TALP获能培养基中,在5% CO2 孵箱37 ℃培养,以精子与金霉素(CTC) 荧光结合类型为指标评价精子获能状态,用免疫荧光技术和Western blot方法检测酪氨酸磷酸化的蛋白在精子上的分布以及酪氨酸磷酸化水平的变化。结果显示,随着获能的进行,发生蛋白酪氨酸磷酸化的精子占总精子的百分比增加,由未获能前的36％增至获能7h时的92％。酪氨酸磷酸化的蛋白分布变广,由精子头部扩增至精子头部、鞭毛主段和中段。另外,有80,45,40kDa的三种蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中40kDa的蛋白酪氨酸磷酸化水平自精子体外培养后呈递增趋势,45kDa的蛋白酪氨酸磷酸化自培养3h后发现并呈递增趋势,而80kDa的蛋白酪氨酸磷酸化水平在精子培养3h时最高,后呈递减趋势。     

神经元突触内的非受体型酪氨酸激酶底物（英文）

非受体型酪氨酸激酶(non-receptor tyrosine kinase,nRTK)是一个较大的激酶家族,其功能是催化蛋白的酪氨酸磷酸化。nRTK家族中的几种常见亚型,比如Src和Fyn,可以在神经系统内表达。近年来的研究表明,神经元的突触部位含有多个nRTK的底物蛋白,这些底物蛋白主要包括谷氨酸受体(离子型和代谢型谷氨酸受体)、突触后构架蛋白、突触前调节蛋白和突触富含的多种蛋白激酶。在基础或刺激的状态下,nRTK可催化这些底物蛋白内特定酪氨酸的磷酸化,从而调节这些底物蛋白的多种生理、生化和生物物理功能。因为突触内的nRTK对突触变化信号非常敏感,所以突触nRTK被认为参与了突触传导活动的强度和效率等方面的调节。     

信号传导途径新热点：直接效应物模式

信号传导途径新热点：直接效应物模式跨膜信号传导途径的通常模式,是生长因子与受体作用后,使其受体的酪氨酸蛋白激酶活化。活化后的酪氨酸蛋白激酶使磷脂酶ＣＹ活化;或是酪氨酸蛋白激酶使某些蛋白质因子磷酸化,转而引起原癌基因产物ｃ－Ｒａｓ蛋白活化。蛋白激酶Ｃ与...     

角质细胞生长因子-2研究进展

角质细胞生长因子 2 (KGF 2 )也叫成纤维细胞生长因子 10 (FGF 10 ) ,是成纤维细胞生长因子家族的一员 .能特异性促进上皮细胞的增殖、分化和迁移 ,对脊椎动物多种组织和器官的发育起重要调控作用 ,对临床上多种疾病的治疗也有很好的应用前景 .1　KGF 2与受体KGF 2有两种细胞膜表面受体 :FGFR1Ⅲb和FGFR2Ⅲb .KGF 2与FGFR2Ⅲb的亲和力很高 ,而与FGFR1Ⅲb的亲和力很低 ,只有在高浓度KGF 2存在时才与FGFR1Ⅲb结合 .KGF 2与受体结合后 ,促使受体胞内的C端酪氨酸残基磷酸化 ,磷酸化的受体具有了酪氨酸蛋白激酶活性 ,并与一系…     

胰岛素受体信号传递

胰岛素受体是具有酪氨酸蛋白激酶活性的膜受体。胰岛素与靶细胞相应受体结合后,引起受体酪氨酸残基自身磷酸化及β亚基酪氨酸蛋白激酶活化,后者使靶细胞内底物如IRS1或Hhc的酪氨酸残基磷酸化,酪氨酸蛋白激酶在胰岛素受体信号传递中发挥重要作用。胰岛素信号所激发的信号传递途径主要有二：一为Ras-MAP激酶途径,一为PI3－激酶途径,胰岛素的作用与此有关。     

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序功能的研究

汉滩病毒(HTNV)的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)样基序,该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1 ITAM样基序的免疫信号转导功能,首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷酸化的G1 ITAM样基序多肽,应用体外蛋白激酶共沉淀实验,分别从Jur-kat细胞和Raji细胞裂解物中初筛到5~9种与该基序相互作用的磷酸化蛋白或激酶;然后通过突变体分析、体外磷酸化实验和体外激酶共沉淀-免疫印迹分析,进一步确证了G1 ITAM样基序在体外可以与Src家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)Lyn、Fyn及其下游Syk家族激酶Syk、ZAP-70相互作用,而这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。上述研究表明,HTNV G1蛋白胞质区包含一个高度保守的功能性ITAM样基序,该基序在体外可以与TCR和BCR信号转导中关键的PTK相互作用,为进一步探讨HTNV G1蛋白ITAM样基序在肾综合征出血热(HFRS)免疫信号传递中的作用奠定了基础。     

凋亡诱导因子与非受体酪氨酸激酶c-Abl的相互作用

目的:研究凋亡诱导因子(apoptosis-inducingfactor,AIF)与非受体酪氨酸激酶c-Abl的相互作用及其功能。方法:应用免疫共沉淀法研究蛋白质的相互作用;用抗磷酸化酪氨酸抗体研究蛋白质的体内磷酸化;与GFP质粒共转染研究蛋白在细胞内的表达量。结果:AIF与c-Abl在细胞内能形成复合物;AIF可以被c-Abl磷酸化,且c-Abl能提高AIF的表达量。结论:AIF与c-Abl具有相互作用;AIF可以被c-Abl磷酸化,且c-Abl能提高AIF的表达量。     

粘着斑激酶

粘着斑激酶（ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ,ＦＡＫ）是蛋白酪氨酸激酶,属于非受体蛋白酪氨酸激酶,分布在细胞粘着斑部位。ＦＡＫ位于神经肽,整合素和癌基因作用的聚合点,可发生酪氨酸磷酸化,它参与调节细胞发育,生长,存活,凋亡,粘附,骨架重组,转化,扩散和迁延等过程。     

KDR酪氨酸激酶的克隆表达及纯化

VEGF作为一种血管内皮细胞有丝分裂原,通过与内皮细胞表面特定受体结合,从而导致新生血管的形成,其中VEGFR-2(KDR/FIk-1)在肿瘤血管形成中起重要作用,因此其抑制剂有可能发展成为治疗肿瘤的新药.采用大肠杆菌成功表达了具有酪氨酸激酶活性的KDR酪氨酸激酶催化域(KDR-CD).采用RT-PCR从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,获得KDR-CD的编码基因,将其克隆至pET-30a载体,在E. coli BL21(DE3)中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行了纯化,Western blotting结果显示表迭的KDR-CD蛋白自身磷酸化,重组KDR-CD蛋白具有利用ATP催化底物发生磷酸化反应的激酶活性.     

磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化

以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为免疫原免疫兔获得抗血清．自抗血清中分离获得抗体．自酪胺合成磷酸酪胺,并偶联到溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上．抗体经磷酸酪胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化,所得抗体专一性强,Ｄｏｔｂｌｏｔ显示：抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白,溶菌酶,卵清蛋白起抗原抗体反应,而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶,卵清蛋白,也不识别作为免疫原的骨架成分ＢＳＡ,也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白．     

基于SH2超亲体的微量样品酪氨酸磷酸化蛋白质组学技术研究进展及应用

酪氨酸磷酸化是生物体内一种重要的蛋白质磷酸化修饰类型,参与细胞信号转导、细胞迁移、凋亡等众多的生命活动过程。在磷酸化蛋白质组学研究中,由于酪氨酸磷酸化蛋白丰度低且有时起始样品量有限,传统的磷酸化蛋白质组富集方法用于酪氨酸磷酸化肽富集效率较低。微量样品的制备技术以及SH2超亲体的引入正在改变酪氨酸磷酸化蛋白质组研究的现状,现对此进行综述。