简易的无氧柱层析方法

柱层析(离子交换,吸附和凝胶过滤)是分离纯化蛋白质,酶和其他一些生物活性物质的重要手段。国外已有各种型号的成套装置作为商品出售,但是遇到对氧敏感的样品,必须设法在整个操作过程中,保持无氧状态。几年来我们在固氮酶的研究中,逐步掌握了一些简单而行之有效,且在一般实验室条件下都能办到的无氧柱层析方法。现在扼要介绍如下,以供有关工作参考。一、应用器皿中气体的抽换首先要把实验中所用的贮液瓶及收集瓶中的空气都换成惰性气体(如氮、氩等)。根据需要可选用不同容积的抽滤瓶盛装洗脱液。抽滤瓶口的橡皮塞中插入一玻璃管,管口配以尺寸合适的盐水瓶塞,如图1所示。     

用荧光底物测定半乳糖6-硫酸酯酶的简易方法

半乳糖6-硫酸酯酶(Gal-6~S)是粘多糖贮积症ⅣA型(MPs IVA)的缺陷酶。以往,MPS IVA的酶学诊断均采用同位素标记的放射性寡糖充当底物,这种底物很不稳定,在贮存过程中需要反复的纯化才能使用,很难实行商品化;而且,成本较高,操作程序复杂费时,严重地限制了MPS IVA诊断工作的开展。基于上述种种不利因素,我们利用市销的4-甲基伞型酮半乳糖苷(4 Mu-Gal),通过硫酸化的原理合成了一种新的荧光底物:4-甲基伞型酮6-硫酸半乳糖苷     

β—1,4—半乳糖苷转移酶生物学功能的研究进展

β１,４－半乳糖苷转移酶是糖基转移酶的家族成员之一,近年来随着编码该家族成员基因的分离与克隆,进一步探求其重要生物学功能已成为国际酶学界的研究热点,目前的研究结果表明该酶具有与受精过程,神经元细胞迁移,癌细胞转移,表皮细胞增殖及自体免疫性疾病等相关的重要生物学功能。     

快速简易凝胶板干燥方法

琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳广泛应用于生物化学及免疫化学等研究方面。人们希望能将电泳凝胶板制成干片,以便进行放射自显影或使电泳结果可以长期保存。国内外已有凝胶真空干燥器生产,可以使凝胶板在加热和真空情况下迅速干燥。但价格昂贵,而且每次只能干燥1—2片,不能适应大量干燥凝胶板的需要。虽然Ginlian和王育东在室温下用简易方法干燥凝胶板,但凝胶板需先用甘油预处理     

凝胶柱层析分离虎杖中白藜芦醇的研究

本论文初步探讨了虎杖中白藜芦醇分离纯化的工艺条件,比较了不同溶剂、不同浓度、不同流速洗脱条件下白藜芦醇样品在LH-20凝胶层析柱上的分离效果,以及虎杖的乙醇提取液通过氯仿、乙酸乙酯萃取,凝胶柱层析分离后的成分变化,实验表明,当以甲醇为洗脱液,浓度为60%,流速为0.5 mL/min时,白藜芦醇样品的分离效果最好.采用中压液相色谱检测收集到的白藜芦醇纯度(以白藜芦醇峰面积占总峰面积计算)可达80.34%,回收率达86.16%.     

垂直平板凝胶真空干燥的简易方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳已被广泛应用于生物化学的各个领域。因垂直平板凝胶电泳和圆盘凝胶电泳相比,具有实验误差小、效率高、操作方便等优点,近年来发展较快。对于平板凝胶图谱,一般保存在7%的乙酸溶     

一种简易的聚丙烯酰胺凝胶脱色方法

PAGE是蛋白质分析、比较和特性鉴定的有效方法,常规SDS-PAGE分析蛋白过程中考马斯亮蓝色素脱除过程耗时低效。改变脱色液配方,使用20%的乙醇和10％冰醋酸作为脱色剂,在脱色液中放置3-5片纸巾吸附色素,并在脱色过程中换纸1-2次,可缩短脱色时间3-4h,减少脱色液用量2-3倍。     

一种α－半乳糖苷酶的凝胶电泳活性染色方法

介绍一种快速、简便鉴定α－半乳糖苷酶凝胶电泳带的坚固蓝Ｂ活性染色方法。采用此方法,可直接将粗酶制品上样进行凝胶电泳。电泳完成后,只需将凝胶放在反应液中浸泡５ｍｉｎ,然后再在ｐＨ为７．８,温度为４℃的条件下染色１ｍｉｎ,即可将凝胶中的酶分子定位带显示出来。这种坚固蓝Ｂ的活性染色方法与考马斯亮蓝染色相比,节省了大量时间。     

一种α—半乳糖苷酶的凝胶电泳活性染色方法

介绍一种快速、简便鉴定α－半乳糖苷酶凝胶电泳带的坚固蓝Ｂ活性染色方法。采用此方法可直接将粗酶制品上样进行凝胶电泳。电泳完成人需将凝胶放在反应液中浸泡５ｍｉｎ,然后再在ｐＨ为７．８,温度为４℃的条件下染色１ｍｉｎ,即可将凝胶中的酶分子定位带显示出来。这种坚固蓝Ｂ的活性染色方法与孝马斯亮蓝染色相比,节省了大量时间。     

一种快速检测β－半乳糖苷酶活性的试纸方法

建立了一种检测β-半乳糖苷酶活性的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷(X-gal)试纸方法,其原理在于酶色原底物X-gal在β-半乳糖苷酶作用下产生蓝色5-溴-4-氯-吲哚.此方法X-gal用量少、操作简便、省时.适用于基因克隆的检定.     

一种快速检测β－半乳糖苷酶活性的试纸方法

建立了一种检测β－半乳糖酶活性的５－溴－４－氯－３－吲哚－β－半乳糖苷（Ｘ－ｇａｌ）试纸方法。其原理在于酶色原底物Ｘｇａｌ在β半乳糖苷酶作用下产生蓝色５－溴－４－氯－吲哚。此方法Ｘ－ｇａｌ用量少、操作简便、省时,适用于基因克隆的检定。     

UDP-GalNAc:多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14

UDP-GalNAc:多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(简称GalNAc-T)是黏蛋白O-糖基化的起始酶,N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14(GalNAc-T14)是该家族中最新发现的成员。近年来有人指出,O-糖基化可能与肿瘤的发生发展具有密切关系,因此对N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族的研究也受到越来越多重视。本文主要综述了GalNAc-T14的命名、结构、分布、功能以及潜在的应用价值。     

乙酰氨基半乳糖转移酶14多抗的制备及鉴定

利用生物信息学方法分析乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14)蛋白序列, 根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择一段多肽序列作为抗原用于抗体制备。将该DNA片段插入pET-DsbA,构建原核表达载体pET-DsbA-GALNT14。用IPTG诱导表达蛋白,经镍柱纯化蛋白后免疫新西兰大白兔,获得GALNT14多克隆抗血清。用免疫扩散和免疫印迹检测抗体效价及特异性。结果显示,成功表达并纯化了目的蛋白。免疫动物后获得了效价较高、特异性强的GALNT14多克隆抗体,GALNT14蛋白在人乳腺癌和肾癌细胞株中均有表达。该结果为进一步研究GALNT14的功能及其在肿瘤发生发展的作用方面奠定了基础。     

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶的结构和特性

多肽: N-乙酰氨基半乳糖转移酶是催化O-聚糖合成的关键酶.它是一个大家族,拥有悠久的进化历史.随着研究的进展,它的结构和功能也越来越明确,催化特性也有了进一步了解.同时,它还有可能和帕金森病的发病机制有关.     

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶的结构和特性

多肽∶N 乙酰氨基半乳糖转移酶是催化O 聚糖合成的关键酶。它是一个大家族 ,拥有悠久的进化历史。随着研究的进展 ,它的结构和功能也越来越明确 ,催化特性也有了进一步了解。同时 ,它还有可能和帕金森病的发病机制有关。     

种子中的棉子糖半乳糖苷系列寡糖研究进展

棉子糖半乳糖苷系列寡糖广泛分布在许多种植物种子中,并存在于干燥后仍能保持活力的组织内,如禾谷类种子的胚及糊粉层,豆类及其他双子叶植物的子叶和胚轴组织等。棉子糖半乳糖苷系列寡糖在禾谷类种子的非自溶性中央胚乳中不合成,但存在于蓖麻种子的自溶性胚乳细胞中。棉子糖半乳革系列寡糖在种子发育后期累积,并持续到种子大量成熟直到脱水阶段。棉子糖半乳糖苷系列寡糖主要包括棉子糖、水苏糖和毛蕊花糖,是种子中最广泛的低分子量α－半乳糖苷。许多植物正常性种子的发育伴随着棉子糖半乳糖苷系列寡糖的累积,这些糖的累积已被认为在种子脱水耐性获得、种子活力、糖的运输及植物的抗冷驯化等过程中起重要作用。本文从种子的脱水耐性获得、植物的冷驯化、细胞内定位及生物合成等方面综述了棉子糖半乳糖苷系列寡糖的研究进展。