中国科学家完成SARS病毒基因克隆和主要蛋白的表达

中国科学家已成功克隆SARS病毒的 6个主要蛋白基因 ,完成SARS病毒中 3个主要蛋白的表达。这是继SARS病毒分离成功和病毒全基因组测序成功之后 ,科学家对SARS病毒研究取得的又一重要阶段性成果。中国科学院上海生命科学研究院院长裴钢 5月 16日宣布 :经过联合攻关 ,研究人员成功     

SARS 冠状病毒非结构蛋白质NSP3突变体构建及其对类泛素分子DUB活性

SARS冠状病毒(SARS-CoV) 非结构蛋白NSP3编码的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)对泛素样分子(Ubl) 具有去泛素化酶(DUB)活性,但目前有关NSP3 DUB活性研究的报道甚少. 本研究构建包含Nsp3基因 N末端不同结构域的突变体,并检测NSP3及其一系列突变体对类泛素分子ISG15和SUMO所修饰蛋白质分子的作用特性. 实验结果表明,NSP3及其突变体NSP3AD,NSP3AE,NSP3AF具有一定的去ISG15活性,而其突变体NSP3AC则没有去ISG15 (DeISGylation) 活性. 研究结果提示,SARS NSP3具有一定的体内去ISG15活性,并且这种活性主要依赖于Nsp3基因编码的PLpro. 但SARS NSP3及其突变体NSP3AC,NSP3AD,NSP3AE和NSP3AF并不具有去SUMO (DeSUMOylation) 活性. SARS冠状病毒NSP3对类泛素样分子作用特性的研究为后续NSP3的生物学特性及其对干扰素通路的调控研究奠定了基础.     

药物所研究人员发现可同时治疗SARS和感冒的双效天然产物

日前,中国科学院上海生命科学研究院药物研究所和新加坡理工学院的研究人员通过合作,成功找到一种天然产物,可以和SARS冠状病毒及感冒病毒中负责病毒复制和传播的蛋白酶强烈结合,导致该蛋白酶的功能丧失,从而阻断SARS病毒和感冒病毒在人体细胞内的进一步复制与传播,达到预防或治疗SARS和感冒的目的。     

前沿

每个人都有 L-SIGN 蛋白,那是因为人体基因组中含有一个与生俱来的编码L-SIGN 的基因。来自香港大学的研究人员发现 L-SIGN 蛋白结构和数目的不同会直接影响人体消灭SARS 病毒的能力,这项研究结果刊登在《自然·遗传学》杂志上。研究者之一的林成龙副教授指出,L-SIGN 基因由父系和母系基因组成,若父、母系 L-SIGN 基因的长度一致,即称之为纯合子,带有纯合子 L-SIGN 基因的人编码出的 L-SIGN 蛋白能集中“吸住”SARS 病毒,防止 SARS 病毒攻击健康细胞。实际的病例研究结果也证实了这一观点。研究人员     

中国科学家在野生蝙蝠体内发现“SARS病毒”

据《科学》杂志在线报道,在2002年至2003年冬季暴发的SARS曾造成全球700多人死亡,并且导致8000多人被传染。研究发现,在中国南方动物市场上贩卖的一种与黄鼠狼类似的动物——果子狸可能与SARS的最初发病有关。然而研究人员怀疑,果子狸仅仅是SARS传播中的一个环节,但并不是SARS病毒的真正宿主,这是由于在生活于养殖场或野外的果子狸体内并没有发现SARS病毒。为了找到SARS病毒的真正宿主,中国香港大学(HKU)的微生物学家袁国勇(Kwok-yung Yuen)和同事对猴子、啮齿动物以及生活在香港郊区的几种蝙蝠进行了采样分析。在中国蹄鼻蝠的…     

SARS研究论文产生重要影响

2003年SARS爆发期间,中科院上海生命科学研究院药物研究所药物发现与设计中心和上海生命科学研究院生物信息中心的研究人员及学生,在蒋华良、沈建华、沈旭和李亦学的带领下,开展了SARS重要蛋白结构与功能以及抗SARS药物设计的研究。其中,有关SARS病毒蛋白水解酶三维结构模拟和抗SARS药物虚拟筛选的结果发表在《中国药理学报》(Acta Pharmacol Sin)(2003,24(6):497~504)上,两年来已经被他人引用了22次,在同行中产生了广泛影响。该论文入选了“中国科学院生物类研究所1999~2004年年均被引用4次以上的论文”,更可喜的是,THOMSON公…     

SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价

为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质粒(p CMV△8.2)及转移质粒(pHR′CMV EGFP)3个质粒载体系统共同转染人胚肾细胞293T,包装了SARS假病毒;通过SARS假病毒感染的RD-A细胞中标记基因EGFP表达的分析,确定SARS假病毒能有效进入细胞,建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析,并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果显示:SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致,表明本研究构建的SARS假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。     

PNAS：发现SARS冠状病毒致命点

经过近六年努力，武汉大学科研人员近日发现了SARS冠状病毒致命点，是一组叫”非结构蛋白nsp14”的基因编码。研究人员表示，此次重要发现可为筛选抗击SARS病毒药物奠定基础，进而研发成小分子药物。这项研究成果近日在国际权威综合性学术期刊美国《国家科学院院报》（PNAS）上发表。     

冠状病毒与SARS

最近在世界部分地区流行的非典型肺炎是病毒引起的严重急性呼吸综合征,它是由一种新的冠状病毒引起的,这种病毒被称为SARS病毒。结合SARS病毒对冠状病毒的研究现状进行了简单概括,并概述了SARS的流行特点和可能的发病机理。     

严重急性呼吸综合征（SARS）病毒的形态及其形态发生机制

将SARS患者的咽拭子感染VeroE6细胞 ,用电子显微技术等对SARS病毒进行了研究。结果表明 ,新分离到的病毒粒子没带囊膜时直径大多约 5 0nm ,带有囊膜的直径约 10 0nm。通过RT PCR等证明 ,该病毒是新的冠状病毒。这些病毒可与SARS康复患者的血清呈强烈的阳性反应 ,表明此新的冠状病毒是引起SARS的主要病原。文中还对病毒的发生机制和细胞中的分布进行了探讨。     

SARS病毒S蛋白三维结构预测

蛋白质结构类型识别方法可以在没有序列同源性的蛋白质之间检测有没有结构相似性。利用蛋白质结构类型识别方法预测了SARS病毒S蛋白N端区域的结构。模建的SARS病毒S蛋白N端区域是一个全折叠的结构。     

SARS及其病原体研究进展

严重急性呼吸道综合症(SARS)的病原体己被认定为一种新的冠状病毒-SARS冠状病毒。关于SARS冠状病毒的基因组和蛋白组研究也已取得重要进展,这为探索SARS病毒的来源与进化、研制SARS诊断试剂、开发SARS疫苗和治疗药物奠定了坚实基础。本文对严重急性呼吸道综合症病原学研究取得的一些进展进行了综述。     

中科院完成SARS病毒重要蛋白基因克隆和表达

中国科学院上海生命科学院日前宣布 ,药物所、生化与细胞所的科学家已实现对 SARS病毒 6种主要蛋白基因的克隆 ,并完成其中 3个关键蛋白的表达 ,1种蛋白已开始应用于抗 SARS病毒药物的体外筛选。有关这些工作的学术论文已被 SCI期刊《中国药理学报》接受。这些工作标志着我国科学家在认识和征服 SARS病毒的道路上取得重要进展 ,对 SARS病毒的生物学功能研究 ,特别是对研制抗 SARS病毒疫苗和药物 ,以及 SARS病原学研究都将产生重大推进作用。在 SARS病毒对人体构成感染的过程中起重要作用的蛋白质已被发现有 6种 :E蛋白、S蛋白…     

SARS病毒免疫学性状的结构基础分析

运用生物信息学技术,对SARS冠状病毒基因组及其编码区进行了全序列分析,根据其基因和推导蛋白结构特点及同源性分析,探索SARS病毒主要结构蛋白免疫学性状的结构基础及进一步进行免疫学研究的线索,为深入SARS病毒的诊断预防工作提供参考 。     

植物结婚的聘礼

每个人都有L—SIGN蛋白，那是因为人体基因组中含有一个与生俱来的编码L—SIGN的基因。来自香港大学的研究人员发现L—SIGN蛋白结构和数目的不同会直接影响人体消灭SARS病毒的能力，这项研究结果刊登在《自然·遗传学》杂志上。     

SARS病毒N蛋白的原核重组载体的构建和表达

将SARS病毒N蛋白的基因克隆到原核表达载体 pGEX KG上 ,使其在大肠杆菌DH5α菌株中以与GST蛋白融合的形式表达。采用GluthathionSepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,并用SDS PAGE和WesternBlot对表达的融合蛋白进行分析鉴定。结果表明 ,本实验成功地构建了高效表达SARS病毒N蛋白的重组表达载体 ,所获得的融合蛋白可以直接用于SARS抗体的检测 ,可用于SARS的早期诊断及SARS疫苗的研究。     

SARS病毒M蛋白的二级结构和B细胞表位预测

以SARS病毒基因组序列为基础,采用GarnierRobson方法、ChouFasman方法和KarplusSchulz方法预测蛋白质的二级结构;按KyteDoolittle方案、Emini方案和JamesonWolf方案预测SARS病毒M蛋白的B细胞表位。预测结果表明,在SARS病毒M蛋白N端第11～20、27～36区段和第133～141区段可能是α螺旋中心;M蛋白分子N端第20～27、34～37,44～56,61～64,70～76,79～97,117～132,142～147,165～176区段和第216～221区段可能是β折叠中心。在M蛋白N端第5～6、40～44、105～107、112～116、189～190、202～203区段和第210～215区段具有较柔软的结构,有可能进行一定幅度的摆动或折叠而形成较复杂的三级结构。SARS病毒M蛋白N端第1～15、37～47、99～120、181～192区段和第196～215区段内或附近很可能是B细胞表位优势区域。以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段,用抗原指数,亲水性参数和可及性参数预测SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位,为实验确定SARS病毒M蛋白的B细胞表位和免疫识别研究奠定了基础 。     

焦磷酸测序技术在确认北京严重急性呼吸综合征(SARS)病毒株并检测基因突变中的应用

结合严重急性呼吸综合征(SARS)病毒株序列信息分析和高通量测序技术,建立一种快速、简单地确定SARS病毒株并筛查SARS病毒突变位点和突变频率的方法。从感染人SARS病毒的Vero-6细胞中提取病毒RNA,反转录为cDNA后,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(Pyrosequencing Technology,PSQ)进行第2601、7919、9479、19838多个碱基突变位点测序和突变频率分析。通过测序分析多个可能出现突变的位点,确定了该病毒为北京流行株,同时发现第7919位碱基发生了A／G突变。PSQ技术对于高通量筛选研究病毒基因的突变和确定病毒株型别有着简单、快速、灵敏的特点。利用生物信息学分析核酸多态性,结合实验验证,可以确定SARS病毒流行株的特征,有利于对突发事件及早确定传染来源。     

人源抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因工程抗体的初步研究

严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)或称传染性非典型肺炎,已严重威胁人民健康和生命安全。快速研制一种可用于紧急预防SARS病毒感染的基因工程抗体预防制剂迫在眉睫。为此,运用噬菌体表面呈现技术,从多个SARS病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗SARS病毒基因工程抗体文库,并筛选获得37株特异抗SARS病毒基因工程Fab抗体,其中ll株人源抗体结合基因工程重组的SARS病毒核(N)蛋白,其中的1株在Western blot分析中与SARS病毒结合,识别SARS病毒N蛋白线性位点。对所获抗体的功能鉴定及基因分析正在进行中。人源抗SARS病毒基因工程抗体的获得,将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径。     

SARS起源于污染对病毒进化的加速诱导

针对当前广为流传的SARS病毒“太空起源说”和“野生动物来源说”两种理论,本文根据污染进化生态学原理和SARS病毒发病传染特征,以有关实验结果为科学依据,阐述了SARS病毒的起源问题,指出：我国当前环境日益严重的复合污染为SARS致病病毒的产生提供了适宜的外部生态条件和物质基础,SARS致病病毒可能起源于多个病毒的基因重组或融合,更可能是一种来自于感冒病毒进化而形成的超级感冒病毒．可以预料,这一推断将为彻底解决SARS的病源提供有价值的理论指导．