假单胞杆菌BS1转座突变及高产生物表面活性剂突变株初步筛选

利用含转座子Tn917的温敏性质粒pTV1-OK转化假单胞杆菌BS1原生质体,成功获得3个稳定的转化子;通过Tn917诱导转座突变,产生大量突变体,构建了转座突变体库,采用特异引物对随机挑取的5株突变体进行PCR扩增,获得与预期大小一致片段,表明突变体基因组中有Tn917插入;通过对随机挑取24株突变体乳化(E24)性能测定,发现有一株突变体E24值达到67%,明显高于野生菌株。结果表明转座突变是假单胞杆菌BS1获得高产生物表面活性剂菌株的一种有效手段。     

一株球拟酵母菌产生的胞外糖脂

Toulopsis sp．生物在碳水化台物、植物油或正烷烃中能产生胞外糖脂,为获得高产量糖脂;一些限制因素是必需的,例如氮源的限制能使糖脂产量明显增加。用葡萄糖培养后得到的休止细胞再悬浮于磷酸缓冲液或蒸馏水中,以植物油或正烷烃作碳源,则每1Og干菌能产22g糖脂．     

一株假单胞菌产生的表面活性剂及其乳化性能的研究

本文探讨了假单胞菌产生糖脂的最佳条件。适宜培养基由5%正烷烃,0．5％NaNo3和0.05%酵母膏等成分组成,初始pH7．0。在此条件下糖脂产量可达12—15g／l,相对于基质正烷烃的转化率是40一50％。该糖脂乳化性能优于Tween 60。     

1株来自海洋的芽胞杆菌dhs-330转座突变库的构建及表面活性相关基因的克隆

为研究产生物表面活性剂的海洋芽胞杆菌dhs-330合成活性产物的分子机制,应用质粒pIC333介导的mini-Tn10转座子随机突变技术,构建了芽胞杆菌dhs-330的突变体库。通过表面活性测定和反向PCR克隆,从300个突变株中筛选出产表面活性剂水平提高的突变株2株,分别在ycsG和yvkC基因发生插入突变;表面活性降低的突变株4株,分别在fenC、yrkF、kinE和sigD基因发生插入突变。这些基因可能与芽胞杆菌dhs-330中表面活性剂的合成代谢和调控有关。     

9株海洋来源铜绿假单胞菌合成鼠李糖脂的比较分析

目的:从海洋来源的铜绿假单胞菌中筛选多株具有鼠李糖脂合成能力的菌株。方法:以9株分离自不同海洋环境的铜绿假单胞菌为研究对象,考察并比较其发酵合成鼠李糖脂生物表面活性剂的表面活性、产量和产物成分的差异,扩增并比对合成途径中的关键基因。结果:9株菌的发酵产物均具有表面活性,其中菌株1A01151发酵液的表面活性最强,表面张力值可降低至28 m N/m;9株菌的基因组中均含有鼠李糖脂合成途径中关键基因rhl AB和rhl C,都具有合成单、双鼠李糖脂的能力;菌株1A01151和1A00364的发酵产量最高(2.69 g/L),产物经LC-MS/MS检测,所合成的鼠李糖脂同系物组分不同,双糖双脂的含量最高(1A01151:75.96%;1A00364:61.01%)。结论:海洋来源的铜绿假单胞菌是具有鼠李糖脂高产潜力的菌株,可用于合成性能不同、组成多样的鼠李糖脂生物表面活性剂。     

一株生物表面活性剂产生菌的分离及其特性研究

模炼油厂污泥中分离得到1株生物表面活性剂产生菌C-3, 根据其生理生化特性和16S rDNA序列相似性分析, 将其鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。初步研究了其产生物表面活性剂的最适条件, 在以植物油为碳源、30°C、初始pH 8、Ca2+浓度20 mg/L、250 mL三角瓶中装75 mL发酵液的条件下, 最利于菌株的生长和生物表面活性剂产生。它的成分为糖脂类物质, 临界胶束浓度(CMC)为50 mg/L, 具有很好的增溶效果。     

碳氮比对固氮菌株WN-F合成胞外多糖的影响北大核心CSCD

从沈阳农业大学棕壤长期定位试验站的栽培玉米土壤样品中分离筛选到高产多糖固氮菌株WN-F,从菌株鉴定、培养条件优化和固氮与产糖关系进行初步研究。对其进行形态学观察和分子生物学鉴定,酶标仪分析菌体生物量法确定菌株的生长培养条件,并分析其固氮与产糖之间的关系。结果表明,该菌株为阿氏芽孢杆菌,并命名为Bacillus aryabhattai WN-F。WN-F菌株在37℃,180 r/min情况下12 h时生长量达最高值。其培养基优化配方为(L^(-1)):蔗糖20.0 g,牛肉膏2.0 g,KH_2PO_4 0.4 g、MgSO_4·7H_2O 0.4 g、NaCl 0.4 g、CaSO_4·2H_2O 0.4 g和CaCO_3 2.0 g。菌株WN-F的产糖情况随着初始氮浓度的增加,呈现出抛物线关系,适宜碳氮比促进菌体合成胞外多糖。Bacillus aryabhattai WN-F是长期定位试验玉米土壤中的优势菌株,高产胞外多糖且有固氮作用,是发挥玉米联合固氮作用,减少化肥施用的候选菌株。     

一株铜绿假单胞菌及其产生的鼠李糖脂特性研究

研究高效代谢表面活性剂的菌种,并对菌种和表面活性剂的理化性质进行分析。采用菌种16S rDNA序列分析对菌种进行鉴定,采用紫外光谱扫描、色谱柱层析、薄层层析、单糖分析对生物表面活性剂的种类进行鉴定,并对表面活性剂的理化性质进行研究。从油田采出水中筛选出一株高效代谢生物表面活性剂的菌株T-1,经16S rDNA鉴定为铜绿假单胞菌属(Pseudomonas aeruginosa)。该菌种以甘油和大豆油为碳源的培养基培养4 d后,其发酵液表面张力30.216 mN/m,EI24为100%。根据表面活性剂的红外光谱分析并结合薄层分析,可确定T-1样品中含有糖脂类物质,进一步的表面活性剂的单糖分析显示水解终产物为单一的鼠李糖,最终确定其产物为鼠李糖脂,苯酚-硫酸法测定其鼠李糖脂产率为5.2 g/L,从发酵液提取的棕黄色生物表面活性剂粗品,其表观临界胶束浓度为45 mg/L,该鼠李糖脂对环境(耐温、耐酸碱、耐盐)具有较强的适应性。该表面活性剂对恶劣环境具有较强的耐受性,可应用于微生物采油等用途。     

市售洗衣粉提高木霉菌株产生纤维素酶量的研究

加入不同浓度的双猫牌洗衣粉(主要成份为烷基苯磺酸钠)对木霉菌产纤维素酶的能力发生不同的作用。在浓度为0.1%到0.7%时,酶产量逐步提高。然献当加人量为0.8%时,提高作用下降,0.9%与1%时,反而起抑制作用。这可能与适量表面活性剂提高了木霉菌的细胞膜透性,克服其胞内产酶的反馈现象有关;而过高浓度,却使细胞膜破坏。     

黑曲霉MIUG 1.1 5生产胞外转化酶的研究

研究黑曲霉ＭＩＵＧ１．１５产生转化酶的条件和特性。表面培养时转化酶的产率较高。每隔６ｄ更换一次培养基,菌种连续发酵４５—５０ｄ后,转化酶活力比最初的高４．７倍。此后,ｐＨ值陡然下降,转化酶迅速失活。转化酶最适宜温度４５℃,ｐＨ值４．５,７０℃下热稳定（６０ｍｉｎ内的失活率为５４％）。     

AC1及AC3抗白内障形成中晶状体谷胱甘肽代谢相关酶活性的变化

观察了亚硒酸钠,AC1,AC3对大鼠晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),谷胱甘肽还原酶(GR)及谷胱甘肽硫转移酶(GST)的影响。结果表明,亚硒酸钠组大鼠的晶状体尚未混浊前已出现GSH-Px活性增高及GR和GST的活性降低。GR活性下降随白内障进展而加重。AC1及AC3均可使亚硒酸钠所致的酶活性变化逆转,但对正常晶状体的酶活性没有影响。     

产脂肪酶细菌RYXP的诱变选育及突变株产酶条件优化

以"凤丹"牡丹根际土壤中分离筛选到的产脂肪酶菌株Pseudomonas sp. RYXP作为出发菌株,对其进行了紫外线诱变选育,并采用单因素试验和正交试验方法对活性最强正突变株的产脂肪酶基本特性进行了测定。结果表明,出发菌株Pseudomonas sp. RYXP的紫外线诱变最佳条件为:15 W紫外灯30 cm距离照射1 min;将产脂肪酶活性最强的正突变菌株编号为RYXP-3,单因素试验表明RYXP-3产脂肪酶适宜的碳源为玉米淀粉,适宜氮源为豆饼粉,适宜的磷酸二氢钾含量是0.3%,适宜的初始pH值为7;正交试验表明RYXP-3的最佳的产酶培养基成分组成是:玉米淀粉7%,豆饼粉3%,磷酸二氢钾0.3%,初始pH值为8。在优化方案A1B2C2D3产酶条件下,突变株RYXP-3最高的产酶活性达到56.1 U/mL。突变菌株RYXP-3可作为产油牡丹"凤丹"专用促生菌肥开发的备选资源菌株。     

彩绒革盖菌漆酶产酶条件研究

本文研究了碳源、氮源、愈创木酚、香兰素及培养条件对漆酶分泌的影响;结果表明,淀粉作碳源、干酷素作氮源有利于漆酶的分泌,适宜浓度的愈创木酚和香兰素等对漆酶的产生有一定的作用;pH在3.0－8.0的范围内对漆酶的分泌影响差别不大,培养温度,接种量、通气量对漆酶的分泌有较大影响。     

压力作用下面包酵母胞内谷胱甘肽和麦角固醇的变化

以高纯空气（O2∶N2 ＝21∶79）为加压介质,研究了0.5Mpa压力下面包酵母CICC1447和CICC1339细胞生长及细胞内谷胱甘肽、麦角固醇的含量变化。结果表明：加压培养时两株酵母菌的对数生长期延迟出现,对数生长期的持续时间缩短,而且两株菌的比生长速率均明显低于对照组,同时两株菌的倍增时间也较对照组有所延长;压力刺激可显著提高面包酵母细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量,但麦角固醇含量的变化却不明显。在0.5MPa压力下保压培养3h时CICC1447胞内谷胱甘肽含量比常压对照组提高了42.6%,而加压3h后麦角固醇含量比对照组提高了20.1％;加压培养6h时CICC1339胞内谷胱甘肽含量较对照组提高了58.7%,但其麦角固醇含量反而降低。这说明不同的酵母菌对压力刺激的反应是不同的。     

Cultural Conditions for l-Leucine Production by Strain No. 218, a Mutant of Brevibacterium lactofermentum 2256

The excellent l-leucine producing mutant No. 218, derived from a biotin requiring glutamic acid producing strain, is methionine and isoleucine auxotrophic. A suboptimum growth condition made by adding a limiting amount of isoleucine was necessary for the maximum production of l-leucine. On the other hand, methionine was indifferent to the productivity if sufficiently supplied for growth.

Biotin of more than 50 μg/liter caused the accumulation of l-leucine; less than 50 μg/liter, however, gave a drastic change in accumulation pattern from l-leucine to l-glutamic acid. Strain No. 218 produced 28 mg/ml of l-leucine after 72 hr cultivation when 13 % glucose was supplied as a carbon source, thus giving the yield of 21.6%.

Effects on l-leucine production of concentrations of inorganic salts, pH, temperature and aeration were also investigated.     

酵母菌产麦角固醇发酵条件的研究

为了提高酵母菌麦角固醇的产量,采用摇瓶培养法,对筛选出的一株酵母菌YN2产麦角固醇发酵条件进行了研究。结果表明,酵母菌YN2产麦角固醇适宜的培养基配方为：酵母粉1％,牛肉膏2．5％,葡萄糖8％,K2HPO4 0．3％,MgSO4 0．15％,该菌株产麦角固醇最适培养条件为：培养温度28℃,起始pH6．5,发酵时间72h。在优化的实验条件下,麦角固醇含量可达2．2％,100ml发酵液中麦角固醇产量达25．30mg。     

酵母SOD形成的生理学研究

对筛选出的一株ＳＯＤ高产菌株Ｙ－２１６形成ＳＯＤ的生理条件作了初步研究。结果表明：碳源、氮源、碳氮配比和金属离子等营养条件及培养温度、时间和通气量等培养条件,均对该菌株生物量与ＳＯＤ含量有较大的影响。同时通过对几种酵母的测定,发现酵母菌对氧的抗性越大其ＳＯＤ含量也就越高。     

盾壳霉产生几丁质酶的条件研究

本实验采用摇瓶培养研究了盾壳霉(Coniothyrium minitans)产生几丁质酶的条件。改良的天然马铃薯葡萄糖培养基(mPDB)较合成培养基(SMCS)更适宜作为盾壳霉产生几丁质酶的基础培养基。添加9种不同碳源试验表明葡萄糖较适宜于盾壳霉产几丁质酶;氮源试验表明硝酸钾是产酶的较适宜氮源。盾壳霉形成几丁质酶的培养时间以15 d为佳,培养的适宜pH值为6.5。     

Optimum Culture Conditions for Production of Exfoliative Toxin by Staphylococcus hyicus

Optimum culture conditions for the production of exfoliative toxin by Staphylococcus hyicus (shET) were examined. High shET activity was obtained from the culture filtrate of HI and TY broth inoculated with S. hyicus. The pH in these two media ranged from 7 to 8.5 during bacterial culture, while the lowest pH in TS and BHI broth was less than 6. shET activity in the culture filtrate from TY broth inoculated with 10⁷ CFU of S. hyicus per ml was higher than that in TY broth inoculated with 10⁶ and 10⁸ CFU of bacteria per ml. When shET activity in the culture filtrate was measured under various shaking conditions, the culture filtrate shaken at 75 oscillations per min had the highest shET activity of the five shaking conditions. shET activity of the culture filtrate of TY broth to which protease inhibitor had been added was the same as that of TY broth without inhibitor. shET activity in a shaking culture in an Erlenmeyer flask was also the same as that in sac culture and that in shaking culture using a shaking (Sakaguchi) flask. shET activity in TY broth supplemented with 100 mM glucose was significantly lower than that in TY broth without glucose. Based on the above results, the optimum culture conditions for the production of shET were as follows: inoculation of 3 × 10⁹ CFU of S. hyicus strain P-1 into 300 ml of TY broth in a 2,000-ml Erlenmeyer flask, and incubation at 37 C with shaking at 75 oscillations per min. Then shET activity of the culture filtrate under appropriate culture conditions was measured after various incubation periods. shET activity was detected 6 hr after inoculation, reached the maximum (2⁵³ exfoliative unit/0.1 ml) at 16 hr and decreased between 20 and 48 hr. Thus, the optimum incubation period was determined to be 16 hr. Then the optimum concentration of ammonium sulfate for isolation of shET from the culture filtrate under appropriate culture conditions was examined. The greatest shET activity was obtained from the fraction salted out with 90% saturated ammonium sulfate. Thus, the optimum concentration of ammonium sulfate for the isolation of shET was determined to be 90% saturation.