底物中的硅原子对酶反应的影响

在酶工程学的研究史上,人们一方面不断地研制开发新的酶种;一方面利用固定化、酶分子改造和修饰等技术来提高酶的活性和稳定性;另一方面,则不断地开拓酶的新用途。酶催化非天然化合物的生物合成和转化（正是这一方面研究的新进展）。由于有机硅化合物在有机合成,尤其...     

底物的分散和溶解对甾体微生物酶反应的影响*

甾体的溶解是微生物转化反应的控制步骤。表面活性剂对憎水性物质的增溶作用是具有憎水内核胶团形成的直接结果。随表面活性剂溶液浓度的增加 ,胶团数目增加 ,甾体水溶性增强。复配型分散剂PSE MGE应用于甾体转化体系 ,相对于单组分分散剂PSE而言 ,实现同一程度甾体水溶性增强所需的表面活性剂用量减少 ,对菌体生长的负面影响较小 ,有利于转化。超声与分散剂配合使用的效果优于分散剂单独使用的效果 ,且使用较强的超声声强 (1 2 4W/cm2 )和较短的超声时间 (5min)时效果最佳。     

交联酶晶体制备及其稳定性的研究*

酶制剂已经广泛应用在化学工艺、医学、农业、食品工业和化学分析等各个领域中,但酶的明显弱点是稳定性差,特别是应用于有机合成的酶还要耐受有机溶剂的变性作用等,所以酶的稳定化研究越来越引起重视。肪酶由于其在疏水环境的特殊催化作用,被广泛应用于有机合成中。本研究所采用Candida ru-gosa脂肪酶(CRL)是目前应用最为广泛的脂肪酶,它不仅能在水和有机介质催化酯、酸、醇的拆分,而且还能催化转酯、酰化、脱酰化等立体异构化反应和酯的水解。但是目前CRL的商业化产品是含有多种水解酶的混合物。其立体异构的专一性低,而纯化的CRL的立体异构的专一性提高,但是操作稳定性差。本文采用酶结晶技术与化学交联技术相结合的方法,制备出一种新型实用的交联酶晶体催化剂,并对它的温度、pH和在有机溶液中的稳定性进行了研究。     

琼胶酶研究进展*

琼胶酶是一种多糖水解酶,根据降解琼脂糖的作用方式不同,可以分为α-琼胶酶（EC3.2.1.-）和β-琼胶酶（EC3.2.1.81）。中从琼胶酶的分类及酶活测定,酶的来源,产酶微生物的酶系及酶学性质,琼胶酶的分子生物学研究,酶的应用几个方面综述了琼胶酶的研究进展。     

甲醇的生物利用与转化*

甲醇作为一种来源广泛、价格低廉、还原度高的非粮原料有望成为下一代生物制造的关键原料。利用合成生物学技术构建能够高效利用甲醇的重组微生物以实现从甲醇到高值化学品的生物转化已成国内外研究热点,但由于甲醇代谢过程的特殊性及复杂性,目前人工设计的甲基营养菌还难以实现以甲醇为唯一碳源进行生长及产物合成。基于对天然甲基营养菌甲醇代谢过程的分析,从甲醇脱氢酶的筛选与改造、甲醛同化途径的重构与优化、甲醇到化学品的生物转化几个方面对合成型甲基营养菌的构建策略及面临的挑战进行总结与分析,以期为今后合成型甲基营养菌的人工设计和利用提供一定的借鉴。     

甲醇的生物利用与转化*

甲醇作为一种来源广泛、价格低廉、还原度高的非粮原料有望成为下一代生物制造的关键原料。利用合成生物学技术构建能够高效利用甲醇的重组微生物以实现从甲醇到高值化学品的生物转化已成国内外研究热点,但由于甲醇代谢过程的特殊性及复杂性,目前人工设计的甲基营养菌还难以实现以甲醇为唯一碳源进行生长及产物合成。基于对天然甲基营养菌甲醇代谢过程的分析,从甲醇脱氢酶的筛选与改造、甲醛同化途径的重构与优化、甲醇到化学品的生物转化几个方面对合成型甲基营养菌的构建策略及面临的挑战进行总结与分析,以期为今后合成型甲基营养菌的人工设计和利用提供一定的借鉴。     

微环境对脂肪酶催化酮基布洛芬立体选择性酯化的影响*

系统研究了反应介质、助溶剂、水活度、温度、ｐＨ等因素对脂肪酶Ｎｏｖｏｚｙｍ ４３５催化酮基布洛芬动力学拆分的影响。以环己烷为反应介质,酶表现出较高的催化活性和对映体选择性;在环己烷中添加苯,可大幅度提高Ｅ值;适宜的反应温度为３０℃;最适反应初始水活度为０．０９;在所研究的ｐＨ６～８范围内,ｐＨ对酶活及酶的体选择性影响不大。     

猪源链球菌溶血性的检测*

用平板法和上清法检测了 1 9株猪源链球菌的溶血性 ,并通过加入还原剂或氧化剂分别作活化和抑制试验 ,对各菌株溶血素的性质做了初步鉴定。其中 8株猪链球菌 2型菌株在血平板上的溶血性较弱 ,仅为α溶血或弱 β溶血 ,但在THB和 5 %血清THB中都可产生很强的溶血性 ,其溶血性可被还原剂活化 ,被氧化剂和胆固醇所抑制 ,卵磷脂对其活性则没有影响 ,属于巯基活化类 (类SLO)溶血素。 9株马链球菌兽疫亚种菌株在血平板上呈显著的 β溶血 ,在不含血清THB中不能产生溶血性 ,在含血清的THB中可产生较强的     

E83V对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的影响*

利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因作了体外定点突变,获得了最适作用温度有所提高的突变体。含突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-E83V在Pichiapastoris GS115中表达。对突变体表达产物PEL-E83V-GS与野生型表达产物PELGS作了比较:前者最适作用温度为45℃,比野生型提高了5℃;其热稳定性基本不变;突变体在37℃下的表达量为188U/mL,约为野生型的80%。最适作用温度的提高可能是由于83位亲水性的Glu用疏水性的Val取代,增加了脂肪酶     

微生物环氧化合物水解酶在有机合成中的应用*

环氧化合物水解酶是一种在自然界广泛存在的水解酶,它能高对映体选择性、高区域选择性地将环氧化合物水解为相应的邻位二醇。近年来,国际上利用微生物环氧化合物水解酶催化的不对称水解反应获得了高光学纯度环氧化合物和邻二醇,可用于多种精细化学品和生物活性物质的合成,为该酶在合成工业上的应用开辟了一条新途径。这里综述了该酶的来源、催化机理、催化特性和应用研究情况。     

用快中子法选育细菌脂肪酶高产菌株*

研究了从土壤中筛选产脂肪酶的菌株,利用紫外线、快中子、快中子和磁场复合、γ射线、γ射线和磁场复合诱变,以酶活为筛子进行诱变育种。结果,出发菌酶活较低的一株得到了一株酶活为３９６．２２Ｕ／ｍＬ的诱变株,此酶活比出发菌株高９２倍,并发现此菌对紫外线和快中子比较敏感;而出发菌酶活较高的一株得到了酶活为４２４．６０Ｕ／ｍＬ发酵液的诱变株,此酶活为出发菌株３．０倍。在此基础上,初步探讨了快中子、γ射线及磁场复合处理在产脂肪酸菌种诱变中的作用,并认为,在产脂肪酸菌株的诱变中快中子诱变更为有效。     

多酚干扰细菌群体感应研究进展*

多酚化合物是人类日常饮食中一类典型的天然产物,具有干扰分子信号通路、影响肠道菌群组成和保护人体肠道健康的功能。针对不同微生物群体感应(quorum sensing,QS)系统,多酚能够干扰细菌生物膜的形成和微生物致病性。介绍多酚的类型、来源和含量,总结多酚对多种QS相关表型,如菌体运动性、黏附性、生物膜形成和毒力因子的释放等具有的干扰作用,以及一些常见多酚对典型病原体的干扰作用,提出基于多酚的QS干扰在未来疾病治疗中面临的主要挑战。     

真菌花色素苷酶研究进展*

花色素苷酶是一类能催化花色素苷水解、褪色的糖苷酶,目前仅发现真菌有该酶的存在。本综述了真菌花色素苷酶在食品工业上应用,花色素苷酶的来源、种类、催化花色素苷降解的模式,花色素苷酶活力测定方法、分离纯化方法及酶学性质。     

基于分子伴侣策略提高NADPH依赖型醇脱氢酶的异源可溶性表达 *

目的:生物催化的氧化还原反应广泛应用于手性化合物的制备,其中很多反应涉及辅酶NADPH的原位再生。以异丙醇为辅助底物,利用醇脱氢酶再生NADPH,具有比酶活高、副产物丙酮易于分离等优势,受到越来越多的关注。选择极具应用潜力的来源于Clostridium beijerinckii的醇脱氢酶CbADH作为研究对象,针对其在大肠杆菌中的可溶性表达差、酶活低的瓶颈问题开展研究。方法: 首先通过引入诱导型质粒pGro7表达分子伴侣GroES-GroEL,将pET-28a(+)质粒表达CbADH的可溶性提高了3.57倍,酶活达到出发菌株的4.83倍。其次,考察了另外三种不同的分子伴侣表达策略:pET-28a(+)单质粒共表达、基因组强化表达GroES-GroEL和组成型改造pGro7/GroES-GroEL和pET-28a(+)/CbADH双质粒共表达。结果: 组成型改造pGro7和pET-28a(+)双质粒共表达策略的效果最优,其CbADH的可溶性表达提高了8.07倍,酶活达到了21.79U/mg DCW,是出发菌株的9.43倍。结论: 为CbADH的工业应用奠定了良好的基础,也为外源蛋白的可溶性表达提供了参考。     

微环境对脂肪酶催化乙酸甲基苯甲酯立体选择性氨解的影响*

系统研究了反应介质、水活度、温度、pH等因素对脂肪酶Novozym435催化乙酸甲基苯甲酯立体选择性氨解反应的影响。以正己烷为反应介质,酶表现出较高的催化活性和对映体选择性;适宜的反应温度为25℃～35℃;最适反应体系初始水活度为0.33;较适宜的pH范围为6～7。     

螺旋藻过氧化氢酶的比较研究*

采用碘量法对毛乌素沙地碱湖的钝顶螺旋藻S1 与国外引进的钝顶螺旋藻S2 和极大螺旋藻S3 的过氧化氢酶 (CAT)进行了比较研究。结果表明 :S1 、S2 和S3CAT活性在 2 5℃、pH 7 0时分别为 41 0 7U/g·FW、 550 4U/g·FW和 370 3U/g·FW ;Km值分别为 5 0× 1 0 ^{- 2}mol/L、 5 4× 1 0 ^{- 2} mol/L和 3 8× 1 0 ^{- 2} mol/L ;最适温度分别为 2 5℃     

电场对细胞影响的研究进展*

概述了近年国内外在电场对细胞影响领域的研究成果 ,阐述了由电场引起的细胞定位、特性运动、向电生长等电特性的机理及其在生物细胞工程中的应用。     

以染料为底物的Trametes hirsuta降解反应体系的建立*

建立Trameteshirsuta的生长繁殖和对模式染料比布列希猩红脱色降解的反应体系 ,研究表明 :菌的生长与降解活动的适宜温度为 30℃ ,静培养 ;培养基组分对脱色降解的影响不大 ;从便于观察和缩短反应周期考虑 ,土豆液体培养基有明显的优点 ,可作为建立Trameteshirsuta反应体系的首选培养基。菌对比布列希猩红、直接深蓝L 3RB、活性艳蓝X BR、碱性紫 5BN和亚甲基蓝等均有较好的脱色降解效果。     

基因体外诱变*

综述了基因体外诱变的一般方法和技术,并将其分为不依赖于PCR体外诱变和依赖于PCR体外诱变两大类。着重介绍了基因体外诱变最新突破即DNA　Shuffling技术。