母胎界面自然杀伤细胞的研究进展

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是母胎界面丰度最高的免疫细胞,在妊娠早期的子宫蜕膜中大量积聚.研究表明母胎界面NK细胞具有独特表型和功能,在妊娠期免疫耐受调节、子宫内膜蜕膜化、滋养细胞侵袭、子宫螺旋动脉重塑、胎盘形成和胎儿生长、发育等多方面都发挥关键作用,但是其在妊娠中的功能及其作用机制还有待深入研究...     

母-胎免疫耐受机制研究现状与发展趋势

母-胎免疫耐受作为免疫学原理的唯一例外,一直是生殖免疫学界备受关注的焦点问题。一个世纪以来,人们对于母-胎免疫耐受建立和维持的机制有了越来越深入的认识。妊娠早期胎儿绒毛外滋养细胞(EVT)侵入蜕膜组织,与母体蜕膜免疫细胞(DIC)及蜕膜基质细胞(DSC)直接接触,建立精细的母-胎交互对话。在总结既往研究成果的基础上,围绕母-胎界面关键的功能细胞,基于母-胎交互对话阐明母-胎免疫耐受的建立和维持机制。其中,对以滋养细胞为中心的母-胎界面固有免疫应答、母-胎界面适应性免疫应答及穿插于其中的协同刺激信号和趋化因子等方面进行概述,以解析人早孕母-胎免疫耐受与胎盘形成机制,为反复自然流产、子痫前期、胎儿宫内生长受限等疾患的防治提供新的思路。还将为移植免疫学、肿瘤免疫学的研究提供借鉴,因此,具有重要的理论意义和实际应用价值。     

克隆哺乳动物的胎盘发育缺陷

克隆又称体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer, SCNT),该技术已在多种哺乳动物中成功建立并被逐渐应用。然而,利用该技术获得的哺乳动物克隆胚胎的发育效率非常低(一般只有1%~5%),这严重限制了克隆技术的应用。胎盘发育缺陷被认为是抑制克隆胚胎发育的一个主要原因。几乎所有的SCNT来源胎盘都会出现不同的发育缺陷,如胎盘增生、胎盘血管缺陷、脐带畸形等。胎盘异常的根本原因是滋养层细胞基因组在发育过程中未能建立正确的表观遗传修饰,导致胎盘发育调控相关的重要基因,特别是印迹基因的表达出现异常。印迹基因表达异常导致胎盘的形态异常和功能缺陷,进而影响克隆胚胎的发育能力。目前,虽然有许多提高克隆胚胎发育能力的研究报道,然而在大多数研究中克隆效率并没有得到大幅度的提高,主要原因之一是克隆胚胎的胎盘发育仍然存在诸多缺陷。本文综述了克隆哺乳动物的胎盘异常及其印迹基因表达,并对未来提高克隆效率的研究提出展望。     

母-胎界面T细胞功能研究进展

母-胎界面免疫耐受是成功妊娠建立和维持的基础,T细胞是子宫蜕膜免疫细胞的重要组成细胞,既要介导抗感染免疫,保护胚胎免遭外来病原体攻击,同时又要参与母体接受同种异体胚胎的复杂免疫调节过程,在调控胚胎植入和维持妊娠过程中发挥重要作用,其功能失调可能会导致早期妊娠失败或中晚期妊娠并发症。本文就近年来关于妊娠期母-胎界面T细胞亚群的组成、表型特征及其功能进行介绍,并进一步阐述蜕膜CD4⁺与CD8⁺T细胞在母-胎免疫调节中的作用,以及异常调控致早期妊娠失败的分子机制,有助于深入理解母-胎免疫耐受机制,为妊娠相关疾病的防治提供新的线索。     

人胎视网膜SOD免疫阳性细胞的发育与细胞凋亡

选择不同胎龄的人胎18例,用免疫细胞化学ABC法和TUNEL法观察人胎视网膜超氧化物歧化酶（SOD）免疫阳性细胞的发育和细胞凋亡。结果显示;（1）E15w节细胞层开始出现SOD免疫阳性细胞,E20w和E28wSOD免疫阳性细胞排列较整齐,分布于视网膜的外核层,内核层,节细胞层;E40wSOD免疫阳性细胞主要集中于视网膜的外核层,内核层,节细胞层,其数量增多,特别是内核层SOD免疫阳性细胞增多明显。（2）TUNEL法标记的视网膜凋亡细胞胞核具有指环状典型的凋亡特征,E12w人胎视网膜未见凋亡细胞,E15w,E17w凋亡细胞较多,大小不一,分布于视网膜的全层;E20w凋亡细胞主要集中在内核层,数量减少,E28w凋亡细胞仅见于内核层,胞核呈指环样外观,着色较深,但数量较E20w进一步减少;E40w视网膜全层未见凋亡细胞。结果提示,E28w视网膜SOD抗氧化酶系,光感受的基本结构初步发育成熟,其抗氧化保护作用可能主要来源于内核层的SOD免疫阳性细胞。     

人胎视网膜含NOS神经元的发育

本文用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的组织化学方法对胎龄１５周至３６周的人胎视网膜含ＮＯＳ神经元的发育进行了研究。胚胎１５周视网膜颞侧半少部分神经元即有ＮＯＳ的表达,２０周视网膜含ＮＯＳ神经元数密度达峰值。大部分含ＮＯＳ神经元胞体位于内核层内带,只少部分位于节细胞层,其突起均分布于内同层,形成内同层的１、３、５亚层。含ＮＯＳ神经元的形态各异,依据其突起的多少分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等三种类型,其中Ⅱ、Ⅲ型含ＮＯＳ神经元在２８周以后才开始出现,且愈近晚期胎龄,它们所占含ＮＯＳ神经元的数量比呈上升趋势。随视网膜发育成熟,含ＮＯＳ神经元胞体均面积呈不断增大的变化。本文结果显示：人胎视网膜内核层含ＮＯＳ神经元为无长突细胞,节细胞层的Ⅰ型含ＮＯＳ神经元为移位无长突细胞,推测它们在视网膜的发育过程中对内网层突触的形成与修饰可能起有重要作用。     

布氏田鼠体温调节能力的胎后发育

为探讨布氏田鼠幼体体温调节能力的发育特点,我们对其胎后发育过程中代谢产热和体温的变化进行了观察。测定记录了1—40日龄的布氏田鼠幼体在巢中的体温,在23℃和30℃条件下的静止代谢率,以及在23℃和30℃时暴露1．52h后体温的变化,计算了幼体的总热传导率和恒温指数,并测定了聚群对幼体代谢产热的影响。布氏田鼠是典型的晚成型发育类型,幼体出生时身体裸露,体温调节能力很差。17日龄前,幼体在23℃冷暴露1．5—2h不能维持恒定的体温,9—17日龄幼体的恒温能力发育迅速,1713龄后幼体在23℃时开始表现出有效的恒温能力。幼体发育过程中逐渐升高的恒温指数和逐渐下降的总热传导率,也反映了幼体不断增强的恒温能力。虽然幼体在发育早期恒温能力差,表现出变温性的特点,但代谢率的测定表明,即使刚出生的幼体也具有受到冷刺激而增加产热的反应。聚群实验结果表明,幼体的聚群行为在降低代谢率、节约能量方面有明显的作用。巢中幼体体温的测定表明,1—40日龄幼体体温逐渐升高的趋势明显,且始终保持在33℃以上。这些结果说明,布氏田鼠的幼体在生长发育过程中,主要靠细致的母体关怀、聚群行为、巢的保温作用以及自身较弱的产热能力来使体温维持在较高的水平,从而不会因体温过低而使幼体的生长速度降低[动物学报51（5）：780—789,2005]。     

L-selectin配体在输卵管妊娠中母胎界面的表达

目的:探讨L-selectin配体(HECA-452和MECA-79)与输卵管妊娠的关系.方法:运用免疫组化和实时荧光定量PCR的方法,检测16例输卵管妊娠患者的胚囊种植部位标本(A组)、16例胚囊种植旁部位标本(B组)和4例正常假孕输卵管标本中的HECA-452和MECA-79的表达情况.结果:免疫组化结果显示HECA-452在A组中染色强阳性、中度阳性和弱阳性分别为56.25%、31.25和12.5%,而在B组中仅为31.25%的弱阳性,而阴性占68.75%,A组中的HECA-452的染色阳性率和阳性程度明显高于B组.MECA-79染色在A组中弱阳性(25%),B组中均为阴性(100%).HECA-452和MECA-79在C组中均阴性.HECA-452 mRNA在A组中的表达明显高于B组,两者有统计学差异(P＜0.001).结论:L-selectin配体HECA-452和MECA-79在输卵管妊娠的母胎界面上有表达,L-selectin系统可能参与榆卵管妊娠的发生.     

胎鼠肝脏发育过程中肝窦的形成与成熟

为了研究胎鼠肝脏发育过程中肝窦的形成与成熟,用窦内皮细胞表达的一种特异性抗原,SE-S,作为窦内皮细胞表型成熟的标志,通过免疫组织化学和免疫电镜来观察肝脏发育的不同时期该抗原的表达以及与先存大血管的关系。实验证明,在胎龄15天时,即可观察到散在的肝窦样结构呈现阳性反应,而表达第八因子相关抗原的大血管为阴性。随着肝脏的发育,表达SE-S抗原的肝窦在数量和长度上亦随之增加,并且与肝细胞直接或密切接触。结果提示,肝窦的形成与成熟似乎是随机发生的,可能始于胚胎发育的第15天或更早,与先存大血管无直接相关性;肝细胞可能调节窦内皮细胞的成熟(SE-S抗原的表达)。     

大鼠恒温能力和产热的胎后发育

本文通过胎后各龄大鼠急性暴露于不同试验温度时的体温动态变化,显示大鼠体温调节的胎后发育有阶段性。同时表明肝线粒体的呼吸速率、氧化磷酸化及呼吸控制率等功能在胎后也有个发育过程。肝线粒体发育成熟时期,正是机体恒温能力迅速发展的阶段。推测肝线粒体的成熟可能是体温调节发育的细胞机制之一。褐色脂肪细胞色素氧化酶和α-磷酸甘油氧化酶活力的变化,表明褐色脂肪在大鼠新生儿阶段的体温调节中具有重要作用。     

人胎大肠氮能神经元发育的研究

By using histochemical methed of NADPH-diaphorse, the development of the nitrergic neurons in the large intestine of human fetus were studied. The results showed: At the fifth month of gestation, weak positive reaction of nitric oxide synthase (NOS) appeared in part of the round cells of intermuscular ganglia. The round cells differentiated into the nitrergic nerve cells. At the sixth month, the bodies of nitrergic neurons were obviously enlarged, the processes of which were lengthened. The nitrergic nerve fibers were seen in the muscle layer, the submucosa and the base of the intestinal gland. The growth and development of nitrergic neurons reached its peak at the seventh month. The number of intermuscular ganglionic cells was increased. The density of nitrergic nerve fibers was increased in the inner circular muscle layer, and have bead-like structures. At the eighth to tenth month, the staining intensity of nitrergic neurons was increased. The myenteric plexus was densely distributed with nitrergic nerve cell bodies, whereas the submucosa and the inner circular muscle layers contained only a few neurons. The nitrergic nerve fibers were observed in all layer of large intestine, the density of the distribution of nitrergic nerve fibers was by far the highest in the inner circular muscle layer, less in the submucosa and outer longitudinal muscle layer, and only a few were found in the mucous layer. To our knowledge, it is the first time that the development of nitrergic neurons in the large intestine of human fetus was demonstrated.     

人胎垂体生长激素样免疫反应细胞的发育

为探讨人胎垂体生长激素细胞发育规律,本文用免疫细胞化学结合图像分析,研究１９例不同胎龄人胎垂体生长激素细胞的形态、大小、光密度变化。结果如下：①胎１６周已存在生长激素免疫反应细胞,随胎龄增加,细胞多排列成团或索,并由周边部向远侧部的中央延伸。②随胎龄增加,生长激素样免疫反应细胞数量逐渐增多,细胞逐渐增大,胞浆逐渐增多,核浆比值逐渐变小。至胎龄３２周,生长激素样免疫反应细胞以大型细胞为主,多为圆形或卵圆形。③生长激素样免疫反应细胞的光密度随胎龄增加而逐渐增高,２６周达高峰,以后呈下降趋势,但仍高于２４周的水平,结果提示：垂体生长激素细胞的发育是从幼稚到成熟的过程,生长激素细胞的功能在胎２４－２６周最旺盛。     

人胎大肠氮能神经元发育的研究

用NADPH-d组织化学法对人胎大肠氮能神经元的发育进行了观察.结果表明第5个月胎龄时,肌间神经节处圆形细胞中部分细胞出现一氧化氮合酶(NOS)阳性反应,并分化成氮能神经细胞.第6个月胎龄时,氮能神经元胞体增大,突起伸长,在肌层、粘膜下层和肠腺基部出现氮能神经纤维分布.第7个月胎龄时,氮能神经元生长发育达到高峰,肌间神经节细胞数目增多,环肌层神经纤维分布密度增加,膨体结构明显.第8-10个月胎龄时,氮能神经元染色强度加深,其胞体分布以肌间神经节最多,粘膜下层和内环肌层较少.氮能神经纤维的分布密度以内环肌层最高,粘膜下层和外纵肌层次之,粘膜层较低.本研究揭示了大肠氮能神经元发育的变化规律.     

宫内发育迟缓胎鼠心率变异性功率谱分析

为了探讨将胎儿自主神经发育及其功能状况作为判断胎儿宫内发育迟缓(IUGR)的可行性,采用酒精灌胃加限食法建立IUGR动物模型,利用自回归(AR)模型法对IUGR胎鼠心率变异性(HRV)进行功率谱分析.结果表明,无论是低频功率、高频功率还是总功率,实验组均明显高于对照组,但标化后的高频功率实验组则明显低于对照组,标化后的低频功率实验组仍明显高于对照组.提示,利用FHRV谱分析评价胎儿自主神经发育及其功能状况,进而对IUGR进行产前诊断的方法是可行的.     

晚成性哺乳动物体温调节能力的胎后发育

按照体温调节能力的发育情况,哺乳动物的生长发育可分为早成性、晚成性和未成熟性3类。本文主要综述了晚成性哺乳动物体温调节能力的发育特点。这类动物的幼体出生时一般身体裸露,热传导率较高,产热能力较差,不能进行有效的体温调节。当环境温度低于热中性区时,单独的个体不能维持较高的恒定体温。但晚成性幼体也具有一定的体温调节能力,当受低温刺激时,即使新生幼体也会具有增加代谢率的反应;同时结合亲体关怀和幼体之间的聚群效应以及巢的保温作用等方式,仍能使其体温维持在一个较高的水平。晚成性幼体生理性产热的不足,也可看作是一种有利的特点,这样可以减少能量在体温调节方面的消耗,从而增加用于生长发育的能量。文章最后对可能的发展方向进行了展望。     

人胎视网膜神经肽Y免疫反应神经元的发育

本文用免疫细胞化学ＡＢＣ法,研究１５—３８周龄人胎视网膜神经肽Ｙ免疫反应（ＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹｉｍｍｕｎｏｒｅｃｔｉｖｅ,ＮＰＹ－ＩＲ）神经元（以下称ＮＰＹ－ＩＲ细胞）的发育。结果表明：①胎龄１５周视网膜中央部已出现不同类型的ＮＰＹ－ＩＲ细胞：位于黄斑及其周围外核层的为ＮＰＹ－ＩＲ视锥细胞;位于内核层最内一列的为ＮＰＹ－ＩＲ无长突细胞位于节细胞层的可能为ＮＰＹ－ＩＲ移位无长突细胞或节细胞;内核层和节细胞层的ＮＰＹ－ＩＲ细胞的突起均分布在内网层的第１亚层。②胎龄２４周后,ＮＰＹ－ＩＲ视锥细胞完全消失。③随着视网膜的发育,内核层和节细胞层的ＮＰＹ－ＩＲ细胞数量增多,突起增粗增长,胞体分布由中央部扩展到周边部,其中内核层ＮＰＹ－ＩＲ细胞的密度呈现从中央部向周边部逐渐降低的分布方式,节细胞层ＮＰＹ－ＩＲ细胞则多数集中分布在视网膜的边缘和黄斑之间,形成较高密度的环状区。     

胎盘发育过程中的表观遗传学改变及其相关疾病

胎盘介于胎儿与母体之间,是维持胎儿宫内生长发育的重要器官。在胎盘的正常发育过程中,子宫正常蜕膜化、滋养层细胞粘附与侵袭、胎盘血管生成与形成、胎盘印记基因表达都受到表观遗传修饰(如DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA等)的调控。研究已经证实环境因素如重金属、化合物、现代辅助生殖技术、营养物质均可导致胎盘上多种基因的表观遗传修饰异常。此外,胎盘基因表达存在性别差异也可能与表观遗传修饰有关。目前,在临床上可运用产前DNA甲基化水平分析技术检测异常的表观遗传修饰,并在疾病早期发现并做出诊断,从而为疾病预防及治疗提供依据。本文对胎盘正常发育过程中表观遗传修饰的调控及环境因素所致的胎盘基因表观遗传改变进行了综述,以期对胎盘相关疾病的诊断与治疗提供借鉴和参考。     

人胎胃壁内NOS阳性神经元发育的研究

研究用NADPH-d组织化学法对第3个月胎龄至足月人胎胃壁内NOS阳性神经元的分化,迁移和生长发育进行了观察。结果表明：第5个月龄时,肌层神经节处的圆形细胞出现一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS)阳性反应。第6个月龄时,NOS阳性细胞分化演变成NOS阳性神经细胞,细胞呈圆形或椭圆形,核大,细胞质极少,由细胞发出短小的6个月龄时,NOS阳性细胞分化演变成NOS阳性神经细胞,细胞呈圆形或椭圆形,核大,细胞质极少,由细胞发出短小的突起,有部分NOS阳性细胞分化演变成梭形的NOS阳性神经细胞,呈条索状排列和粘膜下层延伸,吸的到达粘膜层,在粘膜层形成网状细胞,第7个月龄时,神经元细胞明显增大,细胞质增多,染色加深,在肌层形成神经节,神经节细胞突起投射到整个肌层,第8-10个月龄时,肌层和粘膜下层神经元日趋成熟,细胞质增多,染色强度加深,肌层神经纤维分布密度增加,大多数神经纤维增粗,有的呈弹簧样弯曲,其走向与肌纤维长轴平行。结果提示;人胎胃壁内NOS阳性神经元来源于胚胎早期肌层神经节处的圆形细胞,通过分化,生长发育形成成熟的NOS阳性神经元。     

VEGF在人胎卵巢发育过程中的表达研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在人胚胎卵巢组织发生过程中的表达特征,探讨其在卵巢发生中的作用。方法采用HE染色和SP免疫组织化法学法检测VEGF在不同胎龄卵巢组织中的表达变化。结果VEGF在胎儿卵巢初级卵母细胞、卵泡细胞、部分基质细胞呈阳性表达,在卵母细胞的染色程度均强于卵泡细胞和基质细胞,基质小血管内皮也有阳性表达。其在卵母细胞中以胎24w阳性细胞多且表达量强,此后呈逐渐下降趋势。结论胎儿卵巢存在局部调节因子,VEGF表达于人胎卵巢中,以自分泌或旁分泌方式参与卵母细胞生长,在卵巢发生、发育过程中起着一定的作用。