加热灭活的乙肝疫苗(CLB)的免疫力与安全性

<正>乙肝苗(CLB)是用人血浆纯化的HBsAg制备的,疫苗中残余的乙肝病毒以101—104.5℃加热灭活90秒针,按着以65℃低温巴氏法灭活10小时。疫苗首先在黑猩猩和一定数量的人体中进行广泛的检测。在乙肝病毒(HBV)感染的高危人群男性同性恋中,血液透析工作人员和血液透析患者中,以安慰剂对照双盲法证明CLB疫苗     

流行性感冒裂解疫苗免疫原性试验及电镜观察

实验报告了以三硝基甲苯X-100(Triton X-100)为裂解剂对流行性感冒病毒裂解效果的电镜观察结果及裂解疫苗的免疫原性。通过对病毒纯化、裂解、再纯化制备的3批流行性感冒裂解疫苗样品的电镜观察,表明使用此裂解剂能使疫苗中的病毒裂解完全,无完整病毒颗粒,裂解效果好。安全试验和免疫试验结果表明疫苗的安全性好,免疫效果好。     

H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗的长期免疫原性研究

目的 评价H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗的长期免疫原性。方法 制备含MF59佐剂的H7N9禽流感病毒裂解疫苗成品,放置于(6±2)℃环境下,取保存6、24和30个月后的疫苗,对小鼠进行免疫,以血凝抑制效价和微量中和抗体滴度来评估该疫苗的免疫原性。同时,用存放30个月的疫苗进行2次免疫后,对小鼠进行攻毒,观察MF59佐剂疫苗的免疫保护效应。结果 H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗在(6±2)℃保存30个月后免疫小鼠,检测其血凝抑制抗体效价和微量中和抗体滴度均没有明显的变化,且免疫小鼠能够有效抵御H7N9病毒的感染及其致病效应。结论 H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗具有良好的免疫原性,在(6±2)℃至少可保存30个月。     

罗非鱼无乳链球菌Sip基因的克隆、表达及免疫原性分析

表面免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)的一种表面蛋白,在GBS多种血清型的菌株中均有表达。研究从实验室分离到的罗非鱼无乳链球菌广东株的基因组DNA中扩增出Sip基因,构建原核表达载体pColdII-Sip,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株。经诱导表达、SDS-PAGE电泳检测显示重组蛋白主要以可溶形式表达。重组蛋白用亲和层析的方法纯化,蛋白纯度达98%。纯化后的重组蛋白免疫罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)以分析其免疫原性。受免鱼免疫14d后进行人工攻毒试验,免疫组的相对保护率为70%—87%。酶联免疫吸附试验(Elisa)显示受免鱼对重组蛋白产生了较好的免疫应答,免疫剂量为3μg/g和5μg/g时受免鱼血清抗体滴度可达1:128000。研究结果显示重组蛋白Sip具有较强的免疫原性和保护作用,Sip基因可作为罗非鱼链球菌基因工程亚单位疫苗候选基因。     

HFRS疫苗佐剂吸附前后加入保护剂对其免疫原性的影响

为提高肾综合征出血热(HFRS)双价纯化疫苗抗原的有效利用率,在保证疫苗免疫效果的前提下,合理地降低疫苗的成本,确定最佳疫苗配制方法和最合适的疫苗浓缩倍数。将抗原含量不同的出血热纯化疫苗原液及疫苗配制的两种主要成分———人血白蛋白和A l(OH)3佐剂按不同的配制顺序配制成4批纯化疫苗,分别抽样,测其上清液中抗原量并做效力试验。结果表明人血白蛋白和A l(OH)3佐剂加入的顺序不同,配制的4批纯化疫苗上清液抗原量也不同,效力试验结果显示其中和抗体阳转率(PRNT)也有很大差别。因此在纯化疫苗的配制过程中,人血白蛋白和A l(OH)3的加入顺序影响到佐剂A l(OH)3对疫苗抗原的吸附,也影响到疫苗的免疫效果;先加A l(OH)3再加人血白蛋白的疫苗免疫效果要好于先加人血白蛋白再加A l(OH)3的疫苗。     

埃博拉疫苗临床研究进展

2014年西非埃博拉疫情暴发后,多个埃博拉疫苗临床试验陆续开展。开展临床试验的埃博拉疫苗主要是病毒载体类疫苗,例如人腺病毒载体(Ad5和Ad26)、3型黑猩猩腺病毒载体(Ch Ad3)、水泡性口炎病毒载体(VSV)、痘病毒载体(MVA)。从免疫策略上来说,包括单次免疫与初免-加强两种免疫策略。基于Ad5、Ad26、Ch Ad3和MVA载体的埃博拉疫苗在Ⅰ、Ⅱ期临床试验中显示了良好的免疫原性,基于VSV载体的疫苗更是在Ⅲ期临床试验中显示了很好的保护性。     

不同年龄女性接种二价HPV疫苗(大肠杆菌)的免疫原性比较

正现已证实由大肠杆菌(E.coli)制备的二价HPV疫苗具有安全性和有效性。特异性抗体水平是评价疫苗接种效果的重要指标。作者研究比较了HPV16/18疫苗在不同年龄女性中的免疫原性。由三期临床试验和免疫桥接试验分析疫苗的免疫原性(PPS-I)。在第0个月和最后一剂免疫后1个月后(第7个月)收集血清样品,     

森林脑炎灭活疫苗和纯化疫苗及其不同免疫剂量的免疫效果研究

为了评价森林脑炎灭活疫苗的远期预防效果及森林脑炎纯化疫苗的人体免疫效果 ,并对 2种疫苗的安全性和免疫效果进行比较。 2种疫苗分别按要求进行免疫接种 ,观察局部反应和全身反应 ,并定期采集血清样本 ,分离血清用酶联免疫吸附法 (ELISA)和蚀斑减少试验法检测血清中和抗体效价。试验结果 :森林脑炎灭活疫苗局部反应发生率为 2 3.0 8% ,全身反应发生率为 15 .38% (16 /10 4 ) ,人群抗体在 2次接种后约 1/ 3人检出阳性 ,3次接种后约 1/ 2人检出阳性 ,多次免疫后 6 0 %检出阳性 ;森林脑炎纯化疫苗无 1例发生局部反应、全身反应 ,注射部位一…     

乙型肝炎卡介苗联合疫苗稳定性的研究

研究乙型肝炎卡介苗联合疫苗中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)组分的稳定性。将连续3批联合疫苗,分别放置于37、25、4℃三种温度条件下,并于1、2、3、6、12、18、24个月时间取样检测,采用ELISA方法检测HBsAg含量,研究不同条件下联合疫苗中HBsAg的变化和HBsAg组分的免疫原性。37、25℃条件下6个月,4℃条件下2a,HBsAg组份含量无明显变化,均在合格范围内。37℃放置1、6个月,4℃条件下放置2a的联合疫苗免疫豚鼠,HBsAg组分的免疫原性无明显变化。乙型肝炎卡介苗联合疫苗中HBsAg组分的稳定性良好,4℃条件下放置2a效力无明显下降。     

用两种不同的检测方法评估儿童接种MenACWY-CRM疫苗后的抗体持久性和增强反应

<正>四价脑膜炎球菌结合疫苗MenACWY-CRM已被证明对婴幼儿具有免疫原性和良好的耐受性。作者评估了1岁完善疫苗MenACWY-CRM接种后直至4年的抗体持久性,以及对60个月时加强一剂免疫的应答。临床3b期,进行开放式,多中心扩展试验(NCT01148017)。作者通过hSBA和rSBA评估了203名健康的60个月大的幼儿在婴儿期接种4剂MenACWY-CRM(ACWY-4组),或在12/13和15个月龄时接种2剂或在18个月龄时接     

广州市1992-2007年出生新生儿接种乙型肝炎疫苗免疫效果评估

为评估广州市新生儿乙型肝炎疫苗(HepB)接种纳入计划免疫管理后免疫效果。对1992-2007年出生并接种HepB的新生儿2877人,按1992-2001年和2002-2007年出生新生儿分为计划免疫管理前(Ⅰ组)、计划免疫管理后(Ⅱ组)2组,采血检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)。Ⅱ组HBsAg阳性率为0.48%比Ⅰ组的4.54%阳性率下降了80.65%,在统计学意义上有显著差异。抗-HBc阳性率也由36.07%下降为26.73%,Ⅱ组的抗-HBs阳性率为75.19%,高于I组水平。新生儿乙型肝炎疫苗纳入计划免疫管理后群体免疫效果良好,使用不同种类乙肝疫苗效果没有统计学差异。重组(酵母)乙型肝炎疫苗有较好的近期保护效果和免疫原性,与以前使用血源乙型肝炎疫苗效果相当。     

流行性感冒裂解疫苗临床免疫效果观察

兰州生物制品研究所研制的流行性感冒病毒裂解疫苗于2003年9月~12月在广西进行Ⅰ~Ⅲ临床试验,对疫苗的安全性和免疫原性进行考核评价。试验中随机选取852人(6月龄~67岁)接种试验疫苗,227人接种对照疫苗。6~36月龄的婴幼儿接种2针,每次0.25m l,间隔28天;成人接种0.5 m l。所有接种对象均未见红肿和硬结等局部反应;发生低热反应(37.1℃~37.5℃)率为3.5%,均于48小时内恢复正常。疫苗接种后易感人群的H I抗体总阳转率为100%,非易感人群的H I抗体几何平均效价增长7.1~16.8倍,抗体4倍增长率为73.1%~91.7%。证实该疫苗具有良好的安全性和免疫原性。     

CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响

为了研究CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗(简称乙肝疫苗)免疫效果的影响,以乙肝疫苗加Al(OH)3、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH)3与CpG3三种配伍方式,通过腹腔、皮下或肌内3种不同途径免疫Balb/c小鼠,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果.同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放6个月再免疫小鼠,观察CpG的稳定性.结果表明:①3种免疫途径中以肌内注射效果最好,这在使用CpG的实验组尤为明显,在该组肌内免疫的ED50比腹腔的低了10倍,而诱发的抗体滴度提高了3倍;②疫苗与CpG、Al(OH)3联合使用的免疫效果最好,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗+Al(OH)3提高4倍,比疫苗+CpG提高7倍;③疫苗+Al(OH)3免疫时,表现为IgG1抗体亚型占优势,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高,以IgG2a最显著;④疫苗与CpG混合后4℃保存半年,不影响其活性.     

犬瘟热弱毒疫苗对大熊猫的免疫效果评价

以国产犬用犬瘟热等六联弱毒苗接种33只不同性别、不同年龄的健康大熊猫,分别采集每只大熊猫免疫前以及免疫后2周、1个月、3个月、6个月、9个月、11个月的血清样品,采用细胞中和试验测定犬瘟热病毒(CDV)中和抗体效价,并对接种疫苗后的所有大熊猫个体进行连续1年的健康资料记录.结果表明,所有接种疫苗的大熊猫均未出现任何与疫苗相关的副反应,该疫苗接种对大熊猫是安全的;部分老年、成年和亚成年的大熊猫(13/33)在疫苗接种前已经存在CDV抗体(≥1:4);2只老年大熊猫在疫苗接种后仅产生低水平的CDV抗体(≤1:8),另外2只老年大熊猫在疫苗接种后未产生CDV抗体(＜1:4);部分成年大熊猫(9/15)在疫苗接种后未产生CDV抗体(＜1:4),仅部分成年大熊猫(6/15)在疫苗接种后产生低水平的CDV抗体(≤1:22);部分亚成年大熊猫(8/9)在疫苗接种后能够产生低水平的CDV抗体(≤1:22),少数亚成年大熊猫(1/9)在疫苗接种后未产生CDV抗体 (＜1:4);幼年大熊猫(5/5)疫苗接种后可产生CDV抗体,2周至1月内达到高峰,CDV抗体水平和持续时间都明显高于老年、成年和亚成年大熊猫(P＜0.05);少数幼年大熊猫(1/5)疫苗接种后CDV抗体达到1:127,但3个月后所有幼年大熊猫CDV抗体就陡然下降(≤1:16).由此表明,在现有的免疫剂量和程序下,犬用犬瘟热等六联弱毒疫苗难以有效刺激大熊猫产生CDV中和抗体.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制.本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3'UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3'UTR)、p5NX12(ORF5-7-3'UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆.经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3'UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p>0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28 d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失.而对照组攻毒后至少持续13 d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护.本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础.     

流行性出血热灭活疫苗人体试验的反应观察

由流行性出血热(EHF)病毒浙_(10)株感染沙鼠肾细胞,经0.05％β-丙内酯灭活研制成的EHF灭活疫苗,于4℃放置7个月后,对10名志愿者免疫三针(0天、7天、28天各注射1ml)。结果免疫者的局部和全身均无任何副反应。首针免疫后第28天,血清用反向被动血凝抑制试验(RPHIA)、ELISA和间接免疫荧光试验(IFA)检测EHF抗体,分别有9人、9人和8人阳转,第42天,血清用三种方法检测抗体均全部阳转。空斑减少中和试验(PRNT)于第28天有4人阳转,第42天有9人阳转。上述结果表明,此疫苗对人体有较好的的安全性和免疫原性。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究:疫苗的稳定性及佐剂和加强免疫对草鱼免疫应答的影响

CFRV 疫苗具有较好的稳定性。4℃保存8个月,其免疫保护力仍为83.6%,草鱼免疫后的血清中和抗体效价为119.2±8.8(2),与保存开始时相比,没有显著的差别。28℃保存8d,其免疫原性也基本上保持在原来的水平。CFRV 疫苗在此两温度下的免疫有效期分别为8个月和8d。不完全弗氏佐剂对 CFRV 疫苗有明显的增效作用;用 CFRV 疫苗对草鱼进行加强免疫,可明显地增强草鱼对该疫苗的免疫应答,由此证明草鱼具有免疫回忆反应。       

白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中表达纯化及性质研究

CRM197是一种白喉毒素突变体,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pET25b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,CRM197获得高效表达,达到菌体总蛋白的20%。目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后经DEAE阴离子交换、S-100分子筛纯化获得纯度高于95%的CRM197样品,用该蛋白样品免疫新西兰大白兔,免疫兔血清中检测到特异性抗体应答。急性毒性试验中,每只豚鼠皮下注射200μgCRM197纯化样品,未出现明显毒性反应症状,与之相比较,注射后48h内,20ng白喉毒素阳性对照组动物全部死亡。结果表明,利用本试验的表达策略,CRM197得到高效表达,并且具有良好的免疫原性和安全性,为其进一步生产及应用奠定基础。     

一种预防全球脊髓灰质炎新型疫苗接种程序的免疫原性:非盲随机对照试验

<正>根除小儿麻痹症需要一种新型的免疫接种程序,即3或4剂由Ⅰ型和Ⅲ型组成的双价口服脊髓灰质炎病毒疫苗(bO PV)和1剂脊髓灰质炎病毒灭活疫苗(IPV),但该程序目前没有可用的免疫原性数据,因此作者旨在评估这种疫苗接种程序的免疫原性。在印度的4个试验中心进行了一项非盲随机对照试验。在家长或法定代理人获得知情权并同意     

百日咳鲍特菌菌毛蛋白纯化方法的建立及免疫原性的初步评价

目的建立一种适合生产放大的百日咳鲍特菌菌毛蛋白(fimbriae, Fim)纯化新工艺,并对其免疫原性进行初步评价。方法百日咳黏附素(pertactin, PRN)流穿液经一步盐析和一步复合型阴离子Capto Adhere疏水层析流穿法进行纯化,以纯度和回收率为检测指标,对硫酸铵盐析质量体积比和疏水离子层析条件进行优化,进行连续3批生产验证工艺稳定性。检验精纯Fim蛋白毒性,将合格Fim蛋白与百日咳其他组分配伍成五组分无细胞百日咳疫苗(acellular component pertussis vaccine, acPV),免疫小鼠,评价免疫原性。结果成功建立了从PRN流穿液中纯化Fim蛋白的方法。该工艺制备的3批Fim蛋白纯度(95%)高,回收率均在60%以上,具有良好的重复性,且Fim蛋白符合特异性毒性试验要求。5μg Fim蛋白免疫小鼠后在7、28、35和42 d血清中的抗Fim抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)分别为10.6、97.7、102.9、192.6 IU/mL,与生理盐水组相比具有统计学差异(P0.05)。结论利用QbD理念建立了适合生产放大的百日咳鲍特菌菌毛蛋白纯化新工艺,且蛋白具有良好的免疫原性,未来有望作为组分百日咳疫苗的候选抗原。