大孔吸附树脂吸附链霉菌702抗真菌活性物质工艺

研究大孔吸附树脂吸附链霉菌702抗真菌活性物质的工艺条件。采用5种不同大孔吸附树脂吸附链霉菌702发酵液提取液中抗真菌活性物质,选择吸附效果较佳树脂进行吸附条件优化,以桔青霉为指示菌,纳他霉素为对照抗生素．采用“管碟法”测定抗真菌活性物质含量。结果发现,XAD18树脂吸附效果较好,获得优化吸附条件：上样液pH6,NaCl质量浓度10g/L,上样量22．63mg／g湿树脂,吸附流速2．5mL／min,水洗体积180mL,洗脱流速1．5mL／min,洗脱剂为体积分数10％、50％和90％的甲醇,洗脱方式为梯度洗脱。在确定的工艺条件下XAD18对链霉菌702抗真菌活性物质的吸附率可达90％,洗脱率可达75％,回收率可达80％。     

柴达木沙漠链霉菌S10T阿糖腺苷的大孔树脂分离工艺优化与结构鉴定

为了获得具有药用价值的活性天然产物,采用4种大孔吸附树脂对柴达木沙漠链霉菌(Streptomyces qaidemensis)S10^T发酵液进行静态吸附和解吸实验,优化分离工艺。结果显示,AB-8型树脂具有良好的吸附和解吸性能,该树脂对柴达木沙漠链霉菌S10^T发酵液中的活性天然产物吸附工艺为发酵液pH值9,吸附时间4 h,洗脱液70%甲醇溶液。经正向硅胶、反相硅胶和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20分离得到了一个化合物,¹H-NMR和¹³C-NMR结合高分辨质谱(LC-HR-MS)鉴定该化合物为阿糖腺苷(vidarabine),是一种具有抗病毒活性的核苷类抗生素,并简单探究了其在柴达木沙漠链霉菌中的生物合成过程。     

吸水链霉菌BS-112产生的抗真菌活性物质的分离纯化与结构鉴别

【目的】分离纯化吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)BS-112产生的抗真菌活性物质,究明各活性组分的结构,测定其对黄曲霉的抑制作用,为该菌株及其产生的抗真菌活性物质的应用提供依据。【方法】通过大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析及制备HPLC等方法,对该菌株产生的抗真菌活性物质进行分离纯化;利用质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)解析各活性组分的结构;采用微量液体稀释法测定各活性组分对黄曲霉的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。【结果】从BS-112菌株发酵液中分离获得4个抗真菌活性组分,利用波谱技术确定其结构分别为Tetrins A和B、Tetramycins A和B。96孔板法测得这4个化合物对黄曲霉的MIC分别为3.13μg/mL、12.56μg/mL、1.56μg/mL、6.25μg/mL,MFC分别为6.25μg/mL、25.0μg/mL、3.13μg/mL、12.56μg/mL。【结论】BS-112菌株产生的抗真菌活性物质由Tetrins A和B、Ttramycins A和B 4个化合物组成,它们对黄曲霉均具有良好的抑制作用。     

大孔树脂提取链霉菌4903菌株除草活性物质的研究

化感活性物质的提取方法是研究化感作用的重要步骤,对化感链霉菌4903的前期研究证明其具有抑菌及除草活性。本文选用了4种大孔吸附树脂(X-5, NKA-II, AB-8和HP-20)对化感链霉菌4903发酵液的除草活性物质进行提取。实验结果显示:树脂AB-8对链霉菌4903菌株发酵液除草活性成分具有较好的吸附性能和较易被解吸的特性,树脂AB-8对链霉菌4903菌株发酵液的静态吸附量约可达到树脂体积的7倍。用树脂2-3倍体积的80%乙醇溶液则可以把吸附的除草活性物质全部从树脂中解吸出来。AB-8适合用于链霉菌4903菌株发酵液除草活性物质的提取和纯化。     

大蝉虫草发酵液抗真菌活性成分的分离与结构鉴定

采用杯碟法对大蝉虫草摇瓶发酵液的乙酸乙酯萃取物进行了抗菌实验,并利用质谱导向的制备高效液相色谱对该乙酸乙酯萃取物中的活性组分进行了跟踪分离得到抗菌活性化合物,根据该化合物的理化性质和波谱数据鉴定其化学结构。结果发现大蝉虫草发酵液的乙酸乙酯萃取物对白色念珠菌有明显的抑制作用,确定白色念珠菌为研究大蝉虫草发酵液抗菌活性的最佳指示菌;从大蝉虫草发酵液中分离得到的抗真菌活性化合物为多壳球菌素。     

枯草芽孢杆菌BS-Z15代谢产物抗真菌活性及对小鼠给药的安全性评价

本文就枯草芽孢杆菌BS-Z15发酵液粗提抗真菌活性物质的抑真菌谱及对动物的安全性进行了研究。结果表明,除尖孢镰刀菌外,其对大丽轮枝菌、黄曲霉、白色念珠菌等几种有害真菌有拮抗作用,抗菌有效浓度为0. 10 mg/mL;用32. 67 mg/kg粗提活性物质灌胃处理小白鼠60天,未出现中毒症状,且死亡率下降;对小鼠脏器指数、心脏和肝脏组织特征无显著性影响,肝组织抗氧化酶活性显著提高,肝脏MDA含量显著下降。表明BS-Z15抗真菌粗提活性物质对哺乳动物安全无毒,可在动植物病害防治中开发利用。     

藤黄灰链霉菌-H103发酵液中抗真菌活性成分的分离纯化*

通过大孔树脂吸附等方法对藤黄灰链霉菌H103发酵液中的抗真菌活性成分进行了分离纯化,得到了纯度较高的活性物质的结晶,并且建立了通过大孔树脂吸附-结晶的分离纯化路线以及反相高压液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)的检测方法,为进一步的理化性状研究打下了一个良好的基础。实验表明,最佳吸附树脂为X-5树脂,洗脱剂为50%乙醇,HPLC条件为:反相色谱柱Agilent 20RBA×310SB-C18(150mm×4.6mm I.d,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,0~4.0m in,V(     

杀线虫芽孢杆菌发酵条件优化及大孔树脂筛选

芽孢杆菌 SMrs28分离自草原毒草瑞香狼毒根际土壤,其代谢产物有明显的线虫触杀活性。为了确定该菌株的最优发酵条件及初步纯化活性成分的树脂类型,采用单因素试验对发酵条件进行优化,通过静态吸附试验对大孔树脂类型进行筛选。结果表明: SMrs28菌株的最优发酵条件为:以葡萄糖和酵母粉作为最佳碳源和氮源,发酵时间48 h,接种量10%,温度28 ℃,转速180 r·min^-1,150 mL的三角瓶装液量30 mL,初始pH 7.2。静态吸附试验表明,大孔吸附树脂D101对发酵液中活性成分的吸附和解吸效果显著优于XAD-4、HP20和AB-8,其解吸液的杀线虫活性明显提高。发酵条件的优化和大孔吸附树脂的筛选,明显提高了发酵液的杀线虫活性,为进一步分离纯化该菌株的活性成分奠定了基础,为微生物杀线虫剂的开发和应用提供了理论依据。     

和厚朴酚对根管内白色念珠菌生物膜作用的体外研究

目的 通过观察和厚朴酚对体外白色念珠菌生物膜形成中的作用,探讨其在口腔微生态中变化的意义.方法 采用XTT减低法评价和厚朴酚对白色念珠菌的生物膜及黏附性的影响;利用激光共聚焦扫描显微镜和死菌活菌荧光染色技术相结合,对常态及药物作用下白色念珠菌生物膜厚度及活性进行观察.结果 与阴性对照组相比,15.63、31.25及62.5μg/mL的和厚朴酚对白色念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;2 000 ～ 15.63 μg/mL的和厚朴酚对白色念珠菌生物膜的抑菌率分别为90.13％ ～24.21％;24 h时常态生物膜结构中大部分是活菌,有少量死菌存在,生物膜厚度为(75.15 ±6.57) μm.Image-Pro Plus 6.0软件分析显示,62.5μg/mL的和厚朴酚对24h生物膜作用后活菌百分比为(31.4±0.09)％,生物膜厚度为(33.14 ±6.66) μm,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).与制霉菌素相比,其抑菌活性相对较弱,但对生物膜厚度影响强于制霉菌素.结论 和厚朴酚对体外白色念珠菌生物膜有抑制作用.     

藤黄灰链霉菌-H103发酵液中抗真菌活性成分的分离纯化

通过大孔树脂吸附等方法对藤黄灰链霉菌H103发酵液中的抗真菌活性成分进行了分离纯化,得到了纯度较高的活性物质的结晶,并且建立了通过大孔树脂吸附-结晶的分离纯化路线以及反相高压液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)的检测方法,为进一步的理化性状研究打下了一个良好的基础。实验表明,最佳吸附树脂为X-5树脂,洗脱剂为50%乙醇,HPLC条件为:反相色谱柱Agilent 20RBA×310SB-C18(150mm×4.6mm i.d,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,0~4.0m in,V(A):V(B)=20∶80,4.0~9.5m in,V(A)∶V(B)=45∶55,此后V(A):V(B)=80∶20,流动相流速:0.8mL/m in,柱温:30℃,ELSD条件:漂移管温度115℃,载气流速(空气)2.3L/m in。     

小单孢菌FIM060152中抗肿瘤活性成分的提取分离纯化

本文是探讨分离和提取纯化小单孢菌FIM060152发酵液中的抗肿瘤抗生素的方法。实验采用HZ816大孔吸附树脂柱层析、萃取、硅胶柱层析、半制备色谱等方法对菌株FIM060152的发酵液中次级代谢产物进行提取分离纯化,获得化合物FIM060152-C1。理化性质和UV、MS以及NMR波谱分析结果表明化合物FIM060152-C1为Calicheamicinγ_1~I。化合物FIM060152-C1的抗肿瘤活性通过DNA断裂法进行检测,其断裂质粒pBR的最低浓度约为0.20μg/mL。     

家蝇抗菌肽AMP-17对白色念珠菌菌丝的抑制作用

【背景】AMP-17是从微生物诱导的家蝇转录组数据库筛选到的一条特异性高表达基因,采用原核表达体系获得其重组蛋白并证实了具有显著的抗菌效果,特别是对白色念珠菌具有较强的抗菌活性。【目的】研究抗菌肽AMP-17对白色念珠菌菌丝的抑制作用。【方法】采用微量液体稀释法测定AMP-17对11株白色念珠菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);根据对AMP-17的敏感程度选取3株绘制生长曲线;通过光学显微镜观察并计数经AMP-17作用后白色念珠菌芽生孢子生成率及芽管形成率;倒置荧光显微镜观察白色念珠菌酵母相向菌丝相转化及以菌丝相为起点AMP-17促进菌丝相转化为酵母相的情况。【结果】AMP-17对支气管肺泡灌洗液分离株16105的MIC为10μg/mL,对粪便分离株16214的MIC为40μg/mL,对其余9株白色念珠菌的MIC均为20μg/mL;白色念珠菌经不同浓度的AMP-17作用后,各时间点的芽生孢子生成率均显著低于对照组,尤其是40μg/mL的AMP-17组,芽生孢子生成率仅15%,显著低于阳性药物氟康唑;各实验组芽管形成率显著低于对照组,且芽管形成缓慢,培养6 h后芽管形成率仅为6%,形成的芽管长度较短,仅为菌体的1-2倍。镜下观察低浓度的AMP-17即可以完全抑制白色念珠菌菌丝的生长,并且对已经形成的菌丝有一定的生长抑制作用,高浓度的AMP-17则可使已形成的部分菌丝向酵母相转化。【结论】家蝇抗菌肽AMP-17可抑制白色念珠菌菌丝生长。     

华南十大功劳提取物抑菌活性初步研究

以超声提取和索氏提取方法,比较华南十大功劳叶和茎提取物经不同溶剂和不同极性萃取物萃取的抑菌活性大小。结果表明,叶和茎均含有抑菌活性物质,而叶的抑菌效果更强;索氏提取物与超声提取抑菌效果差异不大;华南十大功劳提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、藤黄球菌、白色念珠菌的最低抑菌浓度分别为0.6 g/mL、1.0 g/mL、0.8 g/mL、1.0 g/mL、2.0 g/mL;其最小杀菌浓度均为2.0 g/mL,但其对黑曲霉没有抑制作用;不同溶剂提取物中,无水甲醇溶液提取物具有最佳抑菌效果。提取物易溶解于极性萃取物。5种敏感菌对华南十大功劳提取物的敏感性由强到弱依次为：金黄色葡萄球菌菌＞枯草杆菌＞藤黄球菌＞大肠杆菌＞白色念珠菌。     

舍他康唑对常见临床分离念珠菌属菌株的体外抗菌活性研究

目的了解舍他康唑对常见临床分离念珠菌属菌株的体外抗菌活性。方法参照美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)制定的M27-A3方案测定舍他康唑对112株念珠菌的MIC值。结果舍他康唑对112株念珠菌在24h的MIC GM为0.18μg/mL,MIC范围为≤0.03~16μg/mL,MIC50和MIC90分别为0.125μg/mL、1μg/mL。对念珠菌属各菌种的MIC GM从低到高依次为白念珠菌0.08μg/mL,光滑念珠菌0.158μg/mL,近平滑念珠菌0.318μg/mL,热带念珠菌为0.425μg/mL,克柔念珠菌为1.414μg/mL。结论舍他康唑对常见临床分离念珠菌属菌株均有较好的体外抗菌活性。     

大孔树脂吸附分离烟草绿原酸的研究

通过比较8种大孔吸附树脂对烟草绿原酸的吸附分离性能,筛选出适合分离烟草绿原酸的树脂,并对其动态吸附特性进行研究.结果表明,XDA-1树脂对烟草绿原酸不仅吸附量大,而且解吸率高,适合烟草绿原酸的分离富集.该树脂吸附分离烟草绿原酸的工艺参数为:上柱液浓度3.5 mg/mL,pH 3.0,流速3倍柱床体积/h;以6倍柱床体积的40%乙醇进行洗脱,解吸附效果最佳,绿原酸总回收率为80.06%,初步吸附分离得到的产品中绿原酸含量为39.20 g/100 g.     

解淀粉芽孢杆菌BA-26抗菌物质分离及对灰葡萄孢抑菌作用研究

分析解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA-26发酵液中抑菌物质存在情况,明确活性物质的抑菌效果,初步探索其抗植物病原真菌的作用机制。通过硫酸铵沉淀、大孔树脂吸附及反相高效液相色谱法(RP-HPLC),从菌株BA-26的发酵液中分离纯化抗菌物质;采用平板对峙法检测抗菌物质抑菌活性;用二倍稀释法测定各活性组分的最小抑菌浓度(MIC),并研究其对菌丝和孢子萌发的影响。从菌株BA-26发酵液中获得抗菌粗提物抑菌谱广,对立枯丝核菌等多种植物病原真菌有强抑制作用;分离纯化得到11个具有抑制真菌作用的活性组分;其中A6-19和A6-20组分对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌活性最强,最小抑菌浓度为7.81μg/mL;菌株BA-26产生的抗真菌活性物质能使灰葡萄孢菌丝生长受阻、膨大变粗、细胞膜破坏并能抑制其孢子萌发。明确了解淀粉芽孢杆菌BA-26菌株产抗菌物质情况,初步探究其抑菌作用机制,为抗菌物质在防治病原真菌等方面的应用奠定基础。     

垃圾堆积点土壤中广谱拮抗菌株的分离鉴定及抑菌特性

[目的]从积年垃圾堆积点土壤中筛选具有高效抑菌能力的广谱拮抗菌株并研究其抑菌特性,寻找乡镇垃圾堆积点污染治理的新思路。[方法]采用平板稀释法和管碟法从乡镇积年垃圾堆积点的土壤中分离拮抗真菌,并通过形态观察、生理生化特性及分子生物学鉴定分析对拮抗菌株进行鉴定。通过测定抑菌活性物质的极性,选择合适的有机试剂对拮抗真菌的发酵菌体甲醇浸提物及发酵液进行萃取,并利用TLC-Bioautography法对发酵液及发酵菌体中的抑菌活性组分进行分析。使用23种指示菌测定拮抗真菌DAZ-2的发酵菌体乙酸乙酯粗提物的抑菌广谱,测定粗提物在高温、酸碱、紫外和自然光条件下抑菌能力,以及对大肠杆菌和白色念珠球菌的最小抑菌浓度。[结果]分离得到一株传代稳定的广谱拮抗真菌DAZ-2,经过形态观察、生理生化特性测定及ITS序列分析,菌株鉴定为Aspergillus fumigatus。通过极性测定,选择乙酸乙酯对烟曲霉DAZ-2发酵菌体甲醇浸提物及发酵液进行萃取,TLC-Bioautography法分析表明两者中的抑菌活性物质不是同一组分,且存在多组分物质共同作用产生抑菌效果的可能性;菌体浸提物乙酸乙酯萃取部分(200μg/mL)对11种指示菌具有抑菌效果,对大肠杆菌和白色念珠球菌的MIC为7.50μg/mL和15μg/mL,且对高温、酸碱、紫外、自然光照都具有较强的稳定性。[结论]分离得到一株高效抑菌且传代稳定的广谱拮抗菌株烟曲霉DAZ-2,有希望为微生物药物的开发和乡镇垃圾堆积点污染治理提供科学依据。     

中国被毛孢发酵液的活性成分分析及清除自由基和抗白色假丝酵母活性的研究

测定处于不同生长期的中国被毛孢Hirsutella sinensis菌株RCEF0273胞外多糖含量、发酵液中5种核苷代谢量和氨基酸含量,并对其菌株次生代谢产物清除自由基活性和抑菌效果进行了测定分析,发现:中国被毛孢胞外多糖含量最高可达到1.9480g/L,发酵液中尿苷、鸟苷、肌苷、胸腺嘧啶核苷和腺苷5种核苷含量最高分别为10.4132mg/g、12.1929mg/g、2.2698mg/g、1.1000mg/g和1.8181mg/g,其菌株发酵液冻干粉中氨基酸总量为3.2560mg/g,活性测定结果显示中国被毛孢发酵液的正丁醇相有很强的清除自由基活性和抑菌活性。在10mg/mL的测试浓度下,37℃孵育15min后其自由基清除率可达93.25%,在2mg/mL的测试浓度下,其抗白色假丝酵母Candida albicans的抑菌圈直径达到21.42mm。     

Purification of cordycepin from fermentation broth of Cordyceps militaris with macroporous resin

通过比较10种不同大孔树脂吸附蛹虫草深层发酵液中虫草素的性能,筛选出合适的大孔树脂H103,并对大孔树脂H103的吸附和解吸条件进行了考察.实验结果表明,上样吸附前调节pH值为9,上样浓度为0.2 mg·mL-1,吸附流速为2 BV h-1时,大孔树脂H103对蛹虫草深层发酵液中的虫草素有良好的吸附性能;解吸时先用去离子水洗去部分杂质,再用40％的乙醇对虫草素进行洗脱,可以得到较好的效果.     

盐酸小檗碱对白色念珠菌菌态转换的影响研究

为探讨盐酸小檗碱对白色念珠菌酵母相向菌丝相转换的抑制作用和分子机制,采用微量稀释法测定盐酸小檗碱抑制白色念珠菌生长的MIC值,倒置荧光显微镜观察菌丝动态形成过程;hochest染色法观察不同浓度盐酸小檗碱对菌丝形成的影响;RT-PCR检测在不同浓度盐酸小檗碱作用下白色念珠菌菌丝形成关键基因EFG1、HWP1、ECE1、ALS1表达水平的变化。结果显示,盐酸小檗碱对白色念珠菌的MIC值为32μg/mL,同时白色念珠菌在4 h芽管形成明显,8 h转化为菌丝;hochest染色结果显示:128和32μg/mL的盐酸小檗碱可以通过抑制菌丝的形成以及降低细胞密度,从而达到抑制白色念珠菌发生菌态转换的目的,并且128μg/mL盐酸小檗碱的抑制作用明显优于32μg/mL盐酸小檗碱和4μg/mL氟康唑,而8μg/mL盐酸小檗碱抑制作用不明显;RT-PCR结果表明,128μg/mL盐酸小檗碱可以抑制白色念珠菌4 h干预组菌丝形成关键基因HWP1和ECE1的表达、6 h干预组HWP1、ECE1和ALS1的表达,差异有统计学意义(P0.05);32μg/mL盐酸小檗碱可以抑制白色念珠菌4 h干预组菌丝形成关键基因EFG1和ALS1的表达,6 h干预组EFG1、HWP1和ALS1的表达,差异具有统计学意义(P0.05),但8μg/mL盐酸小檗碱无明显抑制作用。结果表明,盐酸小檗碱可以明显抑制白色念珠菌的菌态转换,其作用机制可能与菌丝形成关键基因EFG1、HWP1、ECE1、ALS1的表达下调相关。