灵芝提取物β-1,3-葡聚糖含量测定及多糖成分分析

采用酶法试剂盒检测法和苯胺蓝荧光检测法对不同结构多糖中β-葡聚糖含量进行测定,结果表明,两种方法对高纯度β-1,3/1,6-葡聚糖的含量检测均较为准确,但含有葡萄糖的杂多糖和多分支连接的β-葡聚糖均会对酶法试剂盒检测产生干扰,苯胺蓝荧光法检测β-1,3-葡聚糖专一性较好。通过比较不同灵芝提取物中β-1,3-葡聚糖的含量和得率可知,热水提取物和KOH提取物中β-1,3-葡聚糖的含量较高,分别为20.52%和45.86%,β-1,3-葡聚糖得率分别为0.27%和1.27%,占β-1,3-葡聚糖总提取得率的88%。HPSEC分析结果显示不同提取物中多糖的分子量分布不同,热水提取物中主要包含2个组分,分子量分别为2.835×10~6Da和9.587×10~4Da,KOH提取物中主要包含分子量分布在1×10~5–1×10~6Da范围内的3个组分。各提取物中多糖的单糖组成均以葡萄糖为主,水提多糖中含有少量半乳糖,酸碱提取多糖中含有少量木糖和甘露糖。本研究结果显示,分步提取中沸水和KOH碱溶液提取β-1,3-葡聚糖效率较高。     

猴头菌水溶性多糖的分离纯化与结构表征

从猴头菌子实体中分离得到一种新型的水溶性杂多糖HEPF2,分子量大小为1.66′104Da,该多糖由岩藻糖、半乳糖和葡萄糖以1.00:3.69:5.42比例构成,同时也含有微量的3-O-甲基鼠李糖。进一步利用傅立叶变换红外光谱法、糖组成分析、甲基化分析、部分酸水解法和核磁共振法等方法进行结构鉴定,检测结果表明,该杂多糖中包含1→4、1→6结合的葡萄糖和1→6结合的半乳糖残基,连接于主链的侧链残基,包括岩藻糖残基、少数的端基葡萄糖和半乳糖残基。核磁共振法检测结果还表明,1→4结合葡萄糖为β构型,(1→6)结合半乳糖、(1→2,6)结合半乳糖和端基葡萄糖均为α构型。     

雪灵芝多糖的分离纯化及免疫活性评价

为分离纯化雪灵芝(Arenaria kansuensis)多糖,并对纯化组分进行分子量测定、单糖组分分析及免疫活性评价。实验采用水提醇沉法提取雪灵芝粗多糖(Arenaria kansuensis crude polysaccharide, AKCP);以DEAE-52纤维素柱对AKCP进行分离纯化,获得5个雪灵芝多糖组分AKP-1～AKP-5,进一步采用葡聚糖凝胶G-75柱对AKP-2进行分离纯化获得AKP-2a多糖组分。苯酚-硫酸法测定AKCP、AKP-2及AKP-2a的总糖含量分别为52%、70%和79%;凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射(GPC-MALS)法检测AKP-2a的重均分子量Mw为2.07×10~5Da、数均分子量Mn为9.838×10~4Da;HPLC法检测AKP-2a是由半乳糖醛酸、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖10种单糖组成,其摩尔比为1∶0.25∶0.01∶0.20∶0.11∶0.25∶0.61∶0.07∶0.21∶0.12;以MTT法检测体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖,AKCP、AKP-2及AKP-2a各浓度组SI水平,均明显高于对照组(P<0.05)。经NO释放实验及IFN-γELISA检测,AKP-2a各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中二者的水平,较对照组呈浓度依赖性增高(P<0.01)。综上结果,本研究通过分离纯化,获得了总糖含量较高的雪灵芝多糖AKP-2a组分,初步确定其分子量范围及单糖组成,并证实其具有激活淋巴细胞增殖、促进巨噬细胞功能的生物活性。     

红托竹荪菌托多糖提取工艺及抗氧化降血糖活性

为利用红托竹荪菌托,采用酶解法提取菌托多糖,优化多糖提取工艺,并测定多糖分子量、单糖组成、抗氧化及降血糖活性。结果表明,最佳酶解法提取工艺为纤维素酶2.5%、果胶酶0.4%、木瓜蛋白酶1.5%,50 ℃酶解1 h,料液比1:60、提取温度80 ℃、时间3 h,该条件下多糖提取率达15.37%,比热水浸提法提高39.60%。酶解法多糖分子量为3 344 Da (Mn)、522 208 Da (Mw)、2 929 Da (Mp),主要由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖和岩藻糖等组成,葡萄糖占最高,达48.82%。菌托多糖为2.0 mg/mL时,DPPH·清除率为93.83%,Fe³⁺还原能力为0.140 7,α-葡萄糖苷酶活性抑制率为54.62%、α-淀粉酶活性抑制率为56.45%,与热水浸提法相比差异极显著或显著。酶解法提取红托竹荪菌托多糖,提取率较高,具有较高的抗氧化、降血糖活性,具有推广应用价值。     

乌梅丸水提液中多糖理化性质分析及预防结肠炎的作用

目的:考察乌梅丸水提液中多糖含量,建立HPLC法分析乌梅丸多糖分子量及单糖组成方法,观察其对右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)所致小鼠溃疡性结肠炎(UC)的预防作用,为乌梅丸临床用药及药理活性成分的研究提供依据。方法:采用水提醇沉法提取多糖;硫酸-苯酚法测定乌梅丸多糖含量;凝胶色谱法-龙智达分子量工作站测定多糖分子量;PMP柱前衍生化法HPLC分析单糖组成;DSS(3%)法建立UC小鼠模型。ICR小鼠50只随机分为5组:正常组,模型组,乌梅丸多糖2.5%,5%,10%剂量组,每组10只。造模前7天,在乌梅丸多糖治疗各组的小鼠饮水中添加乌梅丸多糖,一直给药维持至实验结束(第14天)。结果:葡萄糖在0~0.08 mg·m L-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.998);右旋葡聚糖酐标准品分子量在2500~2000000 Da范围内呈良好线性关系(r=0.998);乌梅丸水提液中多糖含量为40.3%,纯化的乌梅丸多糖糖含量为91.6%;分子量范围在171343~525009 Da之间,分布系数D=1.18;其多糖的单糖组成主要为甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和木糖组成,其相对含量比为1.8:1.0:19.3:32.8:4.2;乌梅丸多糖能降低结肠组织损伤程度。结论:多糖可能是乌梅丸汤剂中有效的活性成分,对小鼠UC有一定的防治作用,其理化性质分析方法简便快速,结果准确,重复性好,可作为乌梅丸多糖的质量控制方法。     

刺芹侧耳下脚料多糖的纯化与结构解析

采用超滤分离结合乙醇沉淀的方法,从刺芹侧耳下脚料水提物中纯化获得一多糖组分PEP30。苯酚硫酸法检测其糖含量约为94.2%,HPSEC-MALLS-RI系统分析其重均分子量(Mw)为3.74×106Da,多分散系数为1.03,为窄分布样品。通过红外光谱、单糖组成分析、甲基化GC-MS分析和核磁共振技术对多糖的结构特征进行了研究。结果表明,PEP30为一种β-D-葡聚糖,其主链以β-(1→3)-糖苷键连接,支链以β-(1→6)-糖苷键连接,支链与主链上糖残基的摩尔比为1:3。     

黄精糕减压提取与常压提取降血糖活性成分的比较研究

目的：考察减压与常压提取对黄精糕降血糖活性成分的影响,从而优选一种科学、合理、稳定、可行的提取方法。方法：以黄精糕中降血糖活性成分和指标成分总黄酮、总多糖、葡萄糖、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷与干浸膏得率为评价指标,先用常压回流提取L9（34）正交设计试验法优化醇浓度、加溶剂量、提取时间、提取温度等常压与减压共有的提取工艺参数,再采用最佳工艺参数进行减压提取,95%可信区间重叠法比较减压与常压提取各成分的差异。结果：常压提取最佳工艺参数为：先用醇常压提取1次,加12倍量70%的乙醇,60℃提取1 h,再用水提2次,加水量分别为药材量的12、10倍,水提温度90℃,时间分别为2、1.5 h,减压提取醇浓度、加溶剂量、提取温度、提取时间皆同常压提取,仅提取压力为70%醇提150 hpa,水提70 hpa,减压提取醇提液中总黄酮、鞣花酸含量高于常压提取（P＜0.05）,减压提取水提液中葡萄糖含量高于常压提取（P＜0.05）。结论：减压提取优于常压提取,减压提取最优工艺参数为70%醇提70 hpa,水提150 hpa,先用70%乙醇减压提取1次,加入12倍量70%的乙醇,60℃减压提取1 h,再用水减压提取2次,加水量分别为药材量的12、10倍,水提取温度90℃,时间分别为2、1.5 h。减压提取工艺科学、合理、稳定、可行,可为工业生产提供科学依据。     

不同提取方法对软枣猕猴桃多糖单糖组成及抗氧化活性的影响

采用高温水提工艺、低温水提工艺和微波辅助工艺从软枣猕猴桃中提取得到三种多糖,依次命名为AAP-1、AAP-2和AAP-3,对三种多糖的理化性质、单糖组成和抗氧化活性进行了研究.理化性质鉴定结果表明:三种多糖均不含酚羟基及还原糖,都含有一定量的糖醛酸和蛋白质,AAP-1含有淀粉,AAP-2和AAP-3不含淀粉;单糖组成结果表明:三种多糖均由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖7种单糖组成,其中,AAP-1葡萄糖的摩尔百分含量最高,为94.72％;AAP-2半乳糖和阿拉伯糖的摩尔百分含量较高,分别为24.75％、38.37％;AAP-3半乳糖醛酸的摩尔百分含量较高,为16.05％.抗氧化实验结果表明:AAP-1抗氧化活性最弱;AAP-3抗氧化活性最强,其清除DPPH自由基和羟基自由基的IC50分别为1.2、2.7 mg/mL.     

小刺猴头菌丝体多糖的结构研究

对小刺猴头过滤掉发酵液的发酵菌丝体,水提和碱提后获得的均一组分多糖HMP-w1.1和HMP-a1.1进行结构性质的研究。结果表明:HMP-w1.1是分子量为36.3 kD的α型吡喃糖,单糖组成为甘露糖(Man),葡萄糖(Glc),半乳糖(Gal),岩藻糖(Fuc);HMP-a1.1是分子量为42.8 kD的β型吡喃糖,单糖组成为甘露糖(Man),半乳糖醛酸(GalUA),葡萄糖(Glc),半乳糖(Gal),岩藻糖(Fuc)。综合高碘酸氧化和Smith降解的试验结果,推断HMP-w1.1的糖苷键构型可能为1→、1→4、1→4,6、1→6、1→2、1→2,6;HMP-a1.1的糖苷键构型可能为1→6、1→2、1→2,6。     

核桃楸皮多糖的分离纯化及抗癌活性研究（英文）北大核心CSCD

采用水提醇沉法提取核桃楸皮多糖(JMPS),并利用色谱法对其进一步纯化得到四种均一多糖JMPS-1、JMPS-2a、JMPS-2b和JMPS-3,其分子量分别为227.9 k Da、28.6 k Da、23.1 k Da和12.7 k Da。使用气相色谱法测定组分的单糖组成;利用红外光谱研究多糖组分的结构特征。体外抗肿瘤实验表明JMPS-1对SMMC-7721细胞具有较强抑制作用,流式细胞实验发现JMPS-1将SMMC-7721细胞的阻滞在G2/M期和S期。JMPS-1具有抗癌活性,可用作天然的抗癌物质。     

香水莲花多糖的提取分离及结构测定

依次采用水提醇沉及十六烷基三甲基溴胺盐(CTAB)沉淀法得到香水莲花酸性多糖(ADT),利用萄聚糖凝胶Sephadex G-150进行柱层析,得到了主要组分ADT-Ⅱ,高效凝胶色谱法测定其分子量为2.758×105Da;ADT-Ⅱ的酸水解产物经过薄层层析、高效液相色谱法、13CNMR分析,结果表明ADT-Ⅱ的单糖组成是以甲酯化的半乳糖醛酸为主,同时还含有少量的半乳糖和甘露糖。     

核桃楸皮多糖的分离纯化及抗癌活性研究（英文）

采用水提醇沉法提取核桃楸皮多糖(JMPS),并利用色谱法对其进一步纯化得到四种均一多糖JMPS-1、JMPS-2a、JMPS-2b和JMPS-3,其分子量分别为227.9 k Da、28.6 k Da、23.1 k Da和12.7 k Da。使用气相色谱法测定组分的单糖组成;利用红外光谱研究多糖组分的结构特征。体外抗肿瘤实验表明JMPS-1对SMMC-7721细胞具有较强抑制作用,流式细胞实验发现JMPS-1将SMMC-7721细胞的阻滞在G2/M期和S期。JMPS-1具有抗癌活性,可用作天然的抗癌物质。     

荞麦麸皮多糖的分离纯化及其外貌表征的分析

采用水提醇沉法对荞麦麸皮多糖(Buckwheat bran polysaccharide,BBP)进行提取,通过DEAE-52纤维素柱层析法和Sephadex G-200对其进行分离纯化,采用凝胶过滤法对多糖组分的分子量进行测定,采用扫描电镜对荞麦麸皮多糖及其分离纯化的多糖组分的外貌进行分析,用红外光谱对分离纯化的三个荞麦麸皮多糖组分的苷键构型进行分析。结果表明:DEAE-52纤维素和Sephadex G-200对荞麦麸皮粗多糖具有较好的分离纯化效果,得到了三个多糖组分(BBP-Ⅰ、BBP-Ⅱ和BBP-Ⅲ),其分子量分别为1.56×10~4Da、5.85×10~4Da、8.45×10~4Da。扫描电镜的结果表明,BBP其表面粗糙,凹凸不平,三个分离纯化的多糖组分形貌差异较大,分别以球状、片状、棒状为主。红外光谱扫描表明BBP-Ⅰ和BBP-Ⅲ为ɑ-糖苷键化合物,BBP-Ⅱ为β-糖苷键化合物。荞麦麸皮多糖组分外貌的差异性为其进一步的结构探究提供了重要依据。     

利用光谱技术确定银耳多糖中糖醛酸的连接位点与连接方式

为确定银耳酸性杂多糖结构中糖醛酸的连接位点,对银耳多糖进行了部分酸水解,并采用Sephadex LH-20凝胶柱纯化,得到银耳寡糖部分。对寡糖PMP衍生化后的MS~n分析表明,该寡糖均为酸性糖,主要含有银耳二糖和少量三糖,结合组成糖、甲基化和NMR结果分析,β-D-葡萄糖醛酸残基作为非还原末端以(1→2)-连接方式与甘露糖相连。     

鸡腿菇子实体多糖分离纯化工艺及结构研究

以多糖得率为指标,用正交试验对鸡腿菇子实体多糖的提取纯化工艺进行优化。用离子色谱和凝胶渗透色谱对粗多糖进行分离纯化,利用化学和光谱学方法对均一多糖CC30w-1进行结构分析。结果表明鸡腿菇子实体多糖最佳提取工艺为:提取次数为3次,提取时间为1.5h,提取温度为95℃,料液比为1∶12;最佳脱蛋白条件:样品-氯仿 正丁醇为3∶1(V/V),氯仿-正丁醇为3∶1(V/V),反应时间为20min,脱蛋白次数为7;结构分析的结果表明:CC30w-1分子量为1.94×104Da,糖组成为Fuc∶Gal=1∶4.02;岩藻糖以端基方式连接,半乳糖主要以1,6-和1,2,6-两种方式连接,3个主要的连接方式的摩尔比为1.15∶2.88∶1;主要由(1,6)-α-D-Galp糖残基构成主链,在O-2位被α-Fucp糖残基取代的5个单糖残基组成的结构重复单元。     

柿子多糖的分离纯化和结构分析

利用水提醇沉提取柿子多糖(WPP),经季铵盐沉淀法和凝胶柱层析对柿子粗多糖进行分离纯化,得到了水溶性的柿子粗多糖(WPP1)和盐溶性的柿子粗多糖(WPP2)两个柿子多糖组分。通过对理化性质、分子量和单糖组成测定结果分析,确定WPP1是含有α糖苷键的化合物,由L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖和D-半乳糖四种单糖组成,四种单糖的摩尔比为0.8831∶0.6862∶0.7022∶1,分子量为2.05×105Da。WPP2由L-阿拉伯糖和D-半乳糖两种单糖组成,其摩尔比为0.8466∶1,分子量为2.63×105Da。WPP1和WPP2均表现出吡喃糖的特征吸收。     

欧李多糖的制备、结构表征及免疫调节活性研究CSCD

欧李富含钙素,营养丰富,且具有免疫功能,研究欧李多糖的制备、结构及免疫调节活性,可为欧李深加工提供基础。本文以欧李为原料,采用水提醇沉法提取欧李多糖(Cerasus humilis polysaccharide,CHP),利用响应面法优化提取工艺。对提取的欧李多糖用DEAE-52纤维素层析柱、G-100葡聚糖凝胶柱纯化。用高效液相色谱、凝胶渗透色谱和红外光谱对欧李多糖结构表征,并测定欧李多糖的免疫调节活性。结果表明,欧李多糖最佳提取工艺条件为提取温度79℃,提取时间2 h,液料比16∶1(mL/g)。在此条件下,欧李干粉多糖得率为(32.18±0.08)%。纯化后欧李多糖主要有CHPP-1和CHPP-2两个组分,CHPP-1、CHPP-2中多糖含量分别为99.16%和99.33%。CHPP-1的单糖组成及摩尔占比为阿拉伯糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖=51.4∶20.29∶17.36,分子量为47.26 kDa。CHPP-2的单糖组成及摩尔占比为阿拉伯糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖=41.81∶28.24∶11.68,分子量为22.94 kDa。两个组分均为吡喃环型多糖。CHPP-2可显著增强巨噬细胞增殖活性,有效刺激细胞释放NO和TNF-α、IL-6及IFN-β。欧李多糖含量丰富,且具有较强的免疫调节活性。     

根瘤菌TISTR 386胞外酸性多糖的结构研究

根瘤菌TISTR 386胞外酸性多糖有二种九糖的重复单位构成。重复单位主要成份是D一葡萄糖,D一半乳糖和D一葡萄糖醛酸,它们的克分子比例分别是6：l：2和5：2：2。另外还含有一些丙酮酸和醋酸。甲基化分析表明,这个多糖由一个(1→3)键,一个(1→6)键,三个(1→4)键,一个(1→4,1→6)键连结的葡萄糖残基,一个(1→3)键连结的D-半乳糖残基,以及一个(1→3)键,一个(1→4)键连结的D-葡萄糖醛酸残基所组成。非还原末端糖残基是D葡萄糖或是带有丙酮酸的D一半乳糖,这也是二种九糖重复单位区别所在。     

白魔芋和花魔芋葡甘露聚糖研究

从白魔芋和花魔芋的块茎中分离纯化出两种魔芋葡甘露聚糖(Konjac Glucomannan,简称KGM),分别名为白魔芋葡甘露聚糖(aKGM)和花魔芋葡甘露聚糖(rKGM)。通过超离心、玻璃纤维纸电泳和凝胶过沪证明aKGM和rKGM都是均一的多糖。这两种多糖都由甘露糖(M)和葡萄糖(G)组成,其克分子比G/M:aKGM为1:1.69,rKGM为1:1.60,分子量前者为8.09×10~5,后者为7.37×10~5。酶水解实验和红外光谱分析说明aKGM和rKGM都是由甘露糖和葡萄糖以β-1,4-糖苷键连接的杂多糖;有O-乙酰基的特征吸收峰,说明在某些糖残基上可能有乙酰基团。     

西藏扁芒菊总多糖的理化性质及免疫增强活性

用水提醇沉法提取了西藏扁芒菊总多糖,并利用一系列物理化学方法对总多糖的组成进行表征,探究其对免疫功能的影响。结果表明:西藏扁芒菊总多糖由半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、核糖组成,多糖分子量为1110000。其多糖含量、糖醛酸含量、蛋白含量分别为63.6%、20.76%、11.24%。进一步研究表明西藏扁芒菊总多糖能够显著增强巨噬细胞NO分泌功能,具有免疫增强活性,为西藏扁芒菊多糖的开发利用提供了依据。