安子合剂对抗磷脂抗体阳性流产小鼠TLR2、TLR4及TNF-α的影响

探讨安子合剂对抗磷脂抗体阳性流产小鼠母胎界面TLR2、TLR4及炎症因子TNF-α的影响。以人β2GPⅠ为免疫原建立抗磷脂抗体阳性流产小鼠模型,计算胚胎吸收率,采用ELISA法检测小鼠外周血清抗β2GPⅠ抗体浓度、TNF-α含量,实时定量PCR测定胎盘组织TLR2、TLR4mRNA水平,免疫组织化学法检测胎盘组织TLR2、TLR4蛋白表达。结果显示,与空白组相比,模型组TLR2、TLR4mRNA水平显著升高,蛋白均呈弥漫性高表达;与模型组相比,安子合剂组能显著减少胚胎吸收率,降低抗β2GPⅠ抗体及TNF-α浓度,可同时下调模型小鼠TLR2及TLR4mRNA水平,使TLR2、TLR4蛋白呈中低表达。综上提示安子合剂抑制母胎界面TLR2、TLR4信号转导通路中的上游关键分子,减少炎症因子释放,这可能是其安胎作用机制之一。     

米非司酮对恒河猴母胎界面细胞凋亡和凋亡分子p53表达的影响

胎盘形成过程中发生活跃的细胞增殖、迁移和凋亡等活动。p53蛋白是参与调节细胞周期和凋亡过程的原癌基因。本实验用原位末端标记、蛋白印迹和免疫组织化学方法研究正常和米非司酮(RU486)处理后恒河猴母胎界面绒毛和蜕膜组织细胞凋亡及p53蛋白表达。在正常妊娠的恒河猴母胎界面,凋亡信号主要集中在合体滋养层和细胞柱内的一些滋养层细胞;p53蛋白主要定位于细胞滋养层。在母体蜕膜中,也在部分基质细胞中检测到细胞凋亡和p53蛋白表达。经过RU486处理2d后,胎盘绒毛和母体蜕膜中凋亡细胞数都显著增加,绒毛中增加的凋亡信号集中于细胞滋养层。同时,RU486处理也导致绒毛细胞滋养层和蜕膜基质细胞中p53表达明显增加。以上结果提示,在正常妊娠中,生理性的细胞凋亡和p53表达可能是控制细胞滋养层细胞增殖、保持胎盘组织动态平衡的一个重要机制;RU486终止早孕的可能途径之一是促进母胎界面细胞凋亡,推测p53参与这一过程。     

母-胎免疫耐受机制研究现状与发展趋势

母-胎免疫耐受作为免疫学原理的唯一例外,一直是生殖免疫学界备受关注的焦点问题。一个世纪以来,人们对于母-胎免疫耐受建立和维持的机制有了越来越深入的认识。妊娠早期胎儿绒毛外滋养细胞(EVT)侵入蜕膜组织,与母体蜕膜免疫细胞(DIC)及蜕膜基质细胞(DSC)直接接触,建立精细的母-胎交互对话。在总结既往研究成果的基础上,围绕母-胎界面关键的功能细胞,基于母-胎交互对话阐明母-胎免疫耐受的建立和维持机制。其中,对以滋养细胞为中心的母-胎界面固有免疫应答、母-胎界面适应性免疫应答及穿插于其中的协同刺激信号和趋化因子等方面进行概述,以解析人早孕母-胎免疫耐受与胎盘形成机制,为反复自然流产、子痫前期、胎儿宫内生长受限等疾患的防治提供新的思路。还将为移植免疫学、肿瘤免疫学的研究提供借鉴,因此,具有重要的理论意义和实际应用价值。     

激活素A调控人类滋养细胞生物学特性的分子机制及其与胎盘源性妊娠疾病关系的研究进展

在人类妊娠建立过程中,胚胎滋养外胚层细胞与子宫内膜直接接触,严密介导母胎对话,调控胚胎着床、植入宫腔,并逐渐形成维持妊娠期间物质交换、营养供应的胎盘组织。起源于滋养外胚层的一部分滋养细胞(trophoblast)侵袭、迁移进入母体蜕膜组织,重塑子宫螺旋小动脉,对于胎盘形成和母胎血液循环建立至关重要。滋养细胞侵袭、迁移、增殖、凋亡、内皮特性获得等生物学特性异常是胚胎种植失败、自然流产、妊娠滋养细胞疾病、子痫前期、胎儿生长受限等胎盘源性妊娠疾病的重要因素。激活素A(activin A)作为转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族中的一种分泌型蛋白,在妊娠期间母体循环及母胎界面表达丰富,在调控滋养细胞生物学特性以及妊娠的建立和维持中起重要作用。该文主要围绕激活素A调控人类滋养细胞生物学特性的分子机制及其在胎盘源性妊娠疾病中表达改变的研究进展进行综述。     

母胎界面自然杀伤细胞的研究进展

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是母胎界面丰度最高的免疫细胞,在妊娠早期的子宫蜕膜中大量积聚.研究表明母胎界面NK细胞具有独特表型和功能,在妊娠期免疫耐受调节、子宫内膜蜕膜化、滋养细胞侵袭、子宫螺旋动脉重塑、胎盘形成和胎儿生长、发育等多方面都发挥关键作用,但是其在妊娠中的功能及其作用机制还有待深入研究...     

妊娠组织中CD146和HGF的表达与稽留流产的相关性分析

目的:分析妊娠组织中CD146和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)的表达与稽留流产的相关性,探讨CD146、HGF在妊娠早期的潜在作用,为早期预防稽留流产的发生提供新的思路。方法:收集2019年7月至2019年12月于我院门诊行人工流产的病例,选取妊娠时间59周,年龄1835岁,近三个月未服用激素类药物,且无子宫肌瘤、子宫内膜病变、全身免疫性疾病、内分泌疾病的病例,分为稽留流产组40例;正常妊娠组50例。分析两组资料的差异性,通过免疫组化法检测两组蜕膜组织中CD146和HGF的表达情况并分析CD146和HGF的异常表达与稽留流产是否具有相关性。结果:CD146和HGF在稽留流产组和正常早孕组蜕膜组织中均有表达;稽留流产组蜕膜组织中CD146、HGF的表达均较正常妊娠组显著降低(P<0.05);CD146和HGF的表达呈正相关性(r>0,P<0.05);CD146和HGF的异常表达与稽留流产具有相关性。结论:稽留流产患者蜕膜组织中CD146和HGF的表达均下降,可能与稽留流产的发生有关,但CD146和HGF的表达下调参与稽留流产的发生机制尚不十分明确,需进一步探讨。妊娠组织中CD146和HGF的表达可能具有正相关性。CD146和HGF可能作为稽留流产在母胎界面方向研究的新的靶点,二者在妊娠过程中可能具有正相关性,尚需实验进一步验证。     

Bax/Bcl-2 mRNA在恒河猴药物流产胎盘中的表达

目的：通过检测重要的细胞凋亡调节因子Bax和Bcl-2的表达,探讨恒河猴胎盘细胞凋亡与药物流产的关系。方法：利用RT-PCR和原位杂交的方法检测恒河猴对照组和药物流产组(RU-486与AG诱导)胎盘中Bax和Bcl-2mRNA的表达。结果：Bax mRNA在流产胎盘中的表达量明显高于对照组胎盘。在胎盘绒毛滋养层细胞可见明显表达,基底层蜕膜细胞也有表达。Bcl-2mRNA在流产胎盘中的表达量明显低于对照组胎盘,表达部位与Bax类似。结论：RU-486和AG可能通过上调Bax mRNA和下调Bcl-2mRNA的表达,导致胎盘组织凋亡细胞的数量明显增加,从而影响胎盘的正常结构和功能,增加了流产的危险性。     

润肠通便合剂对便秘模型小鼠结肠MUC2、AQP3的影响

目的:研究润肠通便合剂对便秘模型小鼠的治疗作用及对结肠黏蛋白(MUC2)、水通道蛋白(AQP3)表达的影响。方法:将小鼠分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组及润肠通便合剂高、中、低剂量组(40、20、10 ml/kg)(n=10),通过复方地芬诺酯(30 mg/kg灌胃1次或20 mg/kg灌胃14 d)来复制便秘动物模型,观测润肠通便合剂给药3 d对便秘小鼠排便、小肠推进的影响,给药14 d对便秘小鼠结肠病理学、含水量、结肠灌洗液(CLAF)中Muc2以及结肠AQP3基因表达水平,观测润肠通便合剂给药3 d或14 d对便秘小鼠排便、小肠推进、结肠病理学、含水量、结肠灌洗液(CLAF)中Muc2以及结肠AQP3基因表达水平的影响。结果:与空白对照组比较,模型对照组小鼠给予30 mg/kg复方地芬诺酯1次后,小肠推进长度及推进率显著降低,首便时间延长,6 h排便粒数减少;给予20 mg/kg复方地芬诺酯14 d后,小鼠结肠出现明显病理学变化,CLAF中Muc2的含量降低,近端结肠AQP3的基因表达水平升高,结肠湿干重比值降低(P<0.01)。与模型对照组比较,给予润肠通便合剂能明...     

基质金属蛋白酶-9及金属蛋白酶组织抑制剂-1在孕鼠胎盘形成中期的表达模式

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)在孕鼠胎盘形成中期的表达模式。方法 HE染色观察孕鼠第9天至第14天(D9~D14)胎盘形态结构的变化,同时免疫组织化学法检测相应天数胎盘中MMP-9和TIMP-1的表达情况。结果 HE染色结果显示孕鼠D11时胎盘的3层结构开始形成,包括蜕膜区(Dec)、海绵滋养细胞层(Sp)和迷路区(Lab);随着妊娠天数的增加,Dec区域逐渐缩小,Sp和Lab区域增大;免疫组化表明,MMP-9和TIMP-1均表达于细胞浆和细胞核中,MMP-9强表达于D9和D10胎盘的外胎盘锥中,D10~D13的Dec、Sp和D11~D13的滋养巨细胞中。MMP-9在D11的Lab,D12的Dec和Lab,D13的Dec、Sp、Lab区域中的阳性细胞的积分光密度值与D14胎盘中对应值比较,差异有统计学意义(P0.05);TIMP-1在D9~D12的Dec区域中的阳性细胞的积分光密度值与D14胎盘中对应值比较,差异有统计学意义(P0.05);MMP-9/TIMP-1在D9、D11的Dec及D12的Lab区域中的比值与D14胎盘中对应值比较,差异有统计学意义(P0.05),在D10、D12的Dec和D13的Lab区域中的比值与D14胎盘中对应值比较,差异有高度统计学意义(P0.01)。结论 MMP-9和TIMP-1在孕鼠胎盘中的协同表达可能参与调节胎盘的形成。     

恒河猴胚胎浅表型植入机理的探讨

为揭示恒河猴胚胎浅表型植入的分子机理,实验采用免疫组化和原位杂交的方法研究了粘附侵润相关分子在妊娠恒河猴母胎界面的表达模式,发现层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在滋养层细胞柱的远端开始表达;整合素α1β1从柱的近端到远端表达逐渐升高,但在滋养层细胞鞘中上述分子的表达均降低;大量侵润母体血管的滋养层细胞高水平表达上述分子。此外,植入早期上皮斑和蜕膜基质细胞高表达MMPs组织抑制因子-2(TIMP-2)。结果提示,滋养层细胞鞘中α1β1、LN、MMP-2表达水平的降低及上皮斑、蜕膜和滋养层细胞中TIMP-2的高表达可能是导致浅表型植入形成的分子基础。     

SSTR-2、E-cad与不明原因的反复自然流产相关性研究

目的:研究生长抑素2型受体(SSTR2)、E-钙粘附素(E-cad)与不明原因的反复自然流产相关性。方法:选取2011年1月到2014年12月我院收治的不明原因反复自然流产患者60例(研究组),另选同期早期正常孕妇且准备流产者60例(对照组),应用免疫组化技术检测两组蜕膜组织中的SSTR2和E-cad表达,并进行比较。结果:研究组蜕膜组织中SSTR-2阳性细胞平均光密度显著高于对照组,而E-cad阳性细胞平均光密度显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05);研究组蜕膜组织中SSTR-2与E-cad水平呈负相关关系,对照组蜕膜组织中SSTR-2与E-cad水平呈正相关关系(P0.05)。结论:蜕膜组织中SSTR-2高表达与E-cad低表达可能与不明原因的反复自然流产有关。     

主要组织相容性抗原(MHC)在母胎界面免疫调控的研究进展

母胎界面生物学与多种细胞形成的复合物及维持妊娠所必需的调节因子有关。目前被公认的调节因子是胎盘中的主要组织相容性复合体蛋白(MHC)。MHC抗原在生殖过程中起到双重作用:首先,MHC在一些生物物种中可影响其杂交选择,对父母双方MHC抗原的匹配有一定的影响;其次MHC影响植入前期已经受精的卵子发育情况。MHC抗原表达对于胎儿逃避母体免疫排斥作用从而维持妊娠顺利进行是有利的。本文综述了MHC在母胎界面免疫调控的最新研究进展。     

难免流产蜕膜组织遗传印记基因PEG10的表达

采用半定量逆转录聚合酶反应(RT-PCR)、原位杂交、免疫印记(Western blot)及免疫组织化学技术检测了36例难免流产患者蜕膜组织PEG10 (Paternally expressed gene 10) mRNA及蛋白的表达与分布, 并以36例同期正常早孕妇女为对照, 研究遗传印记基因在难免流产蜕膜组织中的表达, 探讨其在自然流产中的作用。RT-PCR结果显示, PEG10在两组蜕膜组织中均有表达, 正常妊娠组平均表达水平为0.5994±0.049, 难免流产组为0.1783±0.037, 两组比较具有显著性差异(P<0.05)。原位杂交、免疫组化及Western blot分析也显示PEG10的表达规律与RT-PCR结果相吻合。研究结果表明, 遗传印记基因PEG10维持一定水平的表达对早期胚胎发育和正常妊娠的维持有重要意义, 而其表达下调可能是导致难免流产的原因之一。     

子宫自然杀伤细胞在人类早孕蜕膜血管 生成中的作用研究

子宫内膜蜕膜化过程伴随着活跃的血管生成是妊娠时新血管形成的关键步骤. 本研究旨在明确子宫自然杀伤细胞(uNK, CD56⁺细胞)在人类早期妊娠蜕膜组织中的分布, 并观察这类细胞是否表达血管内皮生长因子(VEGF-A)和促血管生成素2(Ang2). 免疫组化研究发现, uNK细胞(CD56⁺)大量存在于子宫蜕膜间质中, 主要集中在血管和腺体周围的间质组织, 蛋白水平的VEGF-A和Ang2表达于蜕膜间质细胞、微血管内皮细胞和腺上皮细胞中, uNK细胞在子宫蜕膜间质中的阳性率与平均微血管密度(MVD)、uNK细胞的阳性率与VEGF-A蛋白阳性表达率呈正相关关系, 而与Ang2无相关性. 另外, 在激光微切获得的单个uNK细胞进行巢式PCR的研究结果显示, 人类蜕膜的uNK细胞能够表达VEGF mRNA, 未测得Ang2 mRNA在单个uNK细胞表达. 表明人类早孕子宫蜕膜中的uNK细胞通过表达VEGF-A, 在蜕膜化过程和胎盘早期形成时的血管生成中发挥重要作用.     

子宫自然杀伤细胞在人类早孕蜕膜血管 生成中的作用研究

子宫内膜蜕膜化过程伴随着活跃的血管生成是妊娠时新血管形成的关键步骤. 本研究旨在明确子宫自然杀伤细胞(uNK, CD56⁺细胞)在人类早期妊娠蜕膜组织中的分布, 并观察这类细胞是否表达血管内皮生长因子(VEGF-A)和促血管生成素2(Ang2). 免疫组化研究发现, uNK细胞(CD56⁺)大量存在于子宫蜕膜间质中, 主要集中在血管和腺体周围的间质组织, 蛋白水平的VEGF-A和Ang2表达于蜕膜间质细胞、微血管内皮细胞和腺上皮细胞中, uNK细胞在子宫蜕膜间质中的阳性率与平均微血管密度(MVD)、uNK细胞的阳性率与VEGF-A蛋白阳性表达率呈正相关关系, 而与Ang2无相关性. 另外, 在激光微切获得的单个uNK细胞进行巢式PCR的研究结果显示, 人类蜕膜的uNK细胞能够表达VEGF mRNA, 未测得Ang2 mRNA在单个uNK细胞表达. 表明人类早孕子宫蜕膜中的uNK细胞通过表达VEGF-A, 在蜕膜化过程和胎盘早期形成时的血管生成中发挥重要作用.     

P57,P53,bcl-2,ki-67联合应用在葡萄胎诊断中的意义

目的:研究p57,P53,bcl-2,ki-67蛋白表达在完全性葡萄胎(CM)、部分性葡萄胎(PM)及水肿流产胎(HA)的诊断及鉴别诊断意义.方法:对21例完全性葡萄胎,28例部分性葡萄胎,18例水肿流产胎的标本进行4种抗体免疫组化分析,同时选取10例正常胎盘组织作为对照.结果:在CM中,p57表达不明显,而P53,bcl-2,Ki-67表达增强;在PM,HA及对照组中p57呈现高表达,P53,bcl-2,Ki-67则表达较弱.这四种抗体的表达在完全性葡萄胎与部分性葡萄胎、水肿流产胎及对照组之间的差异具有显著性(P＜0.01),而部分性葡萄胎与水肿流产胎、水肿流产胎与对照组之间差异不显著(P＞0.05).结论:p57和Ki-67表达对CM,PM和HA的鉴别诊断有重要作用,而P53,bcl-2表达对判断预后及预测恶变风险有意义.     

MMP-9蛋白的抗原表位分析及单克隆抗体制备

利用生物信息学方法分析并预测MMP-9蛋白的抗原表位区,命名为Δmmp9。通过对Δmmp9的核苷酸序列进行分析,设计引物扩增目的片段,构建重组表达载体pET28α(+)-Δmmp9,并将其转化到BL21(DE3)中,诱导表达重组蛋白Δmmp9。纯化重组蛋白后,免疫BALB/c小鼠,筛选获得7株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,检测抗体效价均达1:240 000。利用生物信息学筛选抗原表位区,成功制备单克隆抗体,通过抗体配对实验,证明其有良好特异性,并筛选出3株捕获抗体及对应标记抗体。     

骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3在子痫前期患者胎盘中的表达及意义

本研究旨在考察骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3在子痫前期患者胎盘中表达,及其在子痫前期发病机制中的可能作用。选取2017年3月至2018年9月期间在我院治疗的30例子痫前期产妇(子痫前期组)和30例正常妊娠产妇(对照组)的胎盘组织样本进行研究,采用免疫组化、Western blotting和RT-PCR检测了产妇胎盘组织中骨桥蛋白和整合素αvβ3的表达情况。免疫组化分析显示,对照组健康产妇和子痫前期产妇的胎盘组织中均可检测到骨桥蛋白和整合素αvβ3的阳性表达,子痫前期组的骨桥蛋白和整合素αvβ3的阳性率分别为64%和48%,而对照组分别为86%和68%,两组阳性率差异均具有统计学意义(p0.05)。Western blotting结果显示,子痫前期组的骨桥蛋白和整合素αvβ3蛋白相对表达量均显著低于对照组(0.73vs 1.54,0.81 vs 1.42,p0.05)。RT-PCR结果显示,子痫前期组的骨桥蛋白、αv和β3 mRNA相对表达量均显著低于对照组(0.62 vs 1.26,0.70 vs 1.18,0.76 vs 1.04,p0.05)。本研究证实骨桥蛋白及其受体整合素αvβ3在子痫前期患者胎盘组织中明显下调,可能通过影响滋养层细胞的侵袭性和母胎界面免疫来参与子痫前期的发生发展。     

槐耳清膏抑制非小细胞肺癌细胞增殖和血管新生的作用机制研究

目的:探讨槐耳清膏抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和血管新生的作用机制。方法:选择对数生长期的NSCLC细胞,经过传代培养成细胞株后采用随机法分成低剂量组、高剂量组以及空白对照组。其中低剂量组和高剂量组分别加入5μmol/L、10μmol/L的槐耳清膏进行处理,而空白对照组未加入槐耳清膏处理。利用细胞增殖毒性试验法(MTT)检测NSCLC细胞的存活率,并采用蛋白免疫印迹实验(WB)法检测表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、磷酸化EGFR(pEGFR)、磷酸化VEGFR2(pVEGFR2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶(pAKT)(pAKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)、磷酸化应激活化蛋白激酶1/2(pJNK1/2)、磷酸化-p38(pp38)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平。结果:低剂量组、高剂量组NSCLC细胞的存活率均显著低于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组相比,槐耳清膏处理NSCLC细胞后,低剂量组、高剂量组中pEGFR、pVEGFR2蛋白的相对表达水平均显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,槐耳清膏处理NSCLC细胞后,低剂量组、高剂量组中PI3K蛋白、pAKT、pERK1/2、pJNK1/2、pp38、Cyclin D1及PCNA的相对表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:基于EGFR/VEGFR2信号通路,槐耳清膏对NSCLC细胞增殖和血管新生有一定的抑制作用,可能成为一种针对NSCLC的有用靶向药物。     

父系HBeAg 阳性流产胚胎绒毛中HBV-DNA 的表达

目的:探讨在父系HBeAg阳性的流产胚胎中,乙型肝炎病毒在绒毛中的表达。方法:募集仅父系感染乙型肝炎病毒组合,即母HBsAg(-)且父HBsAg(+)流产胚胎。按以下组合将入选对象分为4组:组1为父HBeAg(+)母HBsAb(+);组2为父HBeAg(+)母HBsAb(-);组3为父HBeAg(-)母HBsAb(+);组4为父HBeAg(-)母HBsAb(-),采用酶联免疫吸附实验(ELISA)对胎儿父、母亲血清进行乙肝抗原、抗体检测,并使用荧光定量PCR法对胚胎绒毛进行HBV DNA检测。结果:父系感染乙型肝炎病毒的142例胚胎中,仅在父系HBeAg阳性组别(1、2组)84例胚胎中发现3例绒毛HBV-DNA升高,阳性率为3.57%。其中父HBeAg(+)母HBsAb(-)组合中2例,父HBeAg(+)母HBsAb(+)组合中1例。父系HBeAg均阳性,母系HBsAb阳性与阴性组间子代绒毛HBV-DNA升高率差异无显著性(P>0.05)。结论:HBeAg阳性父亲可能更容易导致乙肝父婴垂直传播。