地榆皂苷类成分对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制的保护作用研究

为了观察地榆皂苷类成分对骨髓抑制的保护作用,本文采用腹腔注射环磷酰胺致小鼠骨髓抑制模型。造模成功后,将骨髓抑制小鼠按体重随机分为:模型对照组、集落刺激因子组、地榆皂苷Ⅰ5、2.5、0.5 mg/kg三个剂量组,地榆皂苷Ⅱ5、2.5、0.5 mg/kg三个剂量组,地榆皂苷元5、2.5、0.5 mg/kg三个剂量组,另设正常对照组。连续灌胃7 d,每天一次,以外周血液白细胞数量、骨髓细胞DNA含量和CD34+的表达以及骨髓细胞O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白的表达为评价指标,研究地榆皂苷类成分对CTX所致骨髓抑制的治疗作用。结果显示地榆皂苷类成分可显著升高小鼠WBC(P0.05);显著升高小鼠骨髓DNA含量(P0.05);显著促进CD34+的表达(P0.05);显著促进MGMT蛋白的表达(P0.05)。通过本研究可以看出地榆皂苷类成分可显著拮抗CTX所致小鼠骨髓抑制。     

新疆野生及栽培一枝蒿多糖对树突状细胞免疫功能的影响

研究和比较新疆野生与栽培一枝蒿多糖对骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟和功能的影响。超声法制备野生及栽培一枝蒿粗多糖;Sevage法除蛋白;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;流式细胞术检测DCs的成熟;ELISA法检测IL-12和TNF-α的表达水平。结果显示,野生及栽培一枝蒿多糖含量分别为26.18%和22.14%,去除蛋白质后多糖含量分别为30.94%和27.06%;野生及栽培一枝蒿多糖均可以显著增强小鼠骨髓来源CD11c+DCs表面分子CD40,CD86及CD80的表达(P0.05);显著促进IL-12和TNF-α的表达(P0.05);显著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力;且相同剂量对DCs的免疫活性无显著性差异(P0.05);除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均无显著差异(P0.05)。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差异较小,并均可以促进小鼠骨髓来源DCs的成熟和功能,且差异不大。     

益气活血汤联合化疗灌注治疗中晚期膀胱癌的临床疗效

目的:探讨益气活血汤联合化疗灌注治疗中晚期膀胱癌的临床疗效及其对患者免疫功能及生活质量的影响。方法:选择2011年6月至2016年12月在我院进行手术治疗的中晚期膀胱癌患者86例,随机分为两组。对照组31例患者术后接受化疗灌注治疗,观察组55例患者在对照组基础上服用益气活血汤。比较两组患者治疗后的临床疗效、治疗前后CD4~+含量、CD4~+/CD8~+及NK细胞活性、生活质量评分的变化及治疗期间不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组的总缓解率显著高于对照组(P0.05);两组患者CD4~+含量及NK细胞活性均较治疗前显著升高(P0.05),CD8~+细胞含量均较治疗前显著降低(P0.05),且观察组患者的CD4~+数量、NK细胞活性、CD4~+/CD8~+比例均显著高于对照组(P0.05);两组患者的生活质量评分均较治疗前明显升高,且观察组的生活质量评分显著高于对照组(P0.05);观察组胃肠不适、骨髓抑制的发生率均显著低于对照组(P0.05),两组患者肝损伤、发热的发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:益气活血汤辅助灌注化疗可显著提高中晚期膀胱癌术后患者的临床疗效,改善患者的免疫功能及生活质量,并降低化疗所致不良反应的发生率。     

贞芪扶正胶囊对慢性苯中毒小鼠骨髓细胞的影响

为了观察贞芪扶正胶囊对慢性苯中毒(CBP)小鼠中骨髓细胞有丝分裂指数、骨髓造血干细胞表型Sca-1和CD34~+的影响,并探讨其造血调控作用的可能机制。本试验将70只8~12周龄健康雄性昆明种小鼠,按随机数字表法分为5组:对照组、模型组、贞芪扶正组、西药组、贞芪扶正联合西药组,每组14只(实际有效数量每组10只)。将小鼠置于人工模拟高苯浓度(苯浓度=2 000 mg/m~3)环境,复制慢性苯中毒模型。采用用全自动血细胞分析仪、Giemsa染色法、流式细胞仪分别检测贞芪扶正胶囊对苯中毒小鼠外周血、骨髓细胞有丝分裂指数、造血干细胞表型Sca-1和CD34~+的影响。结果表明贞芪扶正联合西药组能提高白细胞等含量;激活小鼠骨髓造血干细胞有丝分裂指数,使Sca-l和CD34~+抗原的表达升高,形成更为原始的造血干细胞,从而造血干细胞数量增加(p0.05),改善慢性苯中毒小鼠的外周血象。本研究表明贞芪扶正胶囊和西药联合使用效果明显,促进抗原表达明显改善中毒现象,安全有效,值得临床应用推广。     

新疆野生及栽培一枝蒿多糖对树突状细胞免疫功能的影响北大核心CSCD

研究和比较新疆野生与栽培一枝蒿多糖对骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟和功能的影响。超声法制备野生及栽培一枝蒿粗多糖;Sevage法除蛋白;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;流式细胞术检测DCs的成熟;ELISA法检测IL-12和TNF-α的表达水平。结果显示,野生及栽培一枝蒿多糖含量分别为26.18%和22.14%,去除蛋白质后多糖含量分别为30.94%和27.06%;野生及栽培一枝蒿多糖均可以显著增强小鼠骨髓来源CD11c+DCs表面分子CD40,CD86及CD80的表达(P<0.05);显著促进IL-12和TNF-α的表达(P<0.05);显著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力;且相同剂量对DCs的免疫活性无显著性差异(P>0.05);除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均无显著差异(P>0.05)。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差异较小,并均可以促进小鼠骨髓来源DCs的成熟和功能,且差异不大。     

地榆总皂苷对~(60)Co-γ射线所致骨髓抑制小鼠外周血象的保护作用及其机制

本文探讨地榆总皂苷(TSSO)对~(60)Co-γ射线所致骨髓抑制小鼠的药效及其分子机制。实验采用650 cGy~(60)Co-γ射线一次性全身照射诱导骨髓抑制小鼠模型,灌胃不同剂量TSSO(1、0.5、0.1 mg/kg),每天一次,共10d。分别于第4、7、10 d检测小鼠外周血WBC、RBC、HCT、PLT及PCT水平;次日测定肝、脾、胸腺指数,计数骨髓有核细胞数,并检测骨髓细胞中GM-CSF、IL-3、SCF及c-Kit mRNA表达。结果显示,TSSO能显著升高小鼠外周血WBC、RBC、HCT、PLT及PCT水平,提升小鼠骨髓有核细胞数目并提高骨髓细胞中GM-CSF、IL-3、SCF及c-Kit mRNA表达。提示TSSO对~(60)Co-γ射线所致骨髓抑制具有明显保护作用,其机制可能与提高GM-CSF、IL-3、SCF及c-Kit mRNA表达水平有关。     

水胺硫磷致小鼠骨髓细胞DNA损伤和氧化损伤

为探讨水胺硫磷对小鼠骨髓细胞的遗传毒性及其机制,以昆明种小鼠为受试动物,水胺硫磷按0.11、0.54、1.08、2.16 mg·kg-1剂量水平灌胃染毒2次,30 h后取骨髓细胞,采用慧星实验方法测定骨髓细胞DNA的损伤;采用Fenton反应法和黄嘌呤氧化酶法分别测定骨髓细胞的抑制羟自由基能力和抗超氧阴离子能力,同时对DNA断裂指标和这两种抑制氧自由基能力的活性进行回归分析。结果显示,各浓度组小鼠骨髓细胞尾距和Olive尾距均显著高于对照组(P0.05),且随水胺硫磷暴露浓度的增加而升高,呈明显的剂量-效应关系。0.11 mg·kg-1低浓度组小鼠骨髓细胞的抗超氧阴离子能力被显著诱导(P0.05),但抑制羟自由基能力未被显著诱导;0.54、1.08、2.16 mg·kg-1各浓度处理组,抗超氧阴离子和抑制羟自由基能力均被显著诱导(P0.01)。骨髓细胞尾距和Olive尾距均随着抑制羟自由基能力和抗超氧阴离子能力的升高而增加,且呈线性关系(P0.01)。上述结果表明,水胺硫磷具有较强的急性遗传毒性,其毒理作用机制可能是通过诱导小鼠骨髓细胞产生氧自由基从而造成对DNA氧化损伤。     

超强静磁场联合环磷酰胺对S180荷瘤小鼠抗肿瘤和相关生理指标的影响

实验探讨了超强静磁场(ultra strong static magnetic field,USMF)联合环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)连续处理,对S180荷瘤小鼠抗肿瘤、抗氧化、免疫及骨髓抑制等方面的影响。对S180肉瘤小鼠分组处理后,剥取肉瘤组织称重并进行病理检验。检测过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活力、总抗氧化能力,以及肝脏和肾脏中丙二醛的含量、脾脏和胸腺指数、脾脏淋巴细胞转化率、外周血中的白细胞数目和骨髓细胞的DNA含量。腹水瘤小鼠同样处理后正常饲养,记录生存时间。结果发现,USMF+CTX组的抑瘤率(72.5%)比CTX组(51.5%)提高了40.8%,生命延长率提高了1.5倍,抗氧化和免疫能力也有一定程度的增强。表明USMF结合CTX,可以协同性抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长,并减轻CTX对小鼠的副作用。     

联合使用低剂量环磷酰胺有效增强热休克蛋白gp96免疫佐剂功能

前期研究发现热休克蛋白gp96作为分子伴侣,能特异结合乙肝病毒(HBV)表位肽,并将结合的多肽交叉呈递给MHCⅠ类分子,从而激活病毒特异性CD8+ T细胞(CTL).在此基础上,研究BALB/c小鼠模型联合低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对热休克蛋白gp96免疫佐剂功能的影响.以gp96或其N端片段(N355)与H-2Kd限制的乙肝病毒核心蛋白表位HBcAg87-95作为佐剂联合低剂量CTX免疫BALB/c小鼠.联合使用低剂量CTX的试验组CD8+T细胞、IFN-γ+CD8+T细胞、乙肝抗原特异T细胞比例显著高于未使用CTX的对照组(P＜0.05),且联合使用CTX的试验组CD4+CD25+调节性T细胞(T Regulatory Cells ,Treg)比例显著低于单独使用gp96和N355试验组(P＜0.05),说明低剂量的CTX能特异性抑制Treg从而导致T细胞的增加.以上研究表明联合使用低剂量的环磷酰胺能有效增强gp96免疫佐剂功能,这为进一步优化gp96佐剂疫苗的使用提供了依据.     

化瘀通络中药对高糖刺激下足细胞裂孔膜蛋白的干预作用

通过化瘀通络中药对H-2Kb-ts A58条件性永生化小鼠足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP表达的干预作用,探讨化瘀通络中药降低糖尿病肾病蛋白尿、保护肾功能的可能作用机制。实验以体外培养小鼠足细胞为研究对象,将其分为正常糖组(CG)、高糖组(HG)、高糖加药组(HG+Z),通过免疫细胞化学(ICC)、蛋白质印迹法(Western-Blot)、实时荧光定量(Real-time PCR)方法检测不同时间点不同干预后各组podocin、CD2AP蛋白及基因的表达情况。结果显示干预足细胞48 h后,与CG组比较,其余两组podocin、CD2AP两种蛋白表达量均明显降低(P0.05,P0.01);与HG组比较,(HG+Z)组两种蛋白表达量均明显升高(P0.05)。与同时间点CG组比较,其余两组podocin、CD2AP mRNA表达均显著降低(P0.01);与同时间点HG组比较,(HG+Z)组48 h两种蛋白的基因表达量均明显升高(P0.01),24、72 h与同时间点HG组无明显差异(P0.05)。以上结果说明化瘀通络中药可以上调高糖刺激下足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的表达,其可能为化瘀通络中药减少糖尿病肾病蛋白尿、保护肾功能的作用机制之一。     

新疆栽培一枝蒿粗多糖对OVA抗体水平及T淋巴细胞亚群的影响

初步探讨新疆栽培一枝蒿未除蛋白的粗多糖(Un-deproteinization of cultivated Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,UCARCP)对模式抗原卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)免疫小鼠后抗体水平以及T淋巴细胞亚群的影响。将UCARCP配伍OVA皮下免疫小鼠,初免1次,加强1次,铝佐剂为阳性对照组,间接ELISA法检测小鼠血清中IgG及亚类IgG_1、IgG_(2a)的抗体水平;流式细胞术检测脾细胞中CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+T淋巴细胞亚群的含量。结果显示,UCARCP能显著提高小鼠血清中Ig G、IgG_1、IgG_(2a)的抗体水平(P0.05),且与铝佐剂组相比无显著性差异(P0.05);UCARCP能显著促进CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞亚群的含量(P0.05),与铝佐剂组相比没有显著差异(P0.05)。新疆栽培一枝蒿未除蛋白的粗多糖能显著促进模式抗原OVA免疫后小鼠的体液免疫水平和细胞免疫水平,与铝佐剂相当。     

髓细胞性白血病患儿PTEN蛋白表达及其与免疫表型的关系

目的:探讨髓细胞性白血病(AML)患儿PTEN蛋白表达及其与免疫表型的关系。方法:选择AML患儿143例,根据免疫表型的不同分为两组:免疫分型为LY+AML型59例,LY-AML84例。所有患儿都给予免疫表型分析,检测PTEN蛋白表达情况并进行相关性分析。结果:LY+AML患儿CD34+阳性、CD117+阳性比例显著高于LY-AML患儿(P 0.05),染色体核型异常比例显著低于LY-AML患儿(P 0.05)。LY+AML患儿的PTEN蛋白表达量为(65.33±2.34)%,阳性表达率为94.9%;而LY-AML分别为(20.11±4.11)%和13.1%,与LY+AML患儿对比差异都有统计学意义(P 0.05)。在AML患儿中,Spearman相关分析显示PTEN蛋白表达水平与免疫分型呈现显著相关性(r=0.653,P=0.000)。多因素logistic回归方法显示PTEN蛋白表达、CD34+阳性、CD117+阳性、染色体核型异常为影响AML患儿免疫表型的主要独立危险因素(OR=1.098、1.045、1.092、0.294,P 0.05)。结论:AML患儿骨髓单个核细胞的PTEN蛋白表达上调使得LY+AML型发生风险显著增加,可作为AML患儿病情判断与预后预测的参考指标之一。     

促性腺激素释放激素类似物缓解环磷酰胺导致卵巢损伤的机制研究

目的:通过动物实验和细胞实验初步探索促性腺激素释放激素类似物在环磷酰胺暴露下保护卵巢功能的机制。方法:构建乳腺癌荷瘤小鼠36只,随机分成Control组,CTX组和CG(CTX+GnRHa)组,药物干预后麻醉下剥离肿瘤和子宫卵巢并称重,计数卵巢原始卵泡和生长卵泡数目,提卵巢蛋白进行Western blot检测抗缪勒氏管激素(Anti-Müllerian hormone,AMH)蛋白表达量,提取卵巢RNA进行qRT-PCR实验检测mRNA水平,心尖取血检测血清AMH水平。卵巢颗粒细胞加药处理36小时后,收细胞蛋白进行Western blot检测AMH蛋白表达量,提细胞RNA进行qRT-PCR检测mRNA水平,ELISA法检测细胞培养基上清中AMH水平。结果:成瘤后第21天,CTX组和CG组小鼠肿瘤质量无统计学差异(P>0.05)且均小于Control组(P<0.05);CTX组子宫和卵巢的总重量均显著低于Control组和CG组(P<0.01),卵巢内原始卵泡数量均低于Control组和CG组(P<0.001),生长卵泡数量无统计学差异(P>0.05)。动物实验,Western blot结果提示,CTX组卵巢AMH蛋白含量显著高于Control组或CG组(P<0.05);由ELISA结果提示,CTX组血清AMH蛋白浓度显著低于CG组(P<0.01)。细胞实验,由Western blot可见,CTX组AMH蛋白含量显著高于Control组和CG组(P<0.05);由ELISA实验可见,CG 750组和CG1000组培养基上清的AMH蛋白浓度均高于对应CTX剂量组(P<0.01)。无论在动物实验还是细胞实验中,各组AMH的mRNA表达水平均无统计学差异(P>0.05)。结论:在CTX化疗的同时运用GnRHa,可以在不干扰化疗疗效的前提下,通过减少CTX所致细胞内AMH潴留程度,增加细胞外和血清中的AMH浓度从而发挥保护卵巢储备的功能。     

食物氧化蛋白对小鼠肠道菌群及氧化还原状态的影响

目的研究摄食不同方式氧化酪蛋白对小鼠肠道菌群和氧化还原状态的影响。方法分别以H2O2/Cu2+、HClO处理酪蛋白,丙二醛(MDA)处理酪蛋白、大豆蛋白。雄性KM小鼠分为6组:酪蛋白组,H2O2-Cu2+氧化酪蛋白组,HClO氧化酪蛋白组,MDA氧化酪蛋白组,大豆蛋白组和MDA氧化大豆蛋白组,饲喂10周。结果酪蛋白和大豆蛋白经氧化处理后羰基含量显著上升(P0.05),体外消化率下降。饲喂氧化蛋白饲粮的小鼠结肠内容物乳杆菌数量均显著低于对照组(P0.05);HClO和MDA氧化酪蛋白组大肠埃希菌、肠球菌数量显著高于对照组(P0.05),MDA氧化大豆蛋白组大肠埃希菌数量显著高于对照组(P0.05)。氧化蛋白处理引起小鼠结肠组织MDA上升,其中MDA氧化蛋白处理达显著水平(P0.05);结肠过氧化氢酶(CAT)活力上升,其中H2O2/Cu2+和MDA氧化蛋白组达显著水平(P0.05);H2O2/Cu2+氧化酪蛋白处理引起结肠GSH-Px显著升高(P0.05);氧化蛋白引起结肠总抗氧化能力(T-AOC)下降,其中H2O2/Cu2+、HClO氧化酪蛋白和MDA氧化大豆蛋白处理达显著水平(P0.05)。蛋白质体外消化率与结肠肠球菌呈负相关(R=-0.81,P=0.051);蛋白羰基含量与结肠乳杆菌呈显著负相关(R=-0.94,P0.01);大肠埃希菌(R=0.93,P0.01)和肠球菌(R=0.85,P0.05)分别与蛋白羰基含量呈正相关。结论氧化后蛋白消化率降低、羰基含量增高,导致肠道乳杆菌减少,大肠埃希菌和肠球菌上升;结肠黏膜脂质过氧化,氧化损伤程度与蛋白氧化处理方式有关。     

亚慢性地卓西平诱导的精神分裂样小鼠前额叶和海马脑区MIF蛋白表达的变化

目的:探讨亚慢性地卓西平(MK-801)诱导的精神分裂样小鼠模型中前额叶和海马脑区巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)蛋白表达的变化。方法:将24只7周龄小鼠随机分为对照组、MK-801组和MK-801+奥氮平(olanzapine,olz)组(n=8),三组小鼠分别接受0.9%生理盐水、MK-801(0.6 mg/kg)和MK-801(0.6 mg/kg)+奥氮平(2.5 mg/kg)给药,持续4周。小鼠行为学通过旷场试验、社交实验进行评价,免疫印迹法检测小鼠前额叶和海马组织中MIF蛋白的表达。结果:MK-801处理后,小鼠活动量增加,社交功能受损,且都能被抗精神分裂症药物奥氮平显著改善。MK-801组小鼠前额叶皮层中MIF蛋白表达与对照组比较无明显统计学差异(P0.05),而海马脑区中MIF蛋白表达较对照组明显升高(P0.05);MK-801+奥氮平组小鼠前额叶皮层中MIF蛋白表达较MK-801组无显著变化,而海马脑区中MIF蛋白表达较MK-801组明显降低(P0.05)。结论:亚慢性给予MK-801诱导的精神分裂样小鼠海马脑区中MIF蛋白水平升高,提示MIF蛋白可能参与MK-801诱导的精神分裂样行为。     

放疗联合热疗治疗复发性卵巢癌患者的临床疗效及对患者免疫功能的影响

目的:探讨放疗联合热疗治疗复发性卵巢癌患者的临床疗效及对患者免疫功能的影响。方法:回顾性选取2011年1月-2014年5月在我院诊治的复发性卵巢癌患者99例,按治疗方法将患者分为对照组47例和观察组52例。对照组患者给予三维适行放射治疗,观察组在对照组的基础上给予盆腔部位热疗。治疗后,比较两组患者的临床疗效及免疫功能。结果:治疗后,对照组总缓解率为53.19%,观察组总缓解率为78.85%,显著高于对照组(P0.05);治疗后,观察组与对照组外周血中CD3+、CD4+及CD4+/CD8+含量均较治疗前明显升高(P0.05),而CD8+含量则显著降低(P0.05),且观察组患者CD3+、CD4+及CD4+/CD8+显著高于对照组(P0.05),CD8+水平则明显低于对照组(P0.05)。两组患者治疗后骨髓抑制、胃肠道反应及泌尿系统反应的发生率、1年及2年生存率比较均无显著性差异(P0.05),观察组治疗后3年生存率显著高于对照组(P0.05)。结论:与单纯三维适行放射治疗相比,放疗联合热疗能有效提高复发性卵巢癌的临床疗效,显著增强患者免疫功能,延长生存期,且不会增加不良反应。     

香菇多糖注射液对直肠癌根治术后患者纤维蛋白水平及免疫功能的影响

目的:研究香菇多糖注射液对直肠癌根治术后患者纤维蛋白水平及免疫功能的影响。方法:将2010年5月-2014年10月期间在我院接受直肠癌根治术的患者随机分为两组,观察组术后接受香菇多糖联合FOLFOX-4化疗,对照组术后接受FOLFOX-4化疗,观察两组患者化疗过程中的不良反应,测定化疗前后纤维蛋白水平及免疫功能指标。结果:观察组患者在化疗过程中消化道反应、肝功能损伤、骨髓抑制、周围神经毒性、口腔黏膜损伤、脱发的发生率均显著低于对照组(P0.05);化疗后,对照组患者外周血中CD3~+CD4~+CD8~-细胞、CD3~+CD4~-CD8~+细胞、CD19~+细胞、CD3~-CD56~+细胞的含量以及血清Ig M、Ig A、Ig G、FIB的含量显著低于化疗前(P0.05),观察组患者外周血中CD3~+CD4~+CD8~-细胞、CD3~+CD4~-CD8~+细胞、CD19~+细胞、CD3~-CD56~+细胞的含量以及血清Ig M、Ig A、Ig G的含量与化疗前无显著性差异(P0.05),血清FIB含量显著低于化疗前(P0.05);观察组患者化疗后外周血中CD3~+CD4~+CD8~-细胞、CD3~+CD4~-CD8~+细胞、CD19~+细胞、CD3~-CD56~+细胞的含量以及血清Ig M、Ig A、Ig G、FIB的含量显著高于对照组(P0.05),血清FIB含量显著低于对照组(P0.05)。结论:香菇多糖注射液辅助治疗能够减轻直肠癌根治术后FOLFOX-4化疗的毒副作用、改善免疫功能。     

逆转录病毒载体介导MGMT和MDR1基因增强人脐血CD34+细胞对联合化疗抗性的研究

为探讨转染六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT)和多药耐药基因(MDR1)的人脐血CD34+细胞能否同时增强对卡氮芥(BCNU)和MDR1基因靶药的抗性,应用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)cDNA,构建双顺反子逆转录病毒载体G1Na-MGMT-IRES-MDR1,以电穿孔介导的基因转移法导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,采用含BCNU和长春新碱(VCR)的培养基克隆选择后收集重组病毒上清于单向型GP+E86与双嗜型PA317包装细胞行乒乓交互感染,将含MGMT和MDR1双耐药基因重组病毒的上清在细胞生长因子刺激下重复感染经免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化后的人脐血CD34+细胞,用PCR,RT-PCR,Southern blot,Northern blot,FACS和MTT等方法检测外源MGMT与MDR1基因在CD34+细胞中的转移和表达.结果显示,DNA测序及酶切鉴定证实MGMTcDNA克隆和双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性,MACS分离纯化后的人脐血CD34+细胞纯度平均达92%,回收率为75%,含双耐药基因重组病毒的上清最高滴度为5.8×105 cfu/ml,逆转录病毒载体介导的双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组并获得有效表达,同时传递不同的耐药表型,应用集落计数、PCR方法测定基因转导效率分别为18%和20%,巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在,经双耐药基因修饰的脐血CD34+细胞对BCNU的IC50较对照组提高4.5倍,对VCR,柔红霉素(DNR)和秋水仙碱(COL)的IC50较未转染细胞分别高7.8,6.6和5.5倍.本研究对降低联合化疗骨髓毒性作用的肿瘤临床研究奠定了实验基础.     

小鼠骨髓造血干细胞、外周血组成随年龄的变化趋势及其相关性分析

造血干细胞是具有自我更新能力并能分化为血液中各种血细胞组分的多能干细胞。近来研究显示,不同造血干细胞表面标志物标记的造血干细胞具有分化为不同血细胞的趋势,但是这种分化的内在关系仍不清楚。对小鼠CD34~-/Sca-1~+骨髓造血干细胞、外周血组成随小鼠年龄增长的变化情况进行了分析,结果显示:随着年龄的增长,骨髓中的CD34~-/Sca-1~+骨髓造血干细胞比率显著增加;而外周血各组分则随年龄变化呈现不同的趋势。对不同年龄段小鼠的骨髓造血干细胞及其他组分与外周血组分的同步分析发现,外周血中血小板密度变化趋势与CD34~-/Sca-1~+骨髓造血干细胞变化情况相关系数为0.804 8;外周血中淋巴细胞密度变化趋势与CD34~+/Sca-1~-骨髓细胞的变化情况相关系数为0.947 97;外周血中白细胞密度变化趋势与CD34~+/Sca-1~+骨髓细胞变化情况相关系数为0.763 1(大于0.9为极度相关,0.7到0.9为高度相关)。     

DC荷载α-GalCer对小鼠HepS肝癌的抑制作用

目的:研究树突状细胞(DC)荷载α-半乳糖神经酰胺(α-Gal Cer)作为自然杀伤T细胞(NKT)刺激物对原发性肝癌Heps荷瘤小鼠的抑制作用。方法:建立小鼠Hep S肝癌移植瘤模型,随机分为3组,对照组(NS对照组)、树突状细胞组(DC组)、DC荷载α-半乳糖神经酰胺组(DC+α-Gal Cer组),每组10只。分别给予尾静脉注射DC、荷载α-Gal Cer的DC4×106/m L,对照组给予同体积的NS,隔天给药1次,共3次。各组于干预后2周取眼球血,用流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血CD4+T细胞及CD8+T细胞含量变化。取肿瘤组织,称取各瘤体重量,计算抑瘤率。免疫组化染色比较各组瘤体细胞内Bax凋亡蛋白;Westem blot法检测各组移植瘤组织内Bax的表达。结果:DC荷载α-Gal Cer组CD4+T细胞及CD8+T细胞数较DC组及对照组明显升高(P0.05),DC组较对照组有上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。DC荷载α-Gal Cer组平均瘤体重量较对照组及DC组均显著减轻(P0.05),DC组与对照组平均瘤重无明显变化(P0.05)。与NS组及DC组相比,DC荷载α-Gal Cer组移植瘤内Bax阳性细胞数量及Western blot表达量明显升高,差异有统计学意义(P0.05);DC组与NS组之间无明显差异(P0.05)。结论:DC荷载α-Gal Cer可活化NKT细胞,激活外周血抗肿瘤免疫细胞杀伤肿瘤,抑制小鼠肝癌移植瘤的生长。