胆汁β-葡萄糖醛酸苷酶的性质及其计算荧光法

 胆汁经Sephadex G-25分子筛层析和DEAE-纤维素吸附处理,除去其中直接胆红素及胆汁酸盐,然后对其中的β-葡萄糖醛酸苷酶(GUSB)的性质进行了详细研究:该酶的最适温度为56℃;最适pH为4.5;以4mu Gr为底物测得Km为0.68mmol/L;直接胆红素是其竞争性抑制剂,其k_i=2.04×10~(-3)mmol/L;PI_1=6.0—6.2,PI_2=7.2—7.4,MW=280kD。根据竞争性抑制的米氏方程式设计建立了一个在直接胆红素并存的条件下,定量测定胆汁GUSB的计算荧光法,准确性为97.97±1.79％,重复性CV=1.2％,测定时间大大缩短。利用本法在pH4.5和7.0条件下测定了20例胆红素胆结石和17例胆固醇胆结石患者的胆汁GUSB的真实活性。结果指出:不论在pH4.5或7.0条件下,前组活性均显著高于后组(P<0.01)。证明胆汁中高GUSB活性与胆红素胆结石的形成有密切关系。     

硅胶柱色谱/RP-HPLC/LC-ESI-MS分离纯化鉴定拳卷地钱中芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甙

本文建立了分离纯化鉴定拳卷地钱中芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸甙的硅胶柱色谱／Rp-HPLC／LC-ESI-MS方法。拳卷地钱叶经过80％乙醇提取后,减压蒸馏,得粗提物。拳卷地钱叶粗提物用甲醇溶解后上硅胶柱,用不同浓度的甲醇一氯仿溶液洗脱,各洗脱液进行RP-HPLC分析,较纯的洗脱液进行IC-ESI-MS分析,为制备分离黄酮类化合物单体提供指导。氯仿与甲醇配比为5：4的洗脱液经过RB-HPLC分析为单一组分,tR为12．1min,与对照品芹菜素-7-β-D-葡萄糖醛酸甙共注射进行RP-HPLC实验,发现峰高增加,tR为12．1min,UV(λmax为336／296(Sh)／267nm)和IR光谱与芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甙基本一致。IC-ESI-MS测定结果表明,与对照品芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甙的分子量相同为446。由此可以鉴定该洗脱组分为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甙。     

柚皮苷和木犀草素联合应用对大鼠BMSCs诱导成骨过程中Wnt/β-cantein通路相关基因表达的影响

摘要 目的：探讨柚皮苷和木犀草素联合应用对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导成骨过程中Wnt/β-cantein通路相关基因表达的影响。方法：取大鼠股骨中提取的BMSCs,分别建立A组（空白组）、B组给予柚皮苷溶液10 μmol/L,C组给予木犀草素溶液5 μmol/L;D组给予骨碎补总黄酮溶液10 mg/mL;E组给予柚皮苷-木犀草素混合溶液配伍比为10 μmol/L：5 μmol/L,并诱导其向成骨细胞分化。应用碱性磷酸酶（ALP）染色及分光光度法检测第7 d各组细胞ALP活性。应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测第7 d各组细胞Wnt/β-cantein通路相关基因及成骨基因的表达。结果：B组、C组、D组、E组细胞562 nm波长下光密度（OD）值显著高于A组,E组细胞562 nm波长下OD值最高,显著高于B组、C组、D组（P＜0.05）。B组、C组、D组、E组细胞ALP、骨钙素（OCN）、Runt相关转录因子2（RUNX2）基因表达水平显著高于A组,E组ALP、OCN、RUNX2基因表达水平最高,显著高于B组、C组、D组（P＜0.05）。B组、C组、D组、E组细胞β-catenin、Cyclin D1基因表达水平显著高于A组;B组、E组LEF-1基因表达水平显著高于A组;E组β-catenin、LEF-1、Cyclin D1基因表达水平最高,显著高于B组、C组、D组（P＜0.05）。结论：柚皮苷和木犀草素均具有促进大鼠BMSCs增殖和诱导其成骨向分化的作用,柚皮苷和木犀草素联合应用诱导大鼠BMSCs增成骨作用最强,其主要机制与Wnt/β-cantein通路激活有关。