朱红栓菌提取物抗氧化、抗肿瘤活性评价及相关化学成分分析

采用石油醚、乙酸乙酯、乙醇浸提朱红栓菌 Trametes cinnabarina 子实体干粉,得到不同极性提取物;采用清除DPPH 自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基能力,测定提取物的体外抗氧化活性;MTT法检测提取物对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的抑制作用。结果表明,朱红栓菌石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物均具有一定的抗氧化、抗肿瘤活性;各提取物在浓度为4-5mg/mL时,对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除能力大小依次为乙酸乙酯提取物>乙醇提取物>石油醚提取物;乙酸乙酯提取物对3种自由基的最高清除率分别为60.23%、74.49%、63.84%。各提取物对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖抑制作用大小依次为乙酸乙酯提取物>乙醇提取物>石油醚提取物;乙酸乙酯提取物的抑制率最高达55.93%。采用硅胶和凝胶等柱色谱方法结合核磁、波谱和质谱等技术对乙酸乙酯提取物的化学组分进行分析,共分离纯化出11种化合物,分别鉴定为：麦角甾醇（1）,邻苯二甲酸二丁酯（2）,对羟基苯甲酸甲酯（3）,麦角甾-7,22,二烯-3-酮（4）,1-[(12E,16E)-12,16-二十碳二烯酰基]-2-[(E,E)-7,11-十八碳二烯酰基]-3-硬脂酰基甘油（5）,cinnabarin（6）,过氧麦角甾醇（7）,尿嘧啶（8）,甘露醇（9）,腺嘌呤核苷（10）,豆甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇（11）。除化合物6外均为首次从朱红栓菌子实体中分离得到。研究结果为开发利用朱红栓菌子实体提供了科学依据。     

基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103的分离提取及毒性和抗白色念珠菌活性研究

本文在建立了基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103分离提取工艺的基础上, 经进一步纯化, 获得一定供试样品。通过对比脱羧FR-008/杀念菌素CS103、FR-008/杀念菌素和两性霉素B三种化合物对人胚肾细胞毒性、对人血红细胞的溶血活性和对白色念珠菌的抗菌效果, 发现脱羧FR-008/杀念菌素CS103的毒性较FR-008/杀念菌素和两性霉素B大大降低, 且保持了较高的抗真菌(Candida albicans)活性。     

布鲁氏菌变态反应原的研究——2.新制菌素的敏感性和化学成分

我们用牛、羊、猪三个种的布鲁氏菌弱毒菌种,分别制出牛、羊、猪及三个种混合的4种菌素,发现猪种菌素致敏性较强,又用猪种菌作短期(4和7天)间歇振荡培养和长期(14和28天)静止培养,制出另外4种菌素。生化检测这8种菌素的总氮量和蛋白量相近。还观察到用牛、羊、猪三个种布鲁氏菌分别致敏豚鼠,皮肤试验结果未见有明显差别。     

‘海螺’望春花内生真菌EF-WCH-51鉴定及其抑制葫芦科刺盘孢活性成分分析

【背景】药用植物内生真菌产生的次生代谢产物具有多种抗菌活性,因而具有生防菌开发潜力。【目的】鉴定一株对葫芦科刺盘孢(Colletotrichumorbiculare)有抑菌活性的‘海螺’望春花内生真菌EF-WCH-51,并确定其主要抑菌活性成分。【方法】根据形态特征并结合分子序列鉴定EF-WCH-51菌株,利用生长速率法确定EF-WCH-51抑菌活性,并采用半制备型HPLC、HPLC-MS/MS对其活性成分进行分离鉴定。【结果】供试菌株EF-WCH-51为丝枝蜡蚧菌(Lecanicillium aphanocladii),其发酵液粗提物对葫芦科刺盘孢菌丝生长具有较强抑制作用,EC50为0.086 2 mg/mL;抑菌活性组分A (0.085 0 mg/mL)对葫芦科刺盘孢抑制率达到76.08%,通过查询MS、MS/MS数据库以及与相关文献对比,确定该化合物为卵孢菌素(oosporein)。【结论】本研究发现丝枝蜡蚧菌对葫芦科刺盘孢具有较好的抑菌活性,其主要抑菌活性成分为卵孢菌素,具有作为瓜类炭疽病生防菌株的潜力。     

甲烷氧化菌素的生物活性研究进展

甲烷氧化菌素是具有生物活性的小分子肽,相对分子质量约为1217,对铜具有较强的亲和性。目前研究发现甲烷氧化菌素的生物活性主要包括抗氧化性、抗菌性及金属螯合性。这些特性表明甲烷氧化菌素在食品医药甚至工业等领域都有很好的应用前景。     

具有细菌群体感应抑制活性海洋来源真菌的筛选鉴定

许多致病菌的致病机制依赖于群体感应系统的调控,经实验证明群体感应系统突变或缺失的菌株致病能力显著下降,筛选高效的群体感应抑制剂有望成为解决细菌感染以及细菌耐药性问题的一个有效途径。从海洋软体动物体内分离海洋真菌69株,发酵液粗提物经QSIS2 (Quorum Sensing Inhibitor Selector 2) 筛选模型和紫色杆菌CV026指示菌株筛选后得到编号QY013的粗提物具有群体感应抑制活性,进一步实验表明该粗提物能够显著降低铜绿假单胞菌群体感应调控的毒力因子绿脓菌素的产量,以及紫色杆菌群体感应调控的紫色菌素的产量,且在有效浓度范围内对细菌生长不产生影响。形态学特征和18S rDNA序列分析表明菌株QY013为Penicillium属。文中筛选到一株具有细菌群体感应抑制活性的海洋来源真菌,其发酵液粗提物中的有效活性成分可用于新型抗菌药物的研究。     

金耳发酵液提取物(TBE)对II型糖尿病鼠的作用

本文研究了利用AB-8型大孔树脂从金耳发酵液中分离得到的粗提物对II型糖尿病模型鼠的作用。金耳发酵液粗提物经双缩脲反应和硫酸蒽酮法测定,结果显示金耳粗提物蛋白质和总糖含量都为零,说明金耳粗提物是非多肽或多糖类化合物。采用链脲佐菌素诱导,高脂饲料胁迫诱导的二型糖尿病小鼠研究了金耳粗提物对II型糖尿病的作用。结果显示金耳粗提物具有显著降低链脲佐菌素诱导的高血糖小鼠血清中葡萄糖浓度的作用,极显著降低果糖胺和三磷酸甘油酯水平。其作用经统计分析显示有显著性差异;对体重的影响,金耳高剂量组达到显著水平(P<0.01)。     

三种白腐菌及其组合菌种木质素降解酶比较研究

朱红栓菌Trametes cinnabarina、糙皮侧耳Pleurotus ostreatus、黄孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium是产生木质素降解酶能力强的菌株。对三种白腐菌及其组合菌种产生木质素降解酶能力和行为进行了比较分析和研究。结果表明,最佳培养方式为液体振荡培养;最佳培养基为酵母膏液体培养基。在产漆酶(laccases,lacs)方面,Pleurotus ostreatus和Phanerochaete chrysosporium的组合菌种的酶活最强,在第6天出现峰值,酶活达到450U/L;在产锰过氧化物酶(manganese peroxidases,mnps)方面,Trametes cinnabarina和Pleurotus ostreatus的组合菌种的酶活最强,在第10天出现峰值,酶活达到1050U/L;在产木质素过氧化物酶(lignin peroxidases,lips)方面,Trametes cinnabarina和Phanerochaete chrysosporium的组合菌种的酶活最强,在第8天出现产酶峰值,酶活达到2990U/L。筛选结果表明,组合菌种比单菌种产生的三种主要木质素降解酶的活性强,这为白腐菌高效产酶提供了一条新的途径,并为白腐菌研究领域的后续工作奠定基础。     

芽孢杆菌三种抗菌素基因的杂交检测

以三对特异引物PCR合成表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturin)和抗菌蛋白TasA的地高辛标记探针,采用斑点杂交技术对24个菌株的相关基因加以检测,并用竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immu-nosorbent assay,ELISA)分析阳性菌株中表面活性素基因的表达情况。结果表明:以阳性质粒为模板,获得1 200bp、1 479 bp和790 bp的3个特异性探针,其检测灵敏度分别为2 ng、20 ng和0.1 ng;从24个菌株中检测到10个菌株含有表面活性素合成相关基因,10个菌株含有伊枯草菌素合成相关基因和4个菌株中存在tasA基因;ELISA结果表明:从10个阳性菌株的KMB发酵液中均检测到表面活性素,其中菌株EN1和菌株SB1的产量较高,分别达32.9 mg/L和41.0 mg/L。     

乙基多杀菌素抗性小菜蛾代谢解毒酶酶活性研究

【目的】阐明小菜蛾Plutella xylostella(L.)对乙基多杀菌素的代谢抗性机理,为延缓小菜蛾对乙基多杀菌素抗药性发展及抗性治理技术提供支持。【方法】通过酶动力学方法测定了小菜蛾对乙基多杀菌素高抗、中抗和敏感种群的谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶和多功能氧化酶4种代谢解毒酶的比活力。【结果】乙基多杀菌素高抗小菜蛾种群的谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶的比活力分别为15.38、3.15和7.30 OD·min~(-1)·mg~(-1)pro,显著高于敏感种群;但乙酰胆碱酯酶在中抗种群和敏感种群中比活力差异不显著;多功能氧化酶在高抗、中抗和敏感种群中的比活力分别为4.97、4.08和4.23 OD·min~(-1)·mg~(-1)pro,差异不显著。【结论】谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的酶活随着小菜蛾对乙基多杀菌素抗性的增强而增强,而多功能氧化酶的酶活在抗性种群与敏感种群间差异不显著,因此小菜蛾对乙基多杀菌素的代谢抗性机理研究应重点关注这3种酶。     

链黑菌素研究进展

链黑菌素(streptonigrin,STN)是一种由绒毛链霉菌(Streptomyces flocculus)产生的具有独特的氨基喹啉醌式结构的高效抗肿瘤抗生素,在癌症治疗方面具有良好的防治效果和广阔的应用前景。但是,由于链黑菌素具有较为显著的骨髓抑制副作用,限制了其在临床上的广泛应用。综述了有关链黑菌素的抗肿瘤机制、结构特点及链黑菌素及其类似物生物化学合成相关的现有知识和减除毒副作用的研究现状与展望,从而为开发低毒、无毒副作用的链黑菌素及其类似物提供科学参考。     

绿脓菌素激活MAPKs、NF-KB信号通路诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达

采用绿脓杆菌培养上清及绿脓菌素刺激人呼吸道上皮细胞株A549和SPC-A-1,用ELISA方法检测细胞IL-8分泌水平,并使用免疫印迹(Western blot)方法观察绿脓菌素对细胞内重要的炎症信号传导途径NF—κB及丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)的激活作用。实验发现,绿脓杆菌培养上清及绿脓菌素可诱导呼吸道上皮细胞株IL-8分泌增加,且具有剂量依赖效应。绿脓菌素刺激细胞可使细胞内IκB—α发生降解,同时使MAPK家族蛋白分子(ERK1／2、p38、JNK)发生磷酸化。MEK1／2(ERK1／2激酶)抑制剂U0126(10μmol／L)和p38MAPK抑制剂SB203580(10μmol／L)可降低绿脓菌素诱导A549细胞IL-8的合成。以上结果显示绿脓菌素通过MAPK信号传导通路增强呼吸道上皮细胞IL-8的表达;NF-κB通路也参与了绿脓菌素调控细胞IL-8表达的过程。     

伊维菌素在环境中的降解及其对七种水生生物的急性毒性研究

伊维菌素作为一种高效的抗寄生虫兽药,在畜禽业有着广泛的应用。但药物随着畜禽动物的代谢产物的排放而进入自然生态系统也成为逐渐显现的环境问题。由于药物具有在自然环境中难以快速降解和对水生枝角类高毒性的特点,因此流入天然水体的伊维菌素存在着影响水生态平衡的风险。为了比较全面评估药物对水生动物潜在的毒害作用,研究模拟天然河道环境,对药物在底质中的降解速率进行了测定,并选取7种占据不同生态位的水生生物作为试验对象,通过关于急性毒性的国家标准试验方法来初步评价药物对水生态系统的风险。结果显示伊维菌素在自然水体中降解缓慢,在泥水混合25℃恒温条件下,70d的降解率仅为28.3%。急性毒性试验结果显示伊维菌素对发光细菌(Photobacterium)并不表现出毒性,对淡水小球藻(Chlorella vulgaris)的96h EC50=19.80 mg/L,属中毒;而对其他实验生物则表现出了较高的毒性,伊维菌素对斑马鱼(Brachydanio rerio)、食蚊鱼(Gambusia affinis)和鲫鱼鱼苗(Carassius carassius)的96h LC50分别为40.48、34.81和13.79μg/L,对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的96h LC50=7.87μg/L,对大型溞(Daphniamagna)的24h LC50=4.81 ng/L,均属极高毒。因此残留在天然水体的伊维菌素对水生态中的生物有较大影响,对含伊维菌素的废弃物排放进行监控和科学管理非常必要。     

大蓟提取物联合抗生素对分枝杆菌的协同抗菌作用

本文探索了大蓟提取物联合抗生素对分枝杆菌属模式菌株耻垢分枝杆菌的协同抗菌作用,以期从药用植物中鉴定新型抗分枝杆菌活性天然产物或新型抗菌增效剂。通过水煮法、索氏提取法、超声波法获取大蓟粗提物,采用管碟法、96微孔板二倍稀释法对三种粗提物进行体外分枝杆菌药敏试验,观察大蓟粗提物的抗分枝杆菌活性及与抗生素的协同抗菌活性。结果显示大蓟粗提物单独作用时,饱和浓度的大蓟水提物未表现出抗菌活性;索氏提取物和超声波提取物表现出一定的抗菌活性(MIC值均为8 mg/mL)。大蓟超声波提取物与抗生素联合作用时,与氯霉素、卡那霉素、庆大霉素和红霉素均表现出协同作用,其中与氯霉素、红霉素表现为明显协同。本文首次发现大蓟中存在与抗生素有协同作用的抗菌增效剂,为从药用植物中鉴定天然抗菌产物及抗菌增效剂奠定了一定基础。     

毛韧革菌中的韧革菌素类似物

从毛韧革菌(Stereum hirsutum FP-91666)的YMG发酵液中分离得到1个新的韧革菌素类似物——韧革菌素R(1)以及3个已知的类似物——韧革菌素(2-4).利用硅胶色谱、凝胶色谱等方法,结合半制备型HPLC对该菌次生代谢产物进行研究得到这些化合物,并通过核磁共振(包括1D-NMR、2D-NMR)、高分辨质谱实验(HR-ESI-MS)、紫外光谱等波谱学方法鉴定其结构.     

绿脓菌素激活MAPKs、NF-κB信号通路诱导呼吸道上皮细胞IL8表达

采用绿脓杆菌培养上清及绿脓菌素刺激人呼吸道上皮细胞株A5 4 9和SPC A 1,用ELISA方法检测细胞IL 8分泌水平 ,并使用免疫印迹 (Westernblot)方法观察绿脓菌素对细胞内重要的炎症信号传导途径NF κB及丝裂原激活蛋白激酶 (MAPKs)的激活作用。实验发现 ,绿脓杆菌培养上清及绿脓菌素可诱导呼吸道上皮细胞株IL 8分泌增加 ,且具有剂量依赖效应。绿脓菌素刺激细胞可使细胞内IκB α发生降解 ,同时使MAPK家族蛋白分子 (ERK1 2、p38、JNK)发生磷酸化。MEK1 2 (ERK1 2激酶 )抑制剂U0 12 6 (10 μmol L)和p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80 (10 μmol L)可降低绿脓菌素诱导A5 4 9细胞IL 8的合成。以上结果显示绿脓菌素通过MAPK信号传导通路增强呼吸道上皮细胞IL 8的表达 ;NF κB通路也参与了绿脓菌素调控细胞IL 8表达的过程     

苦豆子提取物与埃玛菌素混合剂剂对小菜蛾实验种群生长的影响

将苦豆子甲醇提取物和苦豆子水提取物分别与埃玛菌素混合,得到苦豆子甲醇提取物·埃玛菌素(简称苦醇·埃)和苦豆子水提取物·埃玛菌素(简称苦水·埃)2种混合剂,在室内用特定年龄生命表法,研究了2种混合剂低致死剂量对小菜蛾的影响,并对其F_1代幼虫、蛹以及成虫进行了观察。结果表明,埃玛菌素、苦醇·埃和苦水·埃3个处理对小菜蛾F_1代各龄期均有影响。其种群趋势指数(I)分别为6.23、4.81和5.70,而对照组种群趋势指数则为28.03。     

杀稻瘟菌素生物合成基因簇的边界确定

【目的】杀稻瘟菌素(BS)是六元糖环肽核苷类抗生素,在农业和基因工程方面有重要应用。由于在其原始产生菌中很难进行基因操作,且许多合成步骤未知,为了增加对此基因簇的认识,为后续生物合成途径的推导和改造提供更多依据,在变铅青链霉菌中确定该基因簇的边界,并对blsK基因功能进行初步研究。【方法】利用PCR-targeting法对已测序基因簇中的基因进行基因置换得到突变株,LC-MS检测突变株发酵液的产物从而确定基因置换是否影响杀稻瘟菌素的产生。【结果】明确了杀稻瘟菌素基因簇包含blsD–blsM共10个基因;在blsK的基因置换突变株中检测到去甲基杀稻瘟菌素(DBS)和少量杀稻瘟菌素的积累。【结论】blsD–blsM这10个基因负责杀稻瘟菌素的生成;从blsK的突变株产物积累结果推测,BlsK蛋白负责加载亮氨酸到DBS的精氨酸衍生侧链的β-氨基上,生成N-亮氨酰化去甲基杀稻瘟菌素(LDBS);BS生物合成途径有两条,一条是由DBS直接甲基化生成BS;另一条是由DBS转化成LDBS继而由LDBS甲基化和水解生成BS。     

串珠镰刀菌素及其毒理

以自陕西省黄龙县分离到的串珠镰刀菌胶孢变种(Fusarium moniliforme var. subgluti-nans)作为产毒菌株进行培养,用离子交换法从其培养物中提取到毒素纯结晶。经紫外、红外及核磁共振等波谱分析,证明此毒素为串珠镰刀菌素(moniliformin)。它可使雏鸭心电图发生异常变化。北京鸭心肌组织培养表明,先加适量硒可在一定程度上抑制串珠镰刀菌素毒性,后补加适量硒对毒素毒性无影响。此外,该毒素可使北京鸭和大白鼠心肌细胞膜通透性加强。实验结果支持了克山病的真菌毒素中毒学说,提出串珠镰刀菌素可能是克山病的直接致病因子。     

绿僵菌素对四种昆虫细胞的毒性

【目的】绿僵菌素(Destruxins)是绿僵菌产生的具有杀虫活性的次生代谢产物,本研究以家蚕Bombyx mori Bm12细胞、亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis血细胞(Ofh)、果蝇S2细胞和草地贪夜蛾Sf9细胞为对象,探索绿僵菌素对不同昆虫细胞的毒性差异。【方法】采用MTT法和显微观察法比较绿僵菌素A、B(DA、DB)以及两者等量混合物(DABM)对上述4种昆虫细胞的影响,比较其IC50值和形态学变化。【结果】绿僵菌素处理24 h后,在较低处理剂量(<25μg/m L)下,Ofh细胞比Bm12、S2、Sf9细胞对DA、DB和DABM更为敏感,DA、DB和DABM对Ofh细胞IC50值分别219.19、112.29和34.86μg/m L,而对Bm12、S2、Sf9细胞的IC50值均大于250μg/m L;DA和DB对Ofh细胞具有协同增效作用,对Sf9细胞具拮抗作用,对Bm12和S2细胞具相加作用。显微观察发现,绿僵菌素处理后,6.25μg/m L的低剂量下,即可发现细胞的形态变化,剂量越高,变化越显著。Bm12细胞出现瘤状突起、细胞破碎、聚集、扩展及胞内空泡等现象,且细胞数量减少;Ofh细胞扩展,似乎回归到浆血细胞及类绛色细胞的形态,发生凝集现象,少数出现瘤状突起和细胞破碎;S2细胞出现明显的胞内空泡,少数发生扩展、破碎和聚集现象;Sf9细胞细胞膜收缩、细胞空泡、破碎,细胞数量减少等变化。【结论】玉米螟的血细胞Ofh对绿僵菌素最为敏感,而来自非寄主昆虫果蝇的S2细胞最不敏感。绿僵菌素对4种细胞的致死剂量较高,但引起细胞形态改变的剂量却非常低。