3种革兰氏阴性细菌及其L型内毒素含量的测定

本文采用鲎试剂对大肠杆菌（ＡＴＣＣ２５９２２）、伤寒杆菌、绿脓杆菌（ＡＴＣＣ７８５３）及它们的Ｌ型内毒素的含量进行测定。结果显示细菌型与细菌Ｌ型均具有内毒素,但细菌Ｌ型内毒素含量较细菌型低（约为１／３￣１／２）。因此,认为细菌Ｌ型仍有一定的致病性。     

一氧化氮和前列腺素在内毒素引起降钙素基因相关肽释放中的作用

本实验在离体灌流大鼠肠系膜动脉床研究内毒素引起降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）释放的机制。内毒素（５０μｇ／ｍｌ）使ＣＧＲＰ释放增加１６倍,一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）底物Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）能促进内毒素引起的ＣＧＲＰ释放（４１％）。ＮＯＳ抑制剂Ｎ￣Ｇ－硝基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）及鸟苷酸环化酶抑制剂甲基蓝（ＭＢ）能使内毒素的上述作用分别降低３５％与３６％,Ｌ－精氨酸（ｔ－Ａｒｇ）能逆转Ｌ－ＮＮＡ的作用。提示内毒素的作用机制中部分是通过一氧化氮引起细胞内ｃＧＭＰ升高而介导的。用化学方法破坏血管内皮细胞,Ｌ－ＮＮＡ与Ｌ－Ａｒｇ的上述作用依然存在。提示内毒素主要是激活血管周围感觉神经末梢的神经源ＮＯＳ,而非内皮源ＮＯＳ。环氧化酶抑制剂消炎痛（Ｉｎｄｏ）与布洛芬（Ｉｂｕ）也能使内毒素引起ＣＧＲＰ释放的作用分别降低３４％与３９％,但与Ｌ－ＮＮＡ的作用不能迭加。提示内毒素可能通过激活神经源ＮＯＳ进而引起环氧化酶活化而起作用。     

脂多糖结合蛋白及其对内毒素增敏机制的研究进展

脂多糖结合蛋白（ＬＢＰ）是近年来发现的一种能够与脂多糖（ＰＬＳ）特异性结合,并倡导机体细胞对ＬＰＳ识别、应答的调节蛋白。研究表明它可在多方面增敏内毒素刺激细胞的作用。抗ＬＢＰ的抗体可有效地减弱内毒素的毒性作用,在脓毒症的防治中可能具有一定意义。     

重组人细胞因子制品细菌内毒素的检测

为了考察细菌内毒素检测法（BET法）检测重组人细胞因子制品的细菌内毒素及其质量控制的可行性。按照2000年版《中国生物制品规程》的规定,确定L值,计算MVD,进行干扰试验,检测制品的细菌内毒素,并与家兔热原法（RPT法）进行比较。结果表明,用标示灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂,重组人干扰素α2a(IFNα2a）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）、白介素－2（IL－2）制品,最高非干扰浓度分别为稀释至31.7倍（9.5万IU／ml）,10.9倍（27.5万μg/ml）,40倍（0.25万IU/ml）。将IFNα2a和GM－CSF按规程规定稀释80位,对细菌内毒素的检测均无干扰作用,而IL－2稀释8倍对检测有抑制作用,但经40倍稀释后可消除抑制。以BET法检测上述制品的细菌内毒素和以RPT法测定家兔热原香,符合率为100％。结果提示,用BET法代替PRT法检测上述细胞因子制品的细菌内毒素及其质量控制是可行的。     

鲎C因子的性质、结构、功能及应用

鲎C因子是一种分子量为123kD的丝氨酸蛋白酶原,主要由六种结构域构成,能特异地结合内毒素分子而被激活。在内毒素的检测,抗内毒素治疗,去除生物制品中污染的内毒素,以及在抗微生物作用中有多种潜在的应用价值 。     

鲎试剂在抗淋巴细胞免疫球蛋白热原检测中的应用

报道了鲎试剂在抗淋巴细胞免疫球蛋白内毒素检查中的应用。在用鲎试剂检测细菌内毒素时 ,按中国药典的要求对鲎试剂灵敏度进行标定 ,并作干扰实验 (增强或抑制实验 ) ,然后用鲎试法与家兔法同时测定 15批抗淋巴细胞免疫球蛋白。结果发现三批鲎试剂的灵敏度标示值均正确 ,五批抗淋巴细胞免疫球蛋白半成品在最大有效稀释度 (MVD)时对试验无干扰 ,这两种方法测定结果的符合率达到 91.7%。从而表明鲎试法很有可能代替家兔法     

蛇伤药酒抗毒抗菌作用的实验研究

目的探讨蛇伤药酒抗眼镜蛇毒、内毒素及细菌的效果。方法抗眼镜蛇毒和内毒素试验采用鲎试剂法．抗菌试验采用纸片法。结果眼镜蛇毒与0．5EU／ml鲎试剂产生凝集反应的浓度在5．0ug／ml以上;蛇伤药酒浓度1ml／ml时有抗5倍量眼镜蛇毒的凝集反应;有抗2．5倍量内毒素的凝集反应;对多种细菌有抑制作用。结论蛇伤药酒有抗眼镜蛇毒、抗内毒素和多种病原菌的作用。     

氧化修饰极低密度脂蛋白增强其致动脉粥样硬化作用

研究了氧化修饰极低密度脂蛋白（ｏｘ－ＶＬＤＬ）对小白鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积作用及其机制。经Ｃｕ~（２＋）修饰后ＶＬＤＬ的电泳迁移率及脂质过氧化物含量均显著增加。ｏｘ－ＶＬＤＬ更易导致小鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积。以相同浓度（３００μｇＴＧ／ｍＬ）或不同浓度（２００─５００μｇＴＧ／ｍＬ）的ｏｘ－ＶＬＤＬ及正常ＶＬＤＬ（ｎ－ＶＬＤＬ）与巨噬细胞温育２４ｈ,前者使巨噬细胞内ＴＧ堆积均比后者显著（Ｐ＜０．０１）。同时,随ｏｘ－ＶＬＤＬ的脂质过氧化物含量（ＴＢＡＲＳ水平）增加,巨噬细胞内ＴＧ含量的百分率相应增加。以５０μｇ蛋白／ｍＬ的ｎ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＬＤＬ,ｎ－ＶＬＤＬ及ｏｘ－ＶＬＤＬ与巨噬细胞温育６０ｈ。细胞内ＣＥ堆积中氧化组均比正常组高（Ｐ＜０．０１）。巨噬细胞对~（１２５）Ｉ－ｎ－ＶＬＤＬ与~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ的结合、降曲线均有饱和趋势。两结合曲线无明显差异,但细胞对后者降解的量比前者多。结合的竞争实验表明,ｎ－ＶＬＤＬ能抑制大部分~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ与细胞结合,而Ａｃ－ＬＤＬ只能抑制小部分。结果表明ｏｘ－ＶＬＤＬ主要通过受体途径：大部分经过ｎ－ＶＬＤＬ受体,小部分经过清道夫受体被巨噬细胞摄     

巨噬细胞新型氧化低密度脂蛋白结合蛋白的研究

小鼠腹腔巨噬细胞（ＭＰＭ）膜上存在能结合氧化低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）的Ａ类清道夫受体（ＳＲ－Ａ）,但用配体印迹技术研究制备ＭＰＭ膜蛋白,发现还存在一种新型ｏｘ－ＬＤＬ膜结合蛋白,其分子量低于ＳＲ－Ａ,为９２ｋＤ它不结合乙酰化低密度脂蛋白ａｃ－ＬＤＬ）,与配体的结合也不受还原剂的影响,但唾液酸酶处理则明显减弱其与ｏｘ－ＬＤＬ的结合,未标记ｏｘ－ＬＤＬ能竞争性抑制（＾１２５Ｉ）ｏｘ－ＬＤＬ与９２ｋ     

黑皮蛇、山白菜抗细菌内毒素的实验研究

目的探讨黑皮蛇、山白菜的抗细菌内毒素作用。方法采用鲎试剂凝胶法对黑皮蛇、山白菜抗细菌内毒素作用进行实验研究。结果在灵敏度为0.5EU/ml鲎试剂试验中,黑皮蛇、山白菜药液浓度1g/ml,均有抗细菌内毒素作用;不同药液浓度试验,抗细菌内毒素最低药液浓度:黑皮蛇为0.1g/ml,山白菜为0.05g/ml。结论黑皮蛇、山白菜均有较强的抗细菌内毒素作用。     

FasL—Fas／APO—1（CD95）系统

Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）与Ｆａｓ受体（Ｆａｓ,即ＡＰＯ－１,又称ＣＤ９５）分别属于肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）及ＴＮＦ受体（ＴＮＦＲ）家族,以膜分子或可溶性分子形式存在于哺乳类机体内。ＦａｓＬ或Ｆａｓ单克隆抗体（ＦａｓｍＡｂ）与Ｆａｓ结合可引起Ｆａｓ了性反应细胞的功能增强,继而出现程序性细胞死亡（ＰＣＤ）。ＦａｓＬ与Ｆａｓ相互作用及其所介导的信息途径是目前ＰＣＤ研究的重要内容之一。     

4—1BB及其配体的分子生物学研究进展

４－１ＢＢ是激活的Ｔ淋巴细胞表面抗原,属神经生长因子受体（ＮＧＦ－Ｒ）／肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦ－Ｒ）家族,４－１ＢＢ通过与其相应配体（４－１ＢＢ－Ｌ）结合,不仅能调节Ｔ淋巴细胞的激活和生长,而且还能促进抗μ激活的Ｂ淋巴细胞的增殖。抗４－１ＢＢ抗体能诱导Ｔ淋巴细胞增殖,其抗肿瘤作用比抗ＣＤ２８单抗和抗ＣＴＬＡ４单抗作用更强,以４－１ＢＢ为基础的免疫基因治疗有望成为临床治疗某些低免疫原性肿瘤的有效策     

细菌内毒素作用机理的研究进展

细菌内毒素对机体免疫系统的影响具有双重性,内毒素（ＬＰＳ）通过诱导机体内的单核巨噬细胞释放多种介质分子而发挥其生物学效应,其中细胞因子在感染性休克中起重要作用。内毒素结合蛋白（ＬＢＰ）有促进ＬＰＳ与单核巨噬细胞表面的相应受体发生结合的作用。而在ＬＰＳ诱导单核巨噬细胞产生细胞因子过程中,细胞表面ＬＢＰ受体（ＣＤ１４）的存在具有一定的意义。     

短杆菌肽S与脂膜结合前后的H／D交换动力学的研究

短杆菌肽Ｓ（ＧＳ）是一个十肽分子（环－（Ｌ－Ｖａｌ－Ｌ－Ｏｒｎ－Ｌ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌ－Ｐｒｏ）２）,是由两个β转角和两个β片层结构所构成［１］。ＧＳ的功能是通过破坏葛兰氏阴性菌的膜结构来完成其抗菌活性。迄今为止,人们对ＧＳ与膜结合特点的研究结果还不一致。Ｄａｔｅｍａｎ等人利用２Ｈ－ＮＭＲ,３１Ｐ－ＮＭＲ和ＤＳＣ等技术研究了ＧＳ与ＤＰＰＣ多层脂膜的相互作用,指出肽仅仅作用于膜表面［２］;而Ｈｉｇａｓｈｉｊｉｍａ等［３］及张凤立等用２Ｄ－ＮＭＲ的研究结果［４］表明,ＧＳ的疏水部分应插入膜内。蛋白质及多肽的Ｈ／Ｄ交换动力学受其分子内氢键,分子空间结构的致密度及其周边环境如膜环境［５］的影响。我们利用衰减全反射红外光谱（ＡＴＲ－ＦＴＩＲ）对与脂膜结合前后的短杆菌肽Ｓ的Ｈ／Ｄ交换动力学进行了研究,实验结果提示ＧＳ插入了脂膜双层。     

大力王藤抗蛇毒及细菌内毒素的实验研究

目的探讨大力王藤药材抗蛇毒与细菌内毒素的作用。方法采用鲎试剂凝胶法测试大力王藤抗蛇毒及细菌内毒素的效果。结果大力王藤药液浓度为2 g/ml时,有抗眼镜蛇、竹叶青蛇、五步蛇毒和细菌内毒素的凝集作用;药液浓度为1.6 g/ml时,有抗蝰蛇毒的凝集作用;药液浓度为0.8 g/ml时,有抗蝮蛇毒的凝集作用。结论大力王藤有一定的抗蛇毒与细菌内毒素作用。     

I型胶原对巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白的作用

为探讨胶原的存在对细胞摄取氧化低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）的影响,本研究在体外制成Ｉ型胶原凝胶和巨噬细胞实验体系,ＬＤＬ经Ｃｕ＾２＋催化氧化,丙二醛（ＭＤＡ）及乙酰化修饰后,与胶原的结合能力明显增强,但４－羟基壬烯醛（ＨＮＥ）修饰的ＬＤＬ与胶原的结合能力反应不如天然ＬＤＬ。当小鼠腹腔巨噬细胞培养在胶原凝胶上时,其对ｏｘ－ＬＤＬ的摄取明显减少,这时大部分ｏｘ－ＬＤＬ为胶原凝胶所结合,如用细胞松弛素Ｄ     

非离子型去垢剂Triton X—114提取两歧双歧杆菌的脂磷壁酸

本研究利用非离子型去垢剂Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４提取两歧双歧杆菌细胞壁的脂磷壁酸（ＬＴＡ）,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ阴离子层垢后,Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４与ＬＴＡ分开为两个峰,收集ＬＴＡ洗脱峰,经紫外扫描、化学组分分析证实提取的ＬＴＡ无明显蛋白质、核酸污染。被动血球凝集试验结果显示,ＬＴＡ能自主粘附绵羊红血球,并能同抗ＬＴＡ抗体或抗两歧双歧杆菌抗体结合而使血球凝集。我们采用的方法是分离细胞壁ＬＴ     

应用实时BIA研究酵母PHO4和PHO2的相互作用

应用实时生物分子相互作用分析技术（ＢＩＡ）分析了酵母ＰＨＯ４和ＰＨＯ２蛋白的相互作用。将ＰＨＯ４蛋白通过氨基耦联在感应片上。进样５μｍｏｌ／Ｌ重组的谷胱甘肽转移酶融合的ＰＨＯ２蛋白（ＧＳＴ－ＰＨＯ２）及其两种突变体融合蛋白。结果表明ＰＨＯ２的２３０位丝氨酸变为天冬氨酸的突变体（ＧＳＴ－２ＳＤ）与ＰＨＯ４有强的表面等离子体激元共振信号,而生型ＰＨＯ２和２３０位丝氨酸变为丙氨酸的突变体（ＧＳＴ－２ＳＡ     

脂氧素与白三烯研究进展

脂氧素（ｌｉｐｏｘｉｎ,ＬＸ）是花生四烯酸在１５－脂氧化酶及５－脂氧化酶作用下的一类产物,可拮抗白三烯（ＬＴ）而具有抗炎症作用,其前体物质１５－羟二十碳四烯酸（１５－ＨＥＴＥ）亦有拮抗白三烯的作用。ＬＸ及ＬＴ的合成与细胞间粘附作用有关。ＬＸ及１５－ＨＥＴＥ有良好的临床应用前景。     

氧化修饰低密度脂蛋白与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化的发生发展与低密度脂蛋白受到氧化修饰有关。本文从以下四个方面对本室的工作进行了综述：（１）动脉粥样硬化机体受到脂质过氧化损伤;（２）Ｏｘ－ＬＤＬ对内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞的毒性效应;（３）Ｏｘ－ＬＤＬ和ＭＤＡ－ＬＤＬ的比较及与Ｏｘ－ＬＤＬ和ＭＤＡ－ＬＤＬ结合的清道夫受体的特征;（４）不同方法对ＬＤＬ氧化修饰的比较和以ＬＤＬ氧化修饰为模型对某些物质的抗氧化修饰研究。研究结果为动脉粥