MTT法测定眼镜蛇毒细胞毒素的抗癌活性

目的测定眼镜蛇毒细胞毒素（Ｃｏｂｒａｖｅｎｏｍｃｙｔｏｔｏｘｉｎ,ＣＶ－ＣＴＸ）对体外培养的人癌细胞的杀伤作用。方法溴化二苯四偶氮盐（ＭＴＴ）比色法。结果ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＧＣ－７９０１,Ｂｅｌ－７４０２,Ｋ５６２和Ｕ９３７４种人癌细胞有很强的杀伤作用,量效关系明显,ＩＣ５０分别为４．１０,２．０８,０．２９和０．１７μｇ／ｍｌ。结论ＭＴＴ法检测ＣＶ－ＣＴＸ的抗癌活性,操作简便、快速和准确。     

富血小板血浆的制备现状及研究进展

富血小板血浆富合多种生长因子,目前国内外大量文献报道这些生长因子可显著促进骨缺损的修复,并在体外对骨髓基质干细胞的增殖与分化有明显的促进作用.然而也有一些学者认为在动物实验中,富血小板血浆无促进骨再生的作用,或在临床应用中富血小板血浆复合植骨材料修复骨缺损的效果不明显,其主要原因是各研究人员及临床工作者所使用的富血小板血浆其制备标准不一致.并且目前研究人员及临床工作者大都使用患者自体血液,这无疑会对患者的机体形成二次打击,且由于各患者存在个体差异,导致所制备的富血小板血浆质量不一致,从而影响研究结果与临床疗效.本文主要对富血小板血浆的成分、生物学特性、制备方法以及临床应用做一简要综述,这可以为后期同种异体富血小板血浆的标准化制备提供一些理论依据,使得制备方法统一、疗效确定的同种异体富血小板血浆制剂能像其他药品一样,被广泛应用于科研和临床,具有极为广阔的应用前景.     

眼镜蛇毒细胞毒素的抗肿瘤作用

目的　研究眼镜蛇毒细胞毒素（ Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ）的体内抗肿瘤作用。方法　小鼠皮下、腹腔接种 Ｓ１８０ 、 Ｅ Ａ Ｃ后, 于接种部位注射不同剂量的 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ, 每天 １ 次, 连续１０ 天, 观察瘤重抑制率和生命延长率。结果　适当剂量（０２～０８ｍ ｇ／ｋｇ） 的 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ 能明显抑制肿瘤的生长 （ Ｐ＜ ００１）,小鼠的存活时间明显延长（ Ｐ ＜ ００１）。结论　 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ 在小鼠体内对 Ｓ１８０ 、 Ｅ Ａ Ｃ有明显地抗肿瘤作用。     

中华眼镜蛇心脏毒素(CardiotoxinⅢ)的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达

心脏毒素cardiotoxinⅢ（CTXⅢ）是中华眼镜蛇毒主要组分之一,根据Genbank中已有的CTXs序列设计特异性引物,从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的CTXⅢ片段,并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌His—patch ThioredoxinB载体中,重组CTXⅢ经渗透休克分泌至胞外。将CTXⅢ基因插入酵母pPIC9K分泌型表达载体重组表达,N端带有3个氨基酸（GYT）残基的重组CTXⅢ（rCTXⅢ）分泌量达9．5mg／L,经一步凝胶过滤纯化,其纯度达90％以上,纯化率达65％。经细胞毒性实验检测,纯化的rCTXⅢ 12h的IC50为4．66μg／ml,证实重组蛋白具有良好的生物学活性。     

富血小板血浆在脊柱脊髓损伤治疗中的应用进展

富血小板血浆是近些年来比较热门的一种血液制品,其来源于自体,且制备方法简单,又富含大量血小板及多种生长因子,能够加速骨愈合,增强骨再生,促进软组织及神经损伤恢复,因此得到了广泛的关注。国内外的研究人员根据富血小板血浆所具有的特点,针对各个方面对其进行了大量的研究实验,并且在临床骨科疾病的治疗中也已经开始了实验性应用,如骨缺损、骨再生,肌腱、韧带及软组织损伤,脊柱脊髓损伤等。尤其是在脊柱脊髓损伤的治疗方面,无论是单独应用富血小板血浆治疗,还是联合应用富血小板血浆与脊髓神经前体细胞、骨髓间充质干细胞等有利于脊髓神经损伤恢复的细胞因子复合物共同治疗,均取得了突破性的进展,为研究脊柱脊髓损伤的治疗提供了新的方向。     

使用富血小板血浆对下肢慢性创面缺损的临床研究分析

目的:研究和探讨使用富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)在人体下肢慢性创面缺损中的治疗作用,并试图寻找更佳的治疗皮肤慢性缺损的治疗方式。方法:对2016.03-2017.03一年以来在我科治疗,明确诊断为慢性创面缺损的,经纳入和排除标准筛选的共计16名患者进行分析。将其分为实验组(8人)与对照组(8人)。实验组通过对静脉血(肘部)进行抽取离心来制备富血小板血浆并加以覆盖。对照组则使用重组人表皮生长因子进行替代。两组患者均以7天为一疗程,进行换药和更换辅料。比较两组患者的创面愈合情况并比较其血液指标。结果:实验组患者在治疗后1周时观察创面,发现创面无明显渗出及感染征象,其面积缩小约1/4。对照组在1周后进行观察,发现1例有感染可能,给予再次清创并使用抗生素后辅料包扎。其余患者创面肉芽生长可,面积缩小约1/6。在治疗2周后再次进行观察,发现实验组患者创面面积缩小约2/3。而对照组患者面积缩小约1/4。在治疗后3周时,实验组所有患者创面已基本愈合85%以上。在延迟治疗1-2周后该组患者全部愈合。对照组患者在治疗3周后有两例患者愈合面积在50%以上。给予继续使用该治疗方法。剩余6例患者接受外科治疗(VSD+植皮/皮瓣)。实验组患者在各治疗观察点皮肤愈合情况较对照组均有显著改善(P0.05)。两组所有患者均未出现严重并发症。结论:对于下肢慢性创面,使用富血小板血浆进行治疗,能够有效的促进创面愈合,减少手术及外科治疗的风险,降低治疗费用,且相对安全,具有非常重要的临床推广价值。     

中华眼镜蛇心脏毒素（cardiotoxinⅢ, CTXⅢ）的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达

心脏毒素cardiotoxinⅢ (CTXⅢ)是中华眼镜蛇毒主要组分之一,根据Genbank中已有的CTXs序列设计特异性引物,从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的CTXⅢ片段,并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌His-patch ThioredoxinB载体中,重组CTXⅢ经渗透休克分泌至胞外。将CTXⅢ基因插入酵母pPIC9K分泌型表达载体重组表达,N端带有三个氨基酸（GYT）残基的重组CTXⅢ（rCTXⅢ）分泌量达9.5mg/L,经一步凝胶过滤纯化,其纯度达90％以上,纯化率达65％。经细胞毒性实验检测,纯化的rCTXⅢ 12h的IC50为4.66?g/ml,证实重组蛋白具有良好的生物学活性。     

富血小板血浆治疗椎间盘退变的机制及临床应用

椎间盘退变(intervertebral disc disease, IVDD)具有高发病率、高致残率等特点,在全球范围内流行,是当前严重危害人类生命健康的重大疾病之一。传统治疗包括卧床休息、物理治疗、抗炎止痛药物和手术,但都仅能起到缓解患者临床症状的作用,尚不能延缓或逆转IVDD的发展进程。富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)是多种生长因子的天然载体,近年来的研究提示,它具有抑制炎症反应,抑制细胞凋亡、促进细胞增殖,增加细胞外基质等三方面的作用,可作为IVDD的有效治疗方法。该文主要阐述PRP作为一种再生疗法在IVDD中的治疗机制,并讨论其临床应用的研究进展。     

富血小板血浆注射治疗在膝骨关节炎中的应用进展

富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)由于富含多种活性生长因子,能够刺激软骨细胞增殖,促进软骨前体细胞增殖、迁移、向软骨细胞分化,促进胶原蛋白合成以及抑制软骨的炎性反应和退变,提供有利于组织修复的内环境,延缓病情进展。近年来PRP注射治疗已成为治疗与骨关节炎(osteoarthritis,OA)相关疾病的新型选择,并且疗效显著。为了进一步提高其效用,PRP注射治疗不仅在关节腔内进行,还可在软骨下骨内进行注射。软骨下骨的病变会加速软骨损耗,故有必要将软骨下骨也当作OA众多发病机制和病理过程的关键因素之一。根据PRP的生物特效以及PRP注射治疗在膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)中应用的研究进展进行了综述,同时对软骨下骨内PRP注射治疗KOA的研究进行了展望,以期为KOA的治疗提供更加有效的方法。     

两种湿敷护理法对眼镜蛇咬伤致局部溃疡的疗效比较

目的 探讨中华眼镜蛇咬伤致局部软组织肿胀坏死的有效护理方法.方法 收集2010年1月~2012年12月我科收治的60例中华眼镜蛇咬伤中毒患者的临床资料,按护理方法不同随机分为观察组和对照组各30例.观察组采取磺胺嘧啶银霜配合使用重组人表皮生长因子外用溶液(Ⅰ),对照组采取常规的护理措施即单纯使用40%硫酸镁甘油湿敷肿胀坏死处,观察比较两组病例开始消肿时间与完全消肿时间及止痛效果.结果 观察组患者肿胀开始消退和完全消退时间分别为(25.4±22.3)h、(98.1±20.5)h,止痛有效率为90%;对照组患者肿胀开始消退及完全消退时间分别为(45.6±32.1)h、(132.2±73.4)h,止痛有效率为60%.两组患者肿胀开始消退时间和完全消退时间比较,观察组明显短于对照组(P＜0.05),止痛有效率高于对照组.结论 磺胺嘧啶银霜配合使用重组人表皮生长因子外用溶液(Ⅰ)能有效促进中华眼镜蛇咬伤中毒致坏死皮肤的愈合.     

富血小板血浆联合同种异体骨治疗非感染性骨不连的临床应用

目的:评价富血小板血浆联合同种异体骨治疗非感染性骨不连的临床疗效。方法:回顾性分析我院创伤骨科2010年2月-2015年1月的非感染性骨不连患者,比较同种异体骨加富血小板血浆混合物与自体髂骨植骨治疗非感染性骨不连的疗效。结果:两组共随访非感染性骨不连患者69例,全部进行了术中断端植骨,其中富血小板血浆联合同种异体骨植骨组(PRP组)21例,其中愈合19例,未愈合2例,临床愈合率90.5%。自体髂骨植骨组(自体骨组)48例,愈合44例,4例未愈合,临床愈合率91.6%。PRP组平均手术持续时间为(108.73±13.91),自体骨组为(120.54±13.87)min,两组间有统计学意义(P0.05)。术后3月,PRP组患者X线骨痂评价标准平均评分值为(2.54±0.43)分,自体骨组为(2.62±0.45)分,两组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:富血小板血浆混合同种异体骨植骨治疗骨不连较传统自体髂骨植骨可缩短手术时间,避免供骨区并发症,修复效果良好,为骨不连的治疗提供了一个新的方法。     

一种可止血的富血小板血浆壳聚糖/丝素蛋白多孔伤口敷料的制备及性能表征

为了进一步提高伤口敷料的止血性能,文中在生物相容性良好的壳聚糖溶液中引入含有多种生长因子的人源性富血小板血浆(Humanplatelet-richplasma,hPRP),并加入不同体积比例(1∶1、1∶3、3∶1、1∶0)的丝素蛋白溶液以提高材料的多孔性与止血性,通过冷冻干燥法制备不同配比的hPRP-壳聚糖/丝素蛋白敷料,并将纯壳聚糖敷料作为对照组,研究hPRP和丝素蛋白对敷料的止血性能的影响以及丝素蛋白对PRP中生长因子控制释放的影响。结果表明,在壳聚糖敷料中引入hPRP对敷料的止血性有所提高,但对敷料的多孔结构及吸水率无明显改善,若在hPRP-壳聚糖溶液中按照体积比为1∶1的比例加入丝素蛋白溶液,会得到具有较为均匀的多孔结构的敷料,敷料的孔隙率与吸水率分别可达到86.83%±3.84%与1 474%±114%,且该比例的敷料在快速止血性能上表现优异。此外,加入丝素蛋白与壳聚糖比例为1∶1的PRP敷料能有效减少PRP中生长因子在初始阶段的爆裂释放。因此,含hPRP的壳聚糖/丝素蛋白复合敷料有望成为一种能快速止血且能促进伤口愈合的新型伤口敷料。     

关节镜联合富血小板血浆对膝关节半月板损伤患者膝关节功能和生活质量的影响

目的:探讨关节镜联合富血小板血浆对膝关节半月板损伤患者膝关节功能和生活质量的影响。方法:选取2017年12月-2019年9月期间我院收治的膝关节半月板损伤患者80例,根据随机数字表法分为对照组(n=40)和研究组(n=40),对照组予以关节镜下修整手术治疗,研究组在对照组基础上联合富血小板血浆治疗,比较两组患者优良率、生活质量及视觉模拟评分量表(VAS)、Lysholm评分量表、美国西安大略和麦克马斯特大学关节炎指数(WOMAC)评分。记录两组治疗期间不良反应情况。结果:研究组治疗后3个月的膝关节功能优良率高于对照组(P0.05)。两组治疗前、治疗后1个月、治疗后3个月VAS、WOMAC评分均逐步降低,Lysholm评分逐步升高(P0.05);研究组治疗后1个月、治疗后3个月VAS、WOMAC评分低于对照组,Lysholm评分高于对照组(P0.05)。两组治疗后3个月SF-36各维度评分均较治疗前升高,且研究组高于对照组(P0.05)。两组不良反应发生率对比未见统计学差异(P0.05)。结论:关节镜联合富血小板血浆治疗膝关节半月板损伤患者,可促进膝关节功能的恢复,可有效缓解手术治疗后的疼痛症状,改善患者生活质量,具有较好的临床应用价值。     

人羊膜上皮干细胞联合富血小板血浆对宫腔粘连大鼠纤维化因子、炎症因子的作用

摘要 目的：探究人羊膜上皮干细胞（hAECs）联合富血小板血浆（PRP）对宫腔粘连大鼠的治疗效果,为临床中优化宫腔粘连治疗方法理论基础。方法：选用SPF级雌性SD大鼠共40只,依照随机数字表法随机分为空白组（A组）、假手术组（B组）、hAECs组（C组）、PRP组（D组）、hAECs+PRP组（E组）,每组各8只。A组不做任何处理,B组仅做麻醉、开关腹腔处理,C组、D组、E组使用搔刮法制备宫腔粘连模型。随后C组进行hAECs治疗,D组注射等量生理盐水。D组进行PRP治疗,C组注射等量生理盐水。E组进行hAECs联合PRP治疗。观察比较两组大鼠子宫内膜组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、盘状结构域受体2（DDR2）蛋白表达水平、PI3K/Akt/mTOR通路相关mRNA表达量、血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）水平以及各组大鼠妊娠孕囊数量比较。结果：与A组相比,B组的子宫内膜组织MMP-9、DDR2蛋白表达水平、p-mTOR mRNA、p-Akt mRNA水平以及血清IL-6、IL-8水平比较无差异（P＞0.05）;C组、D组、E组大鼠的子宫内膜组织MMP-9、DDR2蛋白表达水平明显下降,IL-6、IL-8水平、p-mTOR mRNA、p-Akt mRNA表达升高（P＜0.05）。其中,E组大鼠MMP-9、DDR2蛋白表达水平明显高于C组、D组,IL-6、IL-8水平及p-mTOR mRNA、p-Akt mRNA表达低于C组、D组（P＜0.05）。C组、D组大鼠MMP-9、DDR2蛋白表达水平、血清IL-6、IL-8水平及p-mTOR mRNA、p-Akt mRNA表达比较（P＞0.05）。妊娠孕囊数量方面,与A组比较,B组大鼠妊娠孕囊数量。结论：hAECs联合PRP治疗可能通过上调宫腔粘连大鼠子宫内膜组织MMP-9、DDR2蛋白表达水平并下调p-mTOR mRNA、p-Akt mRNA表达,同时降低炎性因子IL-6、IL-8水平,进而提高妊娠孕囊数量,起到治疗作用。     

富血小板纤维蛋白对人牙周膜细胞成骨能力、炎症因子表达和 Wnt/β-catenin信号通路的影响

摘要 目的：探究富血小板纤维蛋白（PRF）对人牙周膜细胞（hPDLCs）成骨能力、炎症因子表达和 Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路的影响。方法：通过刮取法、组织块法获取 2019年 1月至 2020年 1月期间我院口腔科收治的 10例正畸患者拔除健康阻生牙或正畸牙的牙周组织作为研究样本。将 hPDLCs细胞分为干预 1组、干预 2组、对照组、肿瘤细胞坏死因子 -α（TNF-α）组,各组均采用含有 10% FBSDMEM培养基培养,TNF-α 组加用 10 ng/mL TNF-α 诱导液,干预 1组加用 50% PRF培养,干预 2组加用 10 ng/mL TNF-α 诱导液和 50% PRF。对比各组的细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性、炎症因子、Wnt/β-catenin信号通路关键因子的表达差异。结果：（1）相比于其他 3组,干预 1组的吸光度值（OD）明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 OD值均明显升高（P<0.05）;（2）和其他 3组相比,干预 1组的 ALP活性明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 ALP活性均明显升高（P<0.05）;（3）和其他 3组相比,干预 1组的骨形态发生蛋白 2（BMP2）mRNA、runt相关转录因子 2（Runx2）mRNA、BMP2及 Runx2蛋白表达水平均明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 BMP2 mRNA、Runx2 mRNA、BMP2及 Runx2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;（4）相比于干预 1组、对照组,干预 2组、TNF-α 组的 TNF-α mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;（5）和其他 3组相比,干预 1组的细胞周期蛋白 D1（CyclinD1）mRNA、β-catenin mRNA表达水平明显升高,相比于 TNF-α 组,干预 2组、对照组的 CyclinD1 mRNA、β-catenin mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。结论：PRF可以促进 hPDLCs细胞增殖和成骨,并减少炎症因子表达,提升 ALP活性,其可能是通过激活 Wnt/β-catenin信号通路促进 CyclinD1、β-catenin mRNA表达加快hPDLCs细胞成骨。     

索拉非尼与干扰素治疗中、晚期肾细胞癌的临床效果比较

目的:探讨索拉非尼靶向治疗中、晚期肾细胞癌的临床效果及安全性。方法:收集2011年9月至2014年5月在我科室行肾细胞癌根治术或原发灶切除术等姑息性手术治疗的肿瘤直径≥7 cm,并术后经病理证实为中、晚期肾细胞癌,伴发转移病灶或静脉瘤栓的20例患者的临床资料。依据术后应用的辅助治疗方法将其分为索拉非尼靶向治疗组(8例)及干扰素免疫治疗组(12例),记录和比较两组患者的治疗效果、相关副反应的发生情况以及患者使用药物治疗后退出治疗的情况。结果:免疫治疗组的药物客观反应率(50%)低于较靶向治疗组(75%),总有效率(83.3%)亦低于靶向治疗组(87.5%),差异均无统计学意义(P0.05)。与靶向治疗组相比,免疫治疗组患者发热、口腔黏膜炎、手足综合征及皮疹等副反应的几率明显增高(P0.05)。免疫治疗组的患者退出治疗率明显高于靶向治疗组,组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:采用索拉非尼靶向治疗中、晚期肾细胞癌的效果要优于免疫治疗,且安全性更高。     

胸腔镜肺楔形切除术与胸腔镜肺叶切除加纵隔淋巴结清扫术治疗早期非小细胞肺癌患者的临床效果比较

目的:对比分析胸腔镜肺楔形切除术与胸腔镜肺叶切除加纵隔淋巴结清扫术治疗早期非小细胞肺癌患者的临床效果。方法:选择2012年1月～2016年12月我院心胸外科收治的70例早期非小细胞肺癌患者,将其随机分为两组。对照组采取胸腔镜肺叶切除加纵隔淋巴结清扫术治疗,观察组采取胸腔镜肺楔形切除术治疗。比较两组的手术情况、术后情况、预后情况以及生存情况。结果:观察组的术中出血量以及手术时间明显短于对照组(P0.05),术后总引流量、留置引流管时间、术后住院时间以及VAS疼痛评分均明显低于对照组(P0.05)。观察组术后1年的手术切缘转移率为0.00%(0/35),死亡率为11.43%(4/35),均明显低于对照组(P0.05)。两组的局部复发率、复发率、胸腔内转移率、淋巴结转移率、远处转移率、肿瘤相关性死亡率相比无明显的差异(P0.05)。对照组患者的无病进展生存期为8.24个月(95%CI:9.34～6.27),中位生存期为15.29个月(95%CI:12.14～21.78);观察组患者的无疾病进展生存期为11.26个月(95%CI:9.37～14.35),中位生存期为18.13个月(95%CI:15.24～22.36),均明显长于对照组(P0.05)。结论:胸腔镜肺楔形切除术治疗早期非小细胞肺癌患者的临床效果明显优于胸腔镜肺叶切除加纵隔淋巴结清扫术治疗。