纤维素酶水解糠醛渣生产酵母II．糠醛渣酶解液培养酵母

从82株不同种属酵母中选得3株酵母,它们能较好地利用纤维素酶水解糠醛渣所产生的糖液。其菌名和编号是假丝酵母(Candida sp.)As 2．121,热带假丝酵母(Candida tropicalis)培养基糖浓度以1．5％或2．0%较好,这与原始酶解液的糖浓度及其中糠醛等有毒物质有关。最好将原始酶解液稀释一倍以上使用。另外补加相当于含糖量7．5％的(NH4),SO4,5％的KH2PO4和2．5％的尿素。起始pH以5较好。三株菌的最适生长温度略有差异, AS2.121为28—32℃,AS 2.637为2 8—37℃,AS 2.1180为30—35℃,但最适生长温度范围均较广,在 生产上较易控制。在250毫升三角瓶中装培养基50毫升,接种酵母后在旋转摇床(170转／AS 2.121 菌株之菌体产率高且稳定,常达50％;AS 2．637菌株较耐高温,菌体产率亦可高达50％左右;AS 2．1180菌株在摇瓶培养条件下菌体产率较低,为40—45％,且较不稳定,可能和培养基pH值的控制有关。     

酿酒酵母和产朊假丝酵母原生质体的形成、再生及属间融合

使用由亚硝基胍诱变所得到的营养缺陷型作为单倍体融合亲株的核基因标记,同时也采用线粒体球红霉素抗性突变株的小菌落形式作为融合亲株的线粒体基因标记。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和产朊假丝酵母(Candida utilis)两亲株原生质体的制备是用对数生长早期的细胞在蜗牛酶和0.7M KCl及β-巯基乙醇或二巯基苏糖醇的作用下完成的。二者的原生质体的形成率在30—60分钟内达到90—99％。原生质体再生率,酿酒酵母最高为29—35％,产朊假丝酵母为7.5％。两亲株的原生质体在35％PEG(M.W.6,000),10mM CaCl_2条件下被诱导融合。在基础培养基上,长出以营养互补为标记的融合菌株。融合频率为10~(-5)—10~(-6)。试验表明,这些融合菌株具有杂种的性质。其中一株杂合子在同化D-木糖、纤维二糖等的能力上比亲株明显增强。     

纤维素酶水解稻草生产单细胞蛋白（SCP）：1.纤维素酶水解稻草的研究

对不同预处理方法与底物得糖率,纤维素转化率的关系进行了研究,以1％NaOH在100℃煮沸1h效果最好。研究了稻草酶解的适宜条件,在pH5、50℃、底物浓度7％、酶解48h的条件下,底物得糖率达53.8％,含糖量5.0％,全纤维素转化率80.2％。     

解脂假丝酵母8-2利用液体石蜡发酵生产工业用柠檬酸

果园土壤筛选出一株能利用液体石蜡生成柠檬酸的酵母菌,经鉴定为解脂假丝酵母(Candida lipolytica) 8—2。在该菌所产生总酸中约50％为柠檬酸。摇瓶及500升发酵罐试验证明,8—2菌在含10—12％液体石蜡、0.25—0.5％玉米浆及6％CaCO,作中和剂的培养基中,一般能生成7％以上的柠檬酸,最高可达10．72％。此种工艺可生产工业用柠檬酸。     

二步发酵丢糟生产微生物油脂的研究

目的:探索以黄曲霉和皮状丝孢酵母为菌种二步发酵大曲丢糟生产微生物油脂的最佳工艺条件.方法:利用黄曲霉对丢糟进行一步发酵,再以一步丢糟发酵物为基质,设定皮状丝孢酵母的接种量、培养温度、培养时间为三个因素,进行L9(33)正交试验.结果:黄曲霉一步发酵丢糟的最佳条件为接种量12％,在28℃下发酵5d,获得的一步丢糟发酵物还原糖含量为2.4051％;皮状丝孢酵母二步发酵丢糟生产微生物油脂的最佳条件为皮状丝孢酵母接种量12％,在30℃下培养4d,每1 000g发酵物中可得油脂19.32g.结论:利用黄曲霉的产纤维素酶的性能和皮状丝孢酵母积累油脂的性能进行二步发酵丢糟生产微生物油脂,具有一定的可行性.     

降解三硝基甲苯的酵母和类酵母菌的研究

从受三硝基甲苯（TNT）严重污染的土壤和废水中分离筛选到17株可降解TNT的酵母菌和白地霉。其中6株为克鲁斯假丝酵母（Candidakrusei）,4株为橡树假丝酵母（C.quercitrusa）,一株为无名假丝酵母（C.famata）,一株为伯杰汉逊酵母（Hansenulabeijerinckii）,一株为亚膜汉逊酵母（H.subpelliculosa）,4株为白地霉（Geotrichumcandidum）。对其中6株菌进行了降解TNT的条件实验,发现降解TNT的适宜pH为7,温度为37～40℃。在含75～80mg／LTNT的培养基中,40h内能降解TNT56～74mg／L,去除率达71％～93％。在培养基中加入0．01％～0．05％的葡萄糖作碳源,或加入0.01％～0．1％的酵母膏对6株菌降解TNT的能力略有促进作用。加入铵盐作为氮源则明显抑制这些菌对TNT的降解。     

制备13β-乙基-3-甲氧基-8，14-开链-1，3，5(10)，9(11)-雌四烯-17β-醇-14-酮的微生物学研究

调查了10属酵母共104株形成一种光学活性的13β-乙基-3-甲氧基-8,14-开链-1,3,5(10),9(11)一雌四烯-17β-醇-14-酮的能力。发现酵母属酵母具较强的活性。啤酒酵母AS2.346是一株最好的菌,它能使底物几乎全部转化成产物。用这株菌研究了酵母细胞的培养和转化条件。在发酵过程中,观察到了“假结晶发酵”现象。在最适条件下,[葡萄糖4—4.5％和玉米浆2—2.5％,微酸性条件下培养的幼龄酵母细胞,转化pH中性,31屯并通气,乙醇浓度不高于3％(体积／体积)。]产物收率达85—90％。     

酵母细胞生物转化反式—肉桂酸生产L—苯丙氨酸的研究

据文献调查,搜集了国内可能相关的30株酵母,进行生物转化反式-肉桂酸(t-Ca) 生产L-苯丙氨酸 (L-Phe) 的微生物筛选研究,并对部分菌株生物转化能力,即苯丙氨酸解氨酶 (PAL,EC _(4、3、1、5) 活性水平进行了初步评估。筛选结果是:22株酵母具有转化 t-Ca 生成 L-Phe 的能力,转化率在2—67％范围。选出7株酵母研究在液体培养条件下细胞生长和PAL活性的时间过程关系,PAL 活性范围在 2.3—14.4x10~(-s)u/m g细胞干重。深红酵母 (Rhodotorularubra) AS2.166作为生物转化制备实经菌株,在静止细胞和固定化细胞批式反应条件下,结果获得L-Phe分离产率分别为42.0％,28.7％。     

糖多孢菌属中新种的鉴定

从云南省昆明市郊水田土样中分离到Y84—4001和Y84一4003两株菌。其特点是不抗酸,气丝形成孢子链,菌落中心的基丝断裂,胞壁IV型,应置于糖多孢菌属。根据形态、培养特征和生理生化特性的研究,将菌株Y84—4001定名为橙黄糖多孢菌(Saccharopolyspora auranti-aca sp. Nov.),菌株Y8-4003定名为橙黄糖多孢菌昆明亚种(Saccharopolyspora aurantiacasubsp．Kunmingcnsis subsp. Nov.)。     

新一代高产甘油重组菌的构建及其初步发酵

产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes WL2002-5)是一株发酵生产甘油的工业化菌株。为进一步提高其产甘油能力,本研究利用前期研究中成功克隆的产甘油假丝酵母中甘油合成关键酶3-磷酸甘油脱氢酶基因CgGPD1,构建根癌农杆菌双元载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1后,电击转化根癌农杆菌LBA4404,通过根癌农杆菌介导法(ATMT)转化产甘油假丝酵母,构建了产甘油假丝酵母重组菌。并从中筛选出一株酶活力和产甘油性能较好的产甘油假丝酵母重组菌株C.g-G8。以葡萄糖为底物摇瓶发酵96h后,重组菌C.g-G8的甘油产量比野生型菌株Candida glycerinogene提高18.06%,平均耗糖速率提高12.97%,平均酶活力提高27.55%。本研究成功利用ATMT法转化产甘油假丝酵母构建新一代高产甘油菌株。     

铬对重金属去除菌影响的研究

考察了Cr^6 浓度和培养时间对4株重金属去除菌致死率的影响、重金属去除菌除铬性能的稳定性、吸附铬前后胞内外的变化、Cr^6 对胞内可溶性还原糖含量的影响以及多种因素对重金属去除菌毒性,初步探讨了重金属去除菌的抗Cr^6 机理。实验结果表明,4株实验菌的致死率随培养时间的变化趋势都是先升高后降低,最后再升高;假丝酵母的可驯化性较好;掷孢酵母7-3对高浓度Cr^6 的耐受性最好;Cr^6 对4株实验菌的各种代谢过程有一定影响;扫描电镜,透射电镜及原子力显微镜等实验结果表明：产朊假丝酵母的除铬机理是表面吸附和胞内积累并存;在正交实验中,Cr^6 浓度、pH、培养时间、N源、C源、吸附时间等6个因素对4株实验菌的影响各不相同。     

2株动物微生态制剂菌的分离鉴定及其生物学特性初步研究

目的从饲料中进行微生物的分离与培养,筛选动物微生态制剂候选菌株。方法利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)筛选得到的7株微生物区分为2种菌,经测序确定其为热带假丝酵母和植物乳杆菌;检测了不同pH、温度、胆盐、金属铜和需/厌氧对其生长的影响。结果当pH小于2.5或铜离子高于150 ppm时,植物乳杆菌无法生长,而热带假丝酵母数量略有下降;胆盐和金属离子对2种菌影响较小,42℃培养条件下相对于30℃培养时热带假丝酵母数量下降了6个数量级。结论筛选得到的2株菌具有应用于动物微生态制剂的潜力,为动物微生态制剂候选菌筛选和评价提供了基础数据。     

芽四糖淀粉酶产生菌的筛选与发酵条件的研究

从290个土样中分离到1380株细菌,加上本所其他课题组提供的细菌共1870株,其中有707株能分解淀粉,经过复筛、纸层析鉴定有3株菌的淀粉酶酶解液中主要产物是麦芽四糖,进一步用β－淀粉酶水解为麦芽糖,用萄葡糖淀粉酶水解为萄葡糖,确证为麦芽四糖。其中最优菌株为537．1,其酶解产物中麦芽四糖占90％,而其他两株菌的酶解产物中除麦芽四糖外,还有较多的麦芽糖及麦芽三糖,因此选择了537．1作为形成麦芽四糖淀粉酶的优良菌株,经鉴定,该菌属于产碱菌(Alcaligenessp．)。菌株537．1产酶的较好条件为t培养基中麦芽糖1．5％,蛋白胨0．5％,起始pH7—7．5,在27—28℃振荡培养48h。株537．1培养液可以酶解谷类、薯类和野生植物淀粉生成麦芽四糖。     

耐酸耐糖高产乙醇单倍体酵母菌株的选育

在收集大量酵母菌株的基础上,用废糖蜜作碳源,以测定残糖及乙醇产量为指标,经单孢子诱变得到两株活性高,发酵速度较快的稳产、高产酿酒酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)Z—B—4—M—88和Z—S—B—M—33。前者是耐酸菌,在pH4.0,15％糖度下乙醇产量达62.87mg/ml,比原始菌乙醇产量提高了11.2％;后者是耐糖菌,在20％糖度下乙醇产量为70.24mg/ml比原始菌的乙醇量提高11.9％。     

申克孢子丝菌菌丝相至酵母相转化的实验研究

目的观察申克孢子丝菌菌丝相向酵母相转化的形态学变化并初步研究连续传代后菌株转化为酵母相的百分率。方法将95株申克孢子丝菌临床株于脑心浸液琼脂培养基上连续传代至酵母相,利用显微镜及血细胞计数板计数菌丝和孢子比例并记录显微镜下形态。结果 95株申克孢子丝菌中,经1次传代即成功转化有23株,经2次传代有14株,经3次传代有10株,经4次传代有6株,4次传代后总计55.8%实验菌株转化为酵母相。结论部分申克孢子丝菌由菌丝相向酵母相转化需经过连续多次传代,连续传代增加了菌丝相至酵母相的转化率。     

代谢工程改造野生耐酸酵母生产L-乳酸

以选育低pH条件下高产L-乳酸的酵母菌为目的,从自然样品中筛选分离得到一株能在pH 2.5 (乳酸调节) 的培养基中生长且不利用乳酸的酵母 (初步鉴定为木兰假丝酵母Candida magnolia);进一步将来源于米根霉As3.819的乳酸脱氢酶编码基因 (ldhA) 插入含有G418抗性基因的酵母穿梭载体,构建了重组质粒pYX212-kanMX-ldhA,电转化入野生型C. magnolia中,筛选获得了一株具有产L-乳酸能力的重组菌株C. magnolia-2;通过发酵实验表明,该重组菌产L-乳酸的最     

致病酵母菌基因组多态性及亲缘关系的研究

致病酵母是条件致病菌感染中最常见的菌群。其属间、种间及种内的分型具有重要的流行病学及临床意义。以随机扩增多态性(Randomly Amplified Polymorphism DNA markers,RAPD)的方法对48株临床上常见的酵母菌属间、种间及种内基因组型的多态性进行了研究,并以多种引物扩增带型的相似性系数的高低来评价酵母菌之间的亲缘关系。结果表明:RAPD带型可清楚的显示出假丝酵母(Candida)及相关酵母属间、种间及种内的差异,亲缘关系的研究表明假丝酵母属与隐球菌属(Cryptococcus)、丝孢酵母属(Trichosporon)的相似性系数为80％,除季也蒙假丝酵母(C. guilliermondii)外,假丝酵母属中不同种间的相似性系数为82％～87％,同种不同株间的相似性系数>90％。大多数属、种基因组分型的结果和形态学分类结果相符。     

90株阴道念珠菌的菌群分布及对抗真菌药物MIC的研究

白假丝酵母是目前最常见的条件致病菌。从临床念珠菌感染病例分离株的耐药性进行流行病研究, 可以为指导临床用药提供参考。对由妇科念珠菌性阴道炎患者的外阴分泌物分离纯化得到的９０株假丝酵母 进行了系统鉴定并测定了对 ＭＣＺ, ＫＣＺ和 ＦＣＺ ３种药物的 ＭＩＣ,分析了菌群变化及 ＭＩＣ分布。结果显示,非 白假丝酵母所占比例（４０．０％）明显上升,成为主要条件致病菌,而白假丝酵母所占比例仅为３７．７％,已明显下 降;同时亦显示不同种类的假丝酵母对上述３种抗真菌药物的敏感性也不同。这种菌群变迁可能与近年来抗 真菌药物的广泛应用有关。     

马铃薯渣固体发酵生产菌体蛋白饲料的研究

试验以提高马铃薯渣的营养价值为目的，以马铃薯渣为主原料，选用黑曲霉，白地霉，热带假丝酵母，酿酒酵母4个菌株，采用了多菌协生固态发酵技术，经糖比，发酵，干燥等工艺，试制出了菌体蛋白饲料。通过对其感官特征的比较和主要理化指标的定量分析，结果表明，经黑曲霉糖化多菌种协生（白地霉：热带假丝酵母：酿酒酵母=8：1.5：0.5，总接种量为10％，28℃，56h）发酵后，产物蛋白质含量可提高到22.16％，并使原料的霉腐味等异味消除。     

铬对重金属去除菌影响的研究*

考察了Cr⁶⁺浓度和培养时间对4株重金属去除菌致死率的影响、重金属去除菌除铬性能的稳定性、吸附铬前后胞内外的变化、Cr⁶⁺对胞内可溶性还原糖含量的影响以及多种因素对重金属去除菌毒性,初步探讨了重金属去除菌的抗Cr⁶⁺机理。实验结果表明,4株实验菌的致死率随培养时间的变化趋势都是先升高后降低,最后再升高;假丝酵母的可驯化性较好;掷孢酵母73对高浓度Cr6+的耐受性最好;Cr⁶⁺对4株实验菌的各种代谢过程有一定影响;扫描电