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肠毒原性大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)基因探针的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
经氯化铯-溴化乙锭密度梯度离心分离纯化重组质粒pMMO 30 DNA 琼脂糖凝肢电泳回收的1.TDNA—HindII片段,用DNA缺口转译技术制备a-32p标记的LT基因探针,与标准ETFC(LT+)杂交为阳性,与非ETEC杂交则无同源性。从腹泻儿童和腹泻病猪粪便中分离的、经兔肠段结扎试验和免疫沉淀测定LT呈阳性的EFEC,与基因探针杂交呈现阳性:而且一个单菌落在硝酸纤维素滤膜上裂解的DNA印迹,与探针杂交可以进行放射自显影。如果采用不同的杂交条件,还可以鉴删测定ETEC的LT基因和霍乱弧菌的CT基因,一次可以进行几百个菌落的测定。结果表明,该探针可以用于实验室诊断和流行病学调查。 相似文献
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介绍一种快速印迹杂交法 总被引:1,自引:0,他引:1
本文介绍一种快速的细胞mRNA及DNA印迹法。本方法以细胞数为单位,将细胞破碎后在高浓度NaI存在的条件下直接点样于硝酸纤维滤膜上用于核酸的杂交。用本方法可以检测细胞中特异mRNA和DNA的含量,主要用于细胞中特异mRNA的半定量分析和不同细胞之间特异mRNA表达的比较,也适用于分析比较细胞接受各种刺激前后特异mRNA含量的变化。 相似文献
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将生物素标记的DNA探针用于菌落原位杂交,结合链霉菌抗生物素蛋白和生物素碱性磷酸酶系统检测显示信号。结果证明该法快速方便,杂交信号清晰,高度特异,完全可以取代同位素用于细菌分析和克隆筛选。 相似文献
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在电镜下观察,细菌细胞中不存在真正的核,DNA被局限在细胞的中心部位,它被细胞的其他部分所包围。与真核细胞相比,这个局限细菌DNA的区域常常被称为细菌的“核”;而细胞的其余部分常常被称为细菌的“细胞质”。在这种核与细胞质之间,不存在使二者隔离的膜,即细菌没有核膜。而细菌的DNA,尽管并没有象真核细胞的DNA那样与蛋白质结合,也常常被称为细菌的“染色体”,其分子量大约是1~6×10~9道尔顿。在这种染色体上,排列着细菌遗传的全部或大部分基因,它是细菌赖以生存的基本遗传物质。 相似文献
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小菌落突变株是一种具有独特表型及致病特征且生长缓慢的细菌亚群。在表型上,小菌落突变株表现为生长率低、菌落形态不规则及生化特性异常,这使得临床微生物学家在鉴定时遇到了挑战。在临床上,小菌落突变株比相应的野生株更能持续存在于哺乳动物细胞中,且对抗生素更不敏感。当宿主细胞形成应急的保护性环境时,小菌落突变株会引发隐性或复发性感染。这篇综述涵盖了小菌落突变株相关表型、遗传及临床上的特征,重点描述目前研究最多的葡萄球菌。 相似文献
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噬菌体脱毒机理的研究Ⅰ 总被引:2,自引:0,他引:2
用噬菌体处理河流弧菌Ⅱ的时间不同,细菌菌落的透明度和超微结构也不一样。在吸附后7h开始菌落出现透明度的变化,首先是不透明(乳黄色)的菌落占绝对优势,但已出现半透明和透明菌落,培养到48h时,几乎全部变为透明菌落。透明菌落不再能与其噬菌体吸附而产生噬斑,也不会再感染鲍而产生脓疱病。透射电镜观察发现,透明菌落的菌细胞形状和结构大都发生变化。细胞壁薄,细胞质浓缩集中在细胞的一侧或一端。不透明菌落细胞形状正常,细胞壁完整,细胞质外延使细胞横切面呈指环状。电镜观察不同时间取样发现,1号样品细胞结构无明显变化。2号样品多数细胞产生外膜泡。3号样品许多细胞结构与1号相似,但在一些细胞的附近出现成簇的外膜泡和噬菌体。4号样品细胞结构变化较大,细菌的核区被破坏,在细胞的周围发现许多噬菌体。5号样中发现许多菌细胞被破坏,也在一些细胞内发现噬菌体。6号样中透明菌落和不透明菌落细胞结构变化明显。7号样几乎所有菌落都变为透明状,许多细胞破裂等。 相似文献
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用DNA分子杂交研究两种人体胸苷激酶基因间的同源性 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验从人体细胞质胸苷激酶(TK-C)基因分离出不含Alu重复顺序的3个DNA片段,分别次级克隆在质粒pBR322上,定名为pRR0.92,pXR1.5和pHK1.25。用pXR1.5和pHK1.25为探针,作Southern印迹杂交分析,都不能与小鼠细胞Ltk、CD-1、A9和BALB/c的DNA杂交。但是pXR1.5能与中国仓鼠细胞E36 DNA 23kb Bam HI片段杂交,出现信号很弱的杂交带.这提示以TK-C基因来说,人同中国仓鼠间的同源程度似大于人同小鼠的同源程度。在降低杂交严紧度的条件下,pHK1.25能与含人体16号染色体而不含17号染色体的人鼠杂种细胞DNA杂交,只是杂交信号极弱。我们推测人体TK-C基因(位于17号染色体)与人体TK-M基因(位于16号染色体)可能有某种程度的同源性,pHK1.25对进一步克隆TK-M基因也许是有用的。 相似文献
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疏水网格滤膜技术检测食源性致病菌的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
疏水网格滤膜技术利用膜的疏水性黏附细菌细胞,通过膜的过滤作用截留细菌细胞,然后将膜进行选择性培养,达到检测鉴定待测菌的目的。主要概述了疏水网格滤膜技术的原理和特点,以及该技术与分子生物学技术、免疫学技术偶联在食源性致病菌检测中的应用。 相似文献
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DNA重组技术:Ⅲ.重组质粒在大肠杆菌中的转化 总被引:1,自引:0,他引:1
氯化钙法是用质粒DNA转化细菌细胞,尤其是大肠杆菌细胞最常使用的方法。实验操作如下: (1) 将受体菌接种在平板培养基上划线,37℃过夜,进行活化。 (2) 挑选单菌落,接于5ml LB培养液,37℃震荡过夜。 (3) 从上述培养液中取0.5ml,转入50mlLB培养液,37期震荡培养2~4小时,到细菌密度大约为5×10~7/ml,OD_(575)约为0.8。 相似文献
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细菌分类与鉴定的新热点:16S-23SrDNA间区 总被引:3,自引:0,他引:3
随着分子生物学的迅速发展 ,细菌的分类鉴定亦从传统的表型分类进入到各种基因型分类水平 ,如(G+ C) mol%、DNA杂交、r DNA指纹图、质粒图谱和 16 S r DNA序列分析等。R RNA存在于所有细菌中 ,r RNA基因由保守区和可变区组成 ,在细菌中高度保守。R RNA基因包含 5’端到 3’端的若干种成分 ,分别是 16 Sr DNA、间区、2 3Sr DNA、间区和 5Sr DNA。16 S- 2 3Sr DNA间区近年来在细菌系统发育学 ,特别是相近种和菌株的区分和鉴定方面倍受关注。作 相似文献
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油菜内生细菌16S核糖体DNA的RFLP分析 总被引:5,自引:0,他引:5
植物内生细菌定殖在植物组织内部但不引起明显的病害症状。从健康油菜植株的不同器官中分离到大量内生细菌,这些细菌菌落形态存在明显的差异,表明油菜组织中存在大量内生细菌,且类群丰富。分离到的122株内生细菌根据菌落形态可以划分为35类;利用细菌通用引物对16S核糖体DNA进行扩增, 获得约15 kb片段,分别用内切酶HaeⅢ和MspⅠ对扩增产物进行限制性酶切,产生不同的酶切图谱,根据酶切图谱聚类分析结果,所有供试菌株被归为39类,这一结果从遗传上显示油菜内生细菌类群的多样性。两种方法归类结果比较发现菌落特征所反映的信息量有限,只能作为初步的参考指标,核糖体DNA的限制性片段长度多态性分析快速、准确,可以作为油菜内生细菌多样性分析的一种有效方法 相似文献
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本文报道用非标记的克隆 EBV DNA 限制性酶解片段作标准,同时以标记的克隆片段R 作探针,经 DNA 点杂交检测每个 H_(18)细胞中 EBV 基因组拷贝数。由于实验中结合用 W 片段作标准 DNA 和探针,测定每个 Raji 细胞中所具有稳定的 EBV 基因组拷贝数,以及每个 Raji 细胞中 EBV 基因组的重复序列 W 片段数均与前人报告的结果基本一致,所以说明了本文所用方法及结果的可靠性。此项技术可在病毒阳性细胞培养物中定量测定病毒核酸,也可用于临床分子病毒学作为常规的核酸杂交技术。 相似文献
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gyrB基因在细菌系统发育分析中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
细菌gyrB编码DNA促旋酶的B亚单位蛋白,对细茵DNA的转录和复制很重要.因不显现频繁的基因横向转移并且基于该序列的分析与DNA杂交同源性分析有较好的一致性,近年来常被选用于细菌系统发育分析及细菌鉴定,一般采用对该基因测序或对其PCR产物RFLP等方法进行研究. 相似文献
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利用非放射性光敏生物素标记DNA分子与固定在微稀释板上的热变性单链DNA杂交的方法,对短状杆菌(Brachybacterium)15个菌株的染色体DNA进行分子杂交.通过测定荧光强度,确定DNA间的同源值.根据其遗传相关性,对难以从形态特征、生理生化特性等进一步分类的细菌在种的水平上定论,确定其应有的分类位置.光敏生物素标记DNA,在微稀释板上进行分子杂交是一种准确、快速的杂交技术,在短状杆菌的分类学研究中起着决定性的作用. 相似文献
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现代生物技术在环境微生物学中的应用:I.基因探针和探针探测 总被引:2,自引:0,他引:2
现代生物技术在环境微生物学中的应用将发表系列综述文章。第一篇讨论基因探针和探针探测。这篇文章包含菌落转移或菌落杂交 ,Southern杂交和Northern杂交以及生物芯片。 相似文献