微生物菊糖酶及其在菊糖转化成果糖中的应用潜力

在自然界中,菊糖(inulin)是作为菊科和某些禾本科作物的贮藏物质而存在的。菊芋(Helianthus tuberosus L.)蒲公英(Taraxacum officinathus)、菊苣(Cichorium intybus)、大丽花(Dahlia pinnata)和牛蒡属植物(Arctium)等都是重要的菊糖来源。菊糖的化学本质是通过线性的β-2.1糖苷键连接的果聚糖。--菊糖分子的每一链长约25-30个果糖单位,末端连接一葡萄糖残基,分子量大约为3000-5000。菊糖的链长与分子量的大小因不同的植物、收获季节及作物的成熟程度等有关。     

高效凝胶色谱测定蛋白质分子量

自从1959年凝胶过滤色谱出现以来,很快就提出这种方法可做为一种测定蛋白质分子量的手段。但经典的凝胶过滤色谱流速慢、柱效低、检测灵敏度和操作的自动化程度也不高。因此,长期以来凝胶过滤主要还是作为一种分离的手段,并不经常用来测定分子量。近年来高效凝胶过滤色谱法的出现,使这项技术有了进一步的发展。一些新型的高效液相色谱柱也表现出在一定的分子量范围内分配系数(Kd)与分子量对数呈近似线性的关系,因此利用高效液相色谱的高效、高速、高     

响应面优化菊芋菊糖的提取工艺研究

利用单因素实验及响应面法优化确定菊芋块茎中菊糖的提取工艺。通过单因素实验筛选出液固比、提取时间、提取温度3个主要因素,以菊糖得率为响应值利用Design Expert V8.0中心组合试验设计,建立菊糖提取得率的二次回归方程,得到优化组合条件。响应面法分析结果表明,当液固比为18∶1(m L·g~(- 1)),提取时间41min,提取温度86℃时,验证优化工艺得菊芋块茎中菊糖的最大提取得率40.56%,接近于模型预测值40.74%。在该工艺条件下,对菊糖进行粗制,并通过红外光谱仪对所提取的菊糖进行了结构分析。该法用于提取菊芋块茎中的菊糖,工艺简单、成本低,具有一定的应用价值。     

酿酒酵母L610利用菊糖生产乙醇发酵条件的研究

以1株能够直接利用菊糖产乙醇的酿酒酵母L610为出发菌株,对其利用菊糖生产乙醇的发酵条件进行了一系列研究。结果表明,L610最适乙醇发酵温度为37℃,且40℃高温发酵对其产乙醇能力无显著影响;L610对酸性发酵环境有良好的耐受性,当发酵液p H值降至3.5时,其糖醇转化率及乙醇产量仍保持较高水平;以0.025~0.10 vvm的通气量通气12 h有利于L610发酵菊糖产乙醇;L610对350 g/L的高浓度菊糖有良好的转化率,乙醇浓度和生产强度分别达到129 g/L和1.35 g/(L·h);当直接以300 g/L菊芋粗粉为唯一底物进行发酵时,L610发酵产乙醇浓度达到89.6 g/L,为理论产量的78.1%。本研究所取得的成果为酿酒酵母一步法发酵菊芋生产乙醇的工业化发展提供参考。     

高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺的分子量及其分布

目的:探讨高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺(PEI)及其衍生物的分子量及其分布.方法:采用Ultrahydrogel 250(300mmx7.8mm)色谱柱;以已知相对分子量的PEI为标样;醋酸-醋酸盐缓冲液(0.2mol/l醋酸-0.1mol/l醋酸钠)为流动相;柱温40℃;流速lml/min;示差折光检测器.结果:测得自制PEI衍生物的重均分子量(Mw)为5093,数均分子量(Mn)为2090、Z均分子量(Mz)为11031,分布宽度(Mw/Mn)为2.44.结论:高效凝胶色谱法操作简单、灵敏度高,适合于快速、简便地测定PEI及其衍生聚合物的分子量及其分布.     

凝胶色谱法

概述凝胶色谱(凝胶层析)是一种液体柱色谱。利用这种方法,可根据样品中各种物质分子量大小的不同,将样品通过多孔胶床来达到分离的目的。这种方法有许多名称,如凝胶过滤,凝胶渗透色谱,排阻色谱,有限扩散色谱等。目前名称尚未完全统一。由于凝胶色谱有条件温和、方法简便、操作方便、分离范围广泛、重复性强、回收率高等优     

菊糖的提取及纯化

菊糖是一种水溶性的功能性天然多糖,可用热水从菊芋中提取.本实验对菊糖的提取工艺进行了研究,比较了提取温度、固液比、提取次数、提取时间四个因素对提取率的影响,并采用正交设计法优化提取条件,确定了最佳的提取工艺,且对菊糖的纯化作了较为深入的研究.     

1株产菊粉酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化

筛选分离可以分解菊芋中菊糖的菌株。采用平板稀释法从土样中筛选出能够分解菊芋中菊糖的菌株,并从中得到1株酶活较高的真菌A-15,经菌落观察及采用18S rRNA基因测序鉴定,研究不同因素对菌株菊粉酶活力的影响。通过对分离得到的菌株形态观察及分子鉴定后,确定菌株A-15为黑曲霉(Aspergillus niger)。通过正交试验优化菌株A-15的发酵条件分析结果显示,菌株A-15产菊粉酶最优条件:最佳氮源为酵母膏,氮源量1.0%,氯化钠0.5%,磷酸氢二钾0.3%,菊芋汁定容,初始pH 6,培养温度30℃,摇瓶发酵6 d。结果表明菌株A-15具有很好地降解菊芋中菊糖的性能。     

配位体交换色谱法测定槐米废渣水解液单糖成分

利用生物质转化成糖研究近年来备受关注,为给工业化高效利用槐米废渣提供检测技术,本文建立了槐米废渣水解转化糖液中4种主要单糖的铅(Pb~(2+))配位体交换高效液相色谱分析方法并采用离子色谱法验证了方法的可行性;实验比较了Pb~(2+)和Ca~(2+)两种不同柱内抗衡离子对组分分离的影响,最终利用铅配体方法对实际样品进行了测试。方法分离柱采用Sepax Carbomix Pb-NP 5(300×7.8 mm ID,5μm,8%交联度)色谱柱,柱温75℃;流动相采用超纯水,流速0.50 m L/min;检测器采用示差折光检测器,检测器温度为30℃;样品采用活性炭固相萃取小柱脱除色素。结果表明,组分葡萄糖、木糖、半乳糖和阿拉伯糖在25 min内完成分离,在0.2~20.0 mg/m L浓度范围内呈现良好的线性关系,方法检测限在1.94~1.98μg/m L之间;槐米废渣水解液中阿拉伯糖平均含量大于67%,具有较高回收价值。方法样品前处理简便,重现性好,结果准确,测试成本低。     

化妆品中苯氧乙醇和辛酰羟肟酸含量的测定方法

建立了高效液相色谱定量分析方法用于检测化妆品中苯氧乙醇和辛酰羟肟酸.以甲醇-乙腈-水溶液为流动相,InertSustain-C18色谱柱分离,二极管阵列检测器检测,以保留时间和紫外吸收光谱定性外标法定量.结果表明,苯氧乙醇和辛酰羟肟酸分别在15 mg/L～2000 mg/L(r2=0.9999)、50 mg/L～200...     

产菊糖酶克鲁维酵母Y-85的固定化研究

把产菊糖酶的克鲁维酵母Ｙ—８５细胞固定于不同的载体上,如：脱乙酰几丁质、聚乙烯醇—海藻酸钠、琼脂、海藻酸钠、明胶等,进行连续发酵以生产高果糖浆。经过对凝胶的机械强度、固定化细胞的最适作用条件及稳定性、酶活保留率和制作工艺等综合比较,确认明胶是较好的载体。分批反应１０批次,固定化细胞酶活力及机械强度保持良好,底物转化率在９０％左右;以菊糖浓度３．２％的菊芋粉抽提液过反应柱进行连续反应,在稀释率Ｄ为０．４４ｈ－１时,其还原糖生产力为１２．５ｇ／ｌ·ｈ,转化率９２％。５５℃条件下,连续反应３０ｄ后,底物转化率由起初９４％降至８２％,酶活力只损失１２％。     

高效液相色谱法同时测定五指山绿茶中5种儿茶素类成分

建立了同时测定五指山绿茶中表儿茶素(EC)、儿茶素(C)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸(ECG)和表没食子儿茶素(EGC)的高效液相色谱法。色谱条件为:HIQ SIL C18 V色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-1.5%冰乙酸体系为流动相进行梯度洗脱;紫外检测器,检测波长280 nm;流速为1.0 mL.min-1;进样量10μL;柱温为35℃。在优化条件下,5种儿茶素类成分的浓度分别在15~300、10~200、10~200、20~400和10~200μg.mL-1与色谱峰面积之间的线性关系良好;平均回收率在96.20%~99.64%之间;RSD在1.12%~2.24%之间。该方法简便、快速、准确,可用于绿茶中儿茶素的质量控制。     

魔芋中神经酰胺类物质的HPLC-ELSD分析及其含量测定

建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析神经酰胺的方法并进行了含量的测定.色谱柱:ZORBZX Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm),洗脱方法:梯度洗脱,柱温:35℃,流动相:甲醇/水,流速:1ml/min;检测器:蒸发光散射检测器,漂移管温度:40℃,氮气流速:1.5L/min.系统探讨了梯度洗脱的起始浓度、洗脱的时间和洗脱梯度的程序设置,最佳的梯度洗脱条件为5min内,甲醇浓度从60%线性增加为90%,从5min到25min,甲醇浓度线性增加为95%,在此条件下样品和标准品的分离色谱峰对称性较好.随后测定了各种样品中神经酰胺的含量,并进行了方法学验证,结果神经酰胺在0.2～2μg之间线性关系良好,最低检测限为0.01mg/ml,R2=0.9992;平均回收率为93.3%,RSD=1.65%(n=5).本法灵敏、方便、准确,重现性好,可用于魔芋神经酰胺类物质的分离及其含量的测定.     

荔枝壳多糖特性研究

多糖是荔枝壳的重要活性成分,本研究采用阴离子交换柱和凝胶过滤柱对荔枝壳多糖进行分离纯化。凝胶渗透色谱测定其分子量为14000 Dal。通过气相色谱测定其单糖组成为甘露糖、半乳糖和少量的阿拉伯糖,分子链由1,2键、1,3键和1,6键组成,不含1,4键。红外光谱分析表明甘露糖以β-D-甘露糖形式存在,不含羧基基团。     

离子色谱法检测食品中硼酸及硼酸盐

通过优化试验对离子色谱法检测食品中硼酸及硼酸盐的工艺进行了研究,探讨了取样量、超声提取时间、滤膜的选择、OnGuard RP柱和Ag柱的活化条件为：分析柱的选择、淋洗液的选择、进样体积和流速的选择,确定了离子色谱法检测食品中硼酸及硼酸盐的最佳检测条件,淋洗液：甲基磺酸（3mmol/L）/甘露醇（60mmol/L）;再生液：四甲基氢氧化铵（25mmol/L）/甘露醇（15mmol/L）;色谱柱：IonPac-borate分析柱,250*9mm或等效柱。检测器：电导检测器。抑制器：AMMS-ICE300,4mm微膜抑制器;柱温：25℃;流速：0.8mL/min;进样量：300μL。     

菊芋叶总黄酮提取工艺优化及含量动态变化

以菊芋叶为原料,研究了甲醇体积分数、提取温度、提取时间、固液比等因素对菊芋叶总黄酮含量的影响,在单因素试验的基础上,以L9(34)正交试验方法优化总黄酮提取工艺,然后在该工艺条件下研究不同采收时期对菊芋叶总黄酮含量的影响。结果表明:甲醇体积分数、提取温度、提取时间、固液比对菊芋叶总黄酮提取含量均有影响,最佳工艺组合为:用体积分数70%的甲醇,固液比1:30(g/mL),80℃条件下提取2 h,在此条件下,菊芋叶总黄酮含量为7.03%。采收时间对菊芋叶总黄酮含量影响较大,9月份总黄酮含量最高。     

天然牛磺酸的离子色谱分析方法研究

通过考察实验的稳定性、精确度及回收率等,研究不同氨基酸对牛磺酸检测的干扰,成功建立了离子色谱法分离牛磺酸梯度洗脱程序,探索出一种更高效、更快速、更灵敏的离子色谱检测方法。色谱柱为氨基酸分析柱(Amino Pac PA-10,2 mm×250 mm)、氨基酸保护柱(Amino Pac PA-10 2 mm×50 mm);流动相组成为流动相A(纯水)、流动相B(250 mmol/L Na OH溶液),流动相C(1.0 mmol/L乙酸钠(Na OAc)),进行梯度洗脱;流速为0.24m L/min;柱温为30℃;采用积分脉冲安培检测器检测;进样量为25μL。该法优化了牛磺酸的检测时间,提高了牛磺酸的检测效率,可运用于实验和生产中。     

氮磷互作对菊芋块茎产量和品质的影响

为探明肥料互作对菊芋产量及品质的影响,以“南芋1号”为试验材料,通过正交田间试验,对氮(N)、磷(P)及其交互作用对菊芋块茎产量和品质的影响进行了研究.结果表明:N、P对菊芋块茎产量、干物质含量,总糖、还原糖和菊糖含量具有极显著影响(P＜0.01);N、P交互作用对菊芋块茎产量、干物质和还原糖含量有显著影响(P＜0.05),对块茎总糖和菊糖有极显著影响(P＜0.01);当磷肥为135 kg·hm-2时,与氮肥存在交互效应;当氮肥低于180 kg·hm-2时,为正交互效应,表现出协同促进作用,氮肥高于180 kg·hm-2时,为负交互效应,表现出拮抗作用;当氮肥为180 kg·hm-2、磷肥为135 kg·hm-2时,氮磷正交互效应增强,氮磷表现出协同促进作用,菊芋块茎产量最高,且菊芋块茎的干物质含量、总糖、还原糖和菊糖含量达到最高值,即菊芋块茎能达到最高产量和最优品质.综上,在山东莱州地区菊芋大田种植的基础施肥量宜为纯氮为180 kg·hm-2、P2O5为135 kg·hm-2.     

反相高效液相色谱法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二糖甙

采用高效液相色谱法建立同时测定杜仲中松脂醇二葡萄糖甙(PDG)和丁香脂素二糖甙(SDG)的方法。色谱条件为:色谱柱为VP-ODSC18柱(150mm×4.6mm,预柱10mm×4.6mm);流动相为甲醇∶水(v/v)=30∶70;流速1mL/min;柱温25℃;进样量10μL;检测波长227nm。松脂醇二葡萄糖甙在和丁香脂素二糖甙进样量分别在30.8~154.0μg/mL之间,SDG的进样量在26.4~88.0μg/mL之间时,线性关系良好;平均回收率分别为99.8%,98.6%。结果表明该方法快速、准确、简单,可用于杜仲中松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二糖甙的定量测定。     

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗及b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量检测方法的建立与验证

目的建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并加以验证。方法参照《中华人民共和国药典》三部(2010年版)中"毛细管柱顶空进样等温法",优化色谱条件,建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并对该方法进行验证及初步应用。结果色谱条件为顶空平衡温度70℃,顶空平衡时间40 min,汽化室温度200℃,柱箱温度40℃,检测器温度250℃,进样量为1.0 m L,载气(高纯氮气)流量1.3 m L/min,尾吹气(高纯氮气)流量5 m L/min,分流比1∶1。丙酮质量分数在2×10-6~5×10-5范围内具有良好的线性关系(r0.99)。丙酮的平均回收率及相对标准偏差(RSD)分别为86.05%~105.11%及2.1%~9.5%,检测限为2×10-6,定量限为3×10-6。结论本方法的线性、特异性、准确性、重复性等均符合规定,方法准确、稳定,可用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测。