ova和HPV E_6及其蛋白滴鼻免疫增强小鼠抗体水平

[目的]探讨ova和HPV E_6及其蛋白通过滴鼻共免疫的方式提高抗体水平的有效性。[方法]选择ova和OVA蛋白,HPV E_6和HPV E_6蛋白滴鼻共免疫ICR小鼠,检测免疫后小鼠血清中的Ig G、Ig G1、Ig G2a和s Ig A,生殖道黏液中s Ig A的表达水平。[结果]ova及其蛋白共免疫组血清中的抗体Ig G及其亚类、血清和生殖道洗液中的s Ig A与对照组相比差异极显著(P0.01),初免后第28 d,血清中的Ig G抗体滴度达到28万。HPV E_6与其蛋白共免疫组血清中的抗体Ig G及其亚类、生殖道洗液中的s Ig A与对照组相比差异极显著(P0.01),初免后第35 d,血清中的Ig G抗体滴度达到25万。[结论]用ova和HPV E_6及其蛋白通过滴鼻共免疫,产生高水平抗体,共免疫组的抗体水平比基因疫苗组增强了近百倍,比蛋白免疫组增强了2.5倍,表明这种免疫方式能够有效激发黏膜免疫反应和系统免疫反应。     

人血清中肺炎链球菌荚膜多糖IgG抗体定量ELISA的初步验证

目的对肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测进行初步验证。方法以不同生产企业相同型别的12F、19A、22F及33F型荚膜多糖为包被抗原,用肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,对人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体进行定量检测,并对该方法的线性、检测限、检测范围、准确度、精密度、特异性进行初步验证。结果该方法检测13份质控血清的12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的范围分别是0.02~4.38 ng/m L、0.14~34.68 ng/m L、0.10~25.20 ng/m L和0.12~29.78 ng/m L,r2均0.99,最低检测限分别为0.35 ng/m L、0.37 ng/m L、0.44 ng/m L和0.88 ng/m L。准确度为71.15%;试验间CV值均20%;特异性均85%。结论肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测,需对准确度、精密度和特异性进一步验证。     

长期运动训练对机体血清中AMPK 水平的影响

目的:探讨长期运动训练对机体血清中磷酸化腺苷活化蛋白激酶(AMPK)水平的影响.方法:采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法( ELISA)测定29名专业运动员(运动组)和26名健康志愿者(对照组)血清中AMPK水平.结果:运动组和对照组血清中AMPK浓度值分别为211.00±13.68U/L和9.70± 2.45 U/L,组间比较具有显著性差异(P＜0.01).结论:长期运动训练能显著提高机体血清中AMPK水平,有效增加组织的能量代谢.     

枸杞多糖对甲型H1N1流感裂解疫苗黏膜接种的免疫增强作用

探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对不同剂量甲型H1N1流感裂解疫苗黏膜免疫的佐剂效力。设单独免疫LBP组和不免疫组作为对照,BALB/c小鼠以滴鼻方式免疫两次,间隔三周,二次免疫后两周收集小鼠血清、鼻洗液和脾脏淋巴细胞。结果显示血清中甲流特异性IgG和HI抗体滴度与接种疫苗剂量呈正相关,LBP的添加可提高体内抗体水平。高剂量组小鼠鼻洗液中也检测到特殊异性sIgA。单独疫苗组和添加佐剂组均能在体内诱导产生IgG1和IgG2a,所有组别IgG1抗体水平均略高于IgG2a,表明滴鼻接种裂解疫苗诱导Th1/Th2混合型免疫,LBP对Th1和Th2型免疫反应均有增强作用。高剂量疫苗添加LBP佐剂组小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ水平显著高于其他组别,表明其在小鼠体内诱导了较强烈的细胞免疫反应。以上实验结果均证实LBP可以作为佐剂增强甲流裂解疫苗经黏膜途径免疫时的免疫效力。     

类轮状病毒2/6/7颗粒经腹腔和直肠接种在小鼠体内诱导免疫原性的研究

<正>以前我们使用稳定的细胞系研制了类轮状病毒(RV)VP2、VP6和VP7蛋白(VLP2/6/7)颗粒。为评估其免疫原性,我们评估腹腔和直肠免疫的BALB/c小鼠VLP2/6/7诱导的体液及细胞因子应答。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和相对定量(RQ)实时PCR来分别评估血清抗体(Ig G和Ig A)的水平及脾细胞中IL-6、IL-10和IFN-γ的mRNA水     

银鲫口服嗜水气单胞菌疫苗的免疫和免疫组化研究

室内恒温条件下(水温24±1℃)分别用微胶囊疫苗与全细胞疫苗口灌免疫银鲫,口灌免疫后每周取血和前、中、后肠肠黏膜,间接ELISA检测其抗体效价。结果发现:微胶囊疫苗组鱼血清抗体效价较高,峰值为1∶80,且维持时间较长;各肠段的黏膜抗体中,后肠黏膜抗体效价最高,微胶囊疫苗组峰值达1∶320,前肠的肠黏膜抗体效价也有一定的水平为1∶40;肠道免疫组化试验也得到相似结果:在不同时间对前、中、后肠切片进行免疫组化染色,从光镜下观察到肠黏膜外层和黏膜下层都有阳性着色,以包裹全菌苗为最多,未包裹菌苗较少。同时进行两组疫苗的池塘网箱免疫试验,结果表明:微胶囊疫苗组与全细胞疫苗组的相对百分成活率分别为61.1%和50%,微胶囊疫苗组略高于全细胞疫苗组;口服免疫后两组鱼血清中均能产生较高的抗体效价,在30d左右抗体效价最高达1∶512,能维持较长时间约8—10个月,但两者差异不显著。     

长沙市2014年健康人群麻疹抗体水平分析

目的了解长沙市健康人群麻疹血清抗体水平,为制定免疫策略提供依据。方法按照整群分层随机抽样的原则,在长沙市所辖区、县按年龄分层随机抽取调查对象。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测麻疹Ig G抗体;数据采用SPSS 13.0处理,用描述性流行病学方法进行分析。结果共采样调查275人,麻疹抗体阳性率为96.7%。不同性别麻疹抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。<1岁组的麻疹Ig G抗体阳性率偏低,为77.4%;3~、5~、10~及≥15岁组的阳性率均为100.0%;1~岁组和7~岁组次之,分别为98.2%和97.3%。有麻疹类疫苗免疫史人群的麻疹抗体阳性率高于无麻疹类疫苗免疫史人群,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论长沙市健康人群麻疹血清抗体阳性率较高,基本形成了预防麻疹的免疫屏障。     

采用免疫亲和色谱方法从骆驼血清中纯化抗CD47特异性抗体

本研究从骆驼血清中制备抗CD47特异性抗体并分析其与重组蛋白CD47和EC9706细胞膜表面CD47结合情况。从骆驼血清中纯化出总Ig G,再利用偶联上CD47的CNBr琼脂糖树脂免疫亲和纯化出抗CD47特异性抗体,通过ELISA和Western blotting验证其结合情况,通过细胞ELISA鉴定抗CD47特异性抗体与食管癌细胞膜表面CD47结合。结果显示通过两步免疫亲和色谱成功获得抗CD47特异性抗体,ELISA和Western blotting说明该抗体与重组蛋白CD47有强的结合活性和特异性,细胞ELISA检测抗CD47抗体浓度在20μg/mL时与EC9706细胞表面CD47有较好的结合。本研究首次利用免疫亲和色谱方法从骆驼血清中获得抗CD47特异性抗体,并与食管癌细胞有一定的结合活性,为肿瘤靶向治疗提供了可能。     

妊娠期高血压患者血清热休克蛋白70水平与心功能及免疫球蛋白的关系研究

目的:探究妊娠期高血压患者血清热休克蛋白70(HSP70)水平与心功能及免疫球蛋白的关系。方法:选择2017年4月至2018年4月在陕西省人民医院诊治的200例妊娠期高血压患者作为妊娠期高血压组,同时选择同期在我院进行孕检的200名健康孕妇作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清HSP70水平,采用全自动生化分析仪检测免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白M(Ig M)、免疫球蛋白A(Ig A)、免疫球蛋白D(Ig D)和免疫球蛋白E(Ig E)水平,采用多普勒超声心动图监测两组的左心室后壁厚度(LVPWT)、左心室舒张末期内径(LVEDD)和室间隔厚度(IVST)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)和每搏指数(SVI),计算左心室质量(LVM)、二尖瓣舒张早期血流速度峰值与二尖瓣环侧壁舒张早期运动峰速度的比值(E/Em)、舒张早期与舒张晚期血流速度峰值的比值(E/A)。采用spearman相关性分析血清HSP70水平与血清免疫球蛋白水平及心功能指标的相关性。结果:与对照组相比,妊娠期高血压组的血清HSP70水平明显升高,而Ig G和Ig M水平明显下降,并且LVESD、LVEF、E/A也明显下降(P0.05)。血清HSP70水平与Ig G、Ig M、LVESD、LVEF、E/A均呈负相关性(P0.05)。结论:妊娠期高血压患者的血清HSP70水平明显升高,并且血清HSP70水平与妊娠期高血压患者免疫功能和心功能下降存在相关性,在妊娠期高血压患者的诊断和治疗中具有一定临床价值。     

秀丽线虫天然粗提物对哮喘治疗效果研究

探讨秀丽隐杆线虫天然粗提物的提取及对哮喘动物治疗效果。将线虫经离心、洗涤、超声乳化、去除内毒素等方法获得线虫粗提物(CEC),以鸡卵清蛋白(OVA)致敏BALB/c雌性小鼠建立哮喘动物模型,用CEC与OVA混合物(CE)对哮喘动物治疗,以缓冲液(PBS)和OVA为对照,用ELISA法检测血清Ig E、Ig G1、Ig G2a抗体,分类计数支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞,切取肺组织观察病理。研究显示,CE组与OVA组比较,血清Ig E、Ig G1、Ig G2a差异有统计学意义(P0.05),BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞等差异有统计学意义(P0.05)。线虫天然粗提物对哮喘动物有一定治疗效果。     

人类肠道病毒71型亚单位疫苗壳聚糖佐剂作用的研究

为了解人类肠道病毒71型(EV71)重组保护性衣壳蛋白(rVP1)亚单位疫苗壳聚糖佐剂的作用,本研究利用rVP1蛋白与壳聚糖佐剂制备的疫苗口服免疫新西兰白兔,通过ELISA方法检测兔血清、粘膜洗液(小肠、鼻腔和肺)及粪便中特异性IgG、IgA抗体水平,中和试验检测血清中和抗体滴度,并通过抗原刺激体外培养的兔脾淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平评价rVP1口服免疫效果。结果显示,单纯口服rVP1蛋白仅可诱导产生较低水平的血清IgG和粘膜IgA抗体,而含佐剂疫苗组与单纯抗原免疫组差异显著,并可诱导产生中和抗体。细胞免疫检测结果显示rVP1含佐剂组兔脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4水平明显高于未加佐剂组。本研究为研制EV71VP1口服疫苗奠定了基础。     

口服脂质体包裹Ag85A DNA疫苗诱导抗体的产生

制备脂质体包裹的Ag85A口服DNA疫苗,并观察小鼠口服后所诱生的抗体产生情况。用脂质体包襄重组质粒pcDNA3．1／mye—HisA—Ag85A制备口服DNA疫苗,并用脂质体包裹空质粒pcDNA3．1／myc—HisA作为对照。将C57BL／6小鼠随机分为3组,即生理盐水组、空质粒组和重组质粒DNA疫苗组。分别将生理盐水、空质粒和重组质粒DNA疫苗以灌胃方式投给各组小鼠,共免疫3次,每次间隔14d,末次免疫后14d处死小鼠,ELISA法检测血清中Ag85A特异性抗体水平,放射免疫法测定肠组织中分泌型IgA（sIgA）含量。重组质粒组血清中Ag85A特异性抗体滴度为1：160,空质粒组和生理盐水组血清中均未捡出Ag85A特异性抗体。重组质粒组肠组织中slgA含量（0．3761±0．0456）μg／mL较空质粒组（0．2374±0．0414）μg／mL和生理盐水（0．1993±0．0899）μg／mL组显著增高（P〈0．05）,而空质粒组和生理盐水组未见有意义的变化（P〉0．05）。口服脂质体包裹Ag85ADNA疫苗可诱导外周特异性抗体的产生和肠道黏膜局部sIgA的水平的升高。     

包裹R848的PS仿生脂质体增强H7N9流感病毒灭活疫苗的黏膜免疫效应

流感病毒是呼吸道传染病毒,增强疫苗接种诱导的黏膜免疫反应对于预防流感尤为重要。目前,流感病毒疫苗主要为病毒灭活疫苗,且通过肌肉注射接种,很难诱导产生黏膜免疫。为增强流感病毒灭活疫苗的黏膜免疫效果,本文利用薄膜分散法将与肺表面活性物质（PS）相似的磷脂以及胆固醇制备成包裹瑞喹莫德（R848）的PS脂质体（PS-R848）做黏膜佐剂,将该脂质体与H7N9流感病毒灭活疫苗混合后经鼻腔免疫BALB/c雌性小鼠,检测免疫指标及攻毒后的保护效果。与灭活疫苗添加R848组相比,血清中的免疫球蛋白G(Ig G)以及分型抗体Ig G1与Ig G2a效价、血凝抑制（HI）效价和支气管肺泡灌洗液分泌型Ig A(s Ig A)效价显著提高;诱导的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)与IL-4的分泌量也显著增加。用同亚型流感病毒攻毒小鼠后的肺部病毒滴度较单独疫苗组降低,存活率达到100%,最大体重丢失率较单独疫苗组低且有显著差异。以上结果表明,R848仿生PS-R848作为黏膜佐剂可以有效提高H7N9流感病毒灭活疫苗的免疫效果,为开发流感病毒的黏膜疫苗做了数据积累。     

PolyI:C协同IL-15作为小鼠卵透明带3基因疫苗佐剂黏膜免疫效果的观察

目的:以Toll样受体拮抗物Poly I:C协同细胞因子IL-15作为免疫佐剂,通过滴鼻方式免疫ICR小鼠,对卵透明带3(murine zona pellucida,m ZP3)基因疫苗的免疫增强效果进行观察。方法:将Poly I:C和IL-15单独或协同与用壳聚糖(chitosan,Chi)包裹的m ZP3基因疫苗滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗m ZP3抗体和生殖道黏液、肺洗液中s Ig A的水平,MTT法检测淋巴细胞增殖,小鼠的平均窝仔数和生育率检测抗生育情况,组织学观察小鼠的卵巢病理切片。结果:Poly I:C协同IL-15共同免疫组能够显著提高免疫后小鼠抗m ZP3抗体的水平,促进淋巴细胞的增殖,平均窝仔数和生育率显著降低,小鼠的卵巢发育异常。结论:Poly I:C协同IL-15能够增强m ZP3基因疫苗的免疫效果,并在一定程度上降低小鼠生育率。     

2019年河南省健康人群流行性脑脊髓膜炎A群、C群抗体水平监测

目的了解2019年河南省健康人群流行性脑脊髓膜炎(epidemic cerebrospinal meningitis,简称流脑)A群、C群抗体水平状况,为科学制定防控策略提供依据。方法采用分层随机抽样的方法采集健康人群血清,用间接ELISA检测流脑A群、C群抗体浓度。结果共检测1 689份健康人群血清标本,其中流脑A群抗体阳性率为54.23%,抗体质量浓度中位数为2.18μg/mL;流脑C群抗体阳性率为51.51%,抗体质量浓度中位数为2.07μg/mL。不同地区之间流脑A群、C群抗体水平的差异、阳性率的差异均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄组之间流脑A群、C群抗体水平的差异、阳性率的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论河南省健康人群流脑A群、C群抗体水平和阳性率都比较低,有发生流脑暴发和流行的血清学基础,应加强流脑监测和预防接种的管理工作。     

中药地黄饮子对小鼠抗体激发水平的影响

目的:探讨地黄饮子对小鼠抗体激发水平的影响。方法:将40只经卵核蛋白免疫过的小鼠随机分A、B两组,分别灌服地黄饮子和葡萄糖,1次/d,每次0.5mL只,连续7d后,加强免疫,再经7d,用ELISA法检测血清中相应抗体生成水平。结果:与葡萄糖组比较,地黄饮子组小鼠抗体水平升高,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:地黄饮子有可能促进小鼠抗体激发水平和免疫水平的提高。     

中药地黄饮子对小鼠抗体激发水平的影响

目的：探讨地黄饮子对小鼠抗体激发水平的影响。方法：将40只经卵核蛋白免疫过的小鼠随机分A、B两组,分别灌服地黄饮子和葡萄糖,1次/d,每次0.5mL只,连续7d后,加强免疫,再经7d,用ELISA法检测血清中相应抗体生成水平。结果：与葡萄糖组比较,地黄饮子组小鼠抗体水平升高,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：地黄饮子有可能促进小鼠抗体激发水平和免疫水平的提高。     

重组抗CD52人源化单克隆抗体ELISA检测方法的建立

目的:建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体的含量。方法:采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD52单克隆抗体进行定量。以猴血清吸附的羊抗人Ig G作为包被抗体,稀释的猴血清吸附的羊抗人Ig G-HRP(二抗)作为检测抗体,加入底物显色剂后在酶标仪上读取D450nm值。结果:建立并确证了检测重组抗CD52单克隆抗体的ELISA方法,方法的线性范围为7.81~500 ng/m L,定量下限为7.81 ng/m L,板内及板间精密度和准确度均在±15%以内,室温、冻融、稀释效应稳定性良好。结论:方法学验证表明ELISA法测定食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体浓度的特异性、精密度和准确度均满足新生物制药临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于重组抗CD52单克隆抗体的检测。     

EB病毒DNA聚合酶基因的表达与纯化及其在鼻咽癌病人诊断中的应用

以Epstein-Barr病毒(EBV)DNA聚合酶为抗原,建立了简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌诊断方法.构建原核表达载体pRSET-DNA聚合酶及其亚克隆pRSET-A1和pRSET-A2,在BL21(DE3)中表达的产物,经Western-blot检测其抗原性并用于检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人血清中的抗体.在NPC病人血清中存在抗EB病毒DNA聚合酶的IgG抗体,并证明DNA聚合酶的抗原性主要集中于后2/3片段(A2)上.Western-bolt检测A2/IgG抗体的敏感性和特异性分别为80%和100%.对46份NPC病人血清和46份非NPC头颈癌症病人血清,用ELISA检测A2/IgA,敏感度为89%,特异度为93%.初步建立了ELISA检测NPC病人血清中A2/IgG抗体的方法,获得较高的敏感性和特异性.     

系统性红斑狼疮患者血清MBL水平变化及其临床意义

目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中甘露糖结合凝集素（MBL）水平与SLE的临床表现、经典的血清学指标及疾病活动性指数的相关性。方法：应用固相酶联免疫吸附（ELISA）法检测54例（其中活动期39例、缓解期15例）SLE患者和45名健康志愿者外周血MBL水平,同时检测SLE患者外周血抗dsDNA抗体、C3补体、白细胞计数及循环免疫复合物（CICs）水平,并记录SLE患者主要临床症状（肾脏系统受累、神经系统受累、严重感染等）,疾病活动度用SLEDAI记分。结果：系统性红斑狼疮患者外周血MBL水平显著低于健康志愿者（P〈0．01）;特别是活动期SLE患者血清MBL水平明显降低,与缓解组比较差别具有统计学意义（P〈0．01）;SLE患者血清MBL水平与SLEDAI、抗dsDNA抗体、CICs水平呈负相关,与白细胞计数及C3补体水平呈正相关;并发严重感染的SLE患者组血清MBL水平显著低于无受累组（P〈0．01）。结论：SLE患者血清MBL水平明显降低,血清MBL水平与SLEDAI、抗dsDNA抗体、C3水平、CIC水平、白细胞水平之间明显相关,血清MBL水平较低的患者更易发生比较严重的感染,血清MBL水平可能是SLE潜在生物学标记。