基于磁珠法的荧光定量PCR检测HBV-DNA临床应用评价

目的评价基于磁珠法的荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床应用。方法选用磁珠法定量检测试剂和煮沸法定量检测试剂,对一系列临床患者血清标本进行检测,比较两种试剂检出率的差异;通过浓度为1×108的样本的梯度稀释结果考察两者的灵敏度和线性范围。结果 68例临床样本中,磁珠法试剂检测的阳性率为69.12%,煮沸法试剂检测的阳性率为32.35%(P0.05);两种试剂对103IU/m L阳性样本检测结果:y=0.913x-0.261,r=0.919;磁珠法线性范围3.9×(101~108),灵敏度39 IU/m L,煮沸法线性范围2.4×(102~107),灵敏度240 IU/m L。结论磁珠法核酸提取试剂线性范围宽,灵敏度高,临床检出率明显高于煮沸法,对于高浓度和低浓度样本都能准确的定值,适合于乙肝治疗后监测与体检筛查。     

Y染色体短串联重复序列微流控芯片复合扩增检测体系研究

目的 构建Y染色体短串联重复序列（Y-STR）微流控芯片扩增检测试剂,并进行性能验证,实现Y-STR基因座的快速全集成检测。方法 使用Y-STR微流控芯片检测体系,对其灵敏度、成功率和分型准确率、峰平衡性、精准性和准确性、检材适应性、混合物检测能力和抗抑制性进行验证评估。结果 DNA标准品9948的模板量≥8 ng,血卡片数≥3片以及口腔拭子刮擦次数≥7次时可获得Y-STR完整分型;165份样本的全集成检测成功率为91.52%,分型准确率为99.74%;不同荧光通道之间的峰高比值为89.81%;10次运行的等位基因分型标准品的片段大小标准差均在0.5 bp以内,20份样本全集成检测的等位基因片段和相应的等位基因标准品之间的片段准确性均在0.5 bp以内;能够对口腔拭子、血卡、唾液卡、烟蒂、血棉签、布片精斑等检材进行准确分型;混合样本中较小贡献者与较大贡献者在1∶3的比例时可获得完整基因分型;在不同浓度的腐殖酸（50～400 mg/L）、靛蓝（20～100 nmol/L）、血红蛋白（100～500μmol/L）等抑制物的干扰下,该体系可获得完整基因分型。结论 该体系可应用于国产Quick...     

四种丙型肝炎病毒抗体试剂检测方法的性能评估

对血液筛查的四种丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)抗体试剂检测方法的性能进行评估。方法采用协作标定方式,应用四种检测方法(间接ELISA法、双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法)16种HCV抗体试剂,对经确证筛选出的70份(HCV抗体阳性35份、阴性35份)血浆样本进行检测,通过分析阳性、阴性符合率,评估四种方法 HCV抗体试剂的性能。结果间接ELISA法试剂检测阳性符合率为88.6%(31/35)~94.3%(33/35),双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法试剂检测阳性符合率为91.4%(32/35)~94.3%(33/35),四种检测方法 HCV抗体试剂阳性符合率之间的差异无统计学意义(P0.05);间接ELISA法和间接CLIA法试剂弱阳性样本检出率为11.4%(4/35)~31.4%(11/35),双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂弱阳性样本检出率为5.7%(2/35)~11.4%(4/35),四种检测方法 HCV抗体试剂对弱阳性样本的检出率之间的差异有统计学意义(P0.05);间接ELISA法试剂检测阴性符合率分别为94.3%(33/35)~100%(35/35),间接CLIA法试剂阴性符合率分别为94.3%(33/35)~97.1%(34/35),双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂阴性符合率均为97.1%(34/35),四种检测方法 HCV抗体试剂阴性符合率之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论四种检测方法 HCV抗体试剂的性能基本一致,不同方法各有优缺点,建议应用多种检测方法对弱阳性样本进行确认检测。     

RT套式PCR检测血浆HCV RNA及与抗HCV检测的比较

应用微量血清热变性法提取核酸,逆转录套式聚合酶链反应(RT-nest PCR)检测血浆HCV RNA,并与抗HCV ELISA检测结果比较,对HCV RNA阳性标本进行HGV RNA的筛查.结果在32例抗HCV阳性和20例抗HCV阴性血浆中,HCV RNA分别检出18例和2例,总符合率为70%,20例HCV RNA阳性者中有2例合并感染HBV,1例合并感染HGV.证明血浆样本中抗HCV与HCV RNA间存在很大的相关性.     

自然人群乙型肝炎病毒慢性感染者HBV DNA的流行病学分析

目的了解寿光市自然人群乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染者HBV DNA的流行病学特征,为乙型肝炎的防治提供依据。方法采集2012年寿光市3个镇街道居民体检发现的HBs Ag阳性者静脉血5 m L,以实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测血清HBV DNA载量,分析HBV DNA与性别、年龄、有无乙肝/肝癌家族史、密切接触史、输血史等因素的相关性。结果在2 026例HBs Ag阳性感染者中,HBV DNA阳性率为49.41%(1 001/2 026),HBV DNA载量的平均值为6.27×107拷贝/m L。其中男性HBV DNA阳性率为53.28%(585/1 098),女性为44.83%(416/928),差异有统计学意义(χ2=14.370,P<0.01);HBV DNA均值男性为(6.72×107±2.07×108)拷贝/m L,女性为(5.56×107±1.44×108)拷贝/m L,差异无统计学意义(t=0.447,P>0.05)。HBVDNA阳性率与年龄呈负相关(r=-0.983),与HBV感染的主要影响因素乙肝/肝癌家族史、密切接触史、输血史等均无关。结论 HBV DNA阳性率与慢性HBV感染者的性别、年龄有关,与HBV感染的主要影响因素无关。     

阳江市健康人群乙型肝炎血清流行病学调查

目的了解阳江市健康人群乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)水平,评价乙型肝炎疫苗免疫效果。方法采用整群随机抽样方法,在阳江市辖区内随机抽取20个乡镇的常住健康人群为调查对象。采用电化学发光免疫法定量检测抗-HBs水平,运用SPSS18.0和Excel 2007软件进行数据整理和分析。结果共采集1 054人份血清进行检测,人群中乙肝疫苗接种率为94.88%,抗-HBs阳性率为63.47%、抗-HBs高应答率及GMT分别为29.51%和2 3.47 m IU/m L。乙肝疫苗接种率显示,随着年龄的增长疫苗接种率越低;20岁以下和20岁以上人群疫苗接种率分别为98.35%和54.22%,且男性高于女性;各地区间疫苗接种率差异无统计学意义(χ2=5.99,P=0.11)。抗-HBs阳性率显示,1~14岁儿童抗-HBs阳性率为63.00%。其中,1~岁组儿童最高为87.20%,7~岁组最低为54.56%;江城区抗-HBs阳性率最高(70.61%),阳西县最低(56.60%)。1岁以下儿童的抗-HBs应答率和GMT均最高,分别为61.22%和(91.56±2.15)m IU/m L。5~岁组最低,分别为13.74%和(12.44±1.46)m IU/m L,差异均有显著的统计学意义(χ2=57.31,P=0.00,F=5.77,P=0.00)。结论阳江市健康人群乙肝疫苗接种率高,初步形成免疫屏障。积极开展20岁以下人群的加强免疫和成人的乙肝疫苗的接种工作。     

内蒙古呼和浩特地区丙型肝炎病毒基因型分布

为了解内蒙古呼和浩特地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型的分布特征,为本地区丙型肝炎的治疗、预防提供基础数据资料。收集呼和浩特地区2014年1月至2015年1月就诊的门诊和住院丙型肝炎患者血清采样标本149份,均为HCV抗体检测阳性且HCVRNA定量检测阳性。QIAGEN柱式病毒RNA提取法提取HCV RNA,反转录成cDNA,巢式PCR法扩增HCVNS5B区,对扩增片段进行测序,在NCBI BLAST上进行序列比对得到相似度最大的参考序列并确定基因型,用Megalign,Clustal W进行序列分析并建立同源关系树,分析呼和浩特地区HCV感染基因型的分布特征,以及基因型与宿主性别、年龄的关系。在测序成功的94份样本中,共检出6个基因型,1b型占73.40%(69/94),2a型占19.14%(18/94),3a、3b、6a型各占2.12%(2/94),6u型占1.06%(1/94)。性别资料明确的93例样本,男女基因型分布无显著差异(P0.05)。年龄资料明确的90例HCV样本,1+2型的患病年龄高于3+6型的患病年龄有统计学意义(P0.05)。得出内蒙古呼和浩特地区HCV感染的基因型1b为主,其次为2a型,但也有3型、6型等基因型的传入。HCV的基因型4型和5型未检测到。     

类风湿因子分型(IgG、IgM、IgA)与丙型肝炎关系的初探

为了了解类风湿因子(RF)自身免疫抗体的分型(IgG、IgM、IgA)与丙型肝炎之间的关系,探讨其出现的规律及与肝功能损坏情况的相关性.采用定量双抗原夹心ELISA法进行检测.结果发现抗-HCV阴性、ALT＜40U的C组RF总阳性率为5%;抗-HCV阳性、ALT＜40U的A组为56%:抗-HCV阳性,ALT≥40U的B组为89%,C组与A、B组之间有显著性的差异P＜0.01).A组lgM-RF阳性率为4%;B组为56%;A组与B组之间有显著性差异(P＜0.05).因此抗-HCV阳性者血清中各型RF总阳性率比正常对照的C组有明显的增高;B组的IgM-RF比A组明显地增高.研究结果提示:IgM-RF的增高与丙肝患者肝功能损坏的发生与否存在密切的关系.     

抗-HCV检测灰区设置的意义

为了探讨抗-HCV检测设置灰区的意义。以阈值定为阴性对照加0.12,灰区定为阈值下20%的范围,落在灰区内的样本用同一试剂双孔复查,只要有一孔阳性则判为阳性。结果显示,27份样本中,经复查有4份阳性,占14.8%,13份仍落在灰区,占48.1%,10份为阴性,占37%。如果不设灰区,将有抗-HCV阳性的样本的血液流入到患者体内,可危及患者的身体健康。     

评估国产（1,3）-β-D-葡聚糖检测试剂的诊断价值

目的比较国产与进口（1,3）-β-D-葡聚糖（BG）检测试验并对国产试剂在侵袭性真菌感染中的诊断价值进行评估。方法回顾性调查2008年4月～2009年5月我院203例（342份样本）怀疑侵袭性真菌感染的住院患者,根据诊断标准分为感染组和非感染组,对其中同时进行国产与日本试剂检测的100份样本进行配对t检验比较;在不同的判断标准下计算国产试剂的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等,采用McNemar配对χ2检验对不同方法进行比较。结果国产和日本试剂在感染组和非感染组配对t检验结果分别为P=0.235,P=0.076;国产试剂以单次≥20pg/mL和≥50pg/mL为界值的灵敏度、特异度分别为78.3%,67.2%和56.5%,85.0%,双次≥20pg/mL和≥50pg/mL为界值的灵敏度、特异度分别为25.0%,64.9%和25.0%,87.7%。结论国产与日本试剂检测值无统计学差异;国产试剂单次≥50pg/mL为界值较20pg/mL可以明显提高特异度,降低假阳性率,而不影响灵敏度。连续双份血清阴性（BG〈50pg/mL）具有较高的特异度和阴性预测值。