一种最简单的姐妹染色单体区别染色法

姐妹染色单体交换(SCE)测定,由于操作简单,观察客观,又具有高度的敏感性,因此是近年来颇受重视的一项细胞遗传学手段。并且已广泛应用于遗传学、临床医学及环境科学等方面的研究。下面我们就本实验室采用碱性磷酸缓冲液加吉姆萨染色,能使已标记上BudR染色体的两条单体很好地区别染色的技术简单介绍如下: 一、BudR标记:在细胞培养液中加10—20微克/毫升的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BudR的用量必须视细胞株的特性在此范围内调整),黑暗条件下培养两个细胞周期,然后按常规收获细胞,制作染色体标本。 二、区别染色:制备好的染色体标本(至少要在室温下放置一天)直接用新配的0.3M磷酸氢二钠(用1N氢氧化钠调pH至10左右,pH<9染色体的两条单体不能区别染色)配制3％吉姆萨溶液,染色10分钟,自来水冲洗,干燥镜检。     

几种显示姐妹染色单体差别染色(SCD)的简便方法

近年来,姐妹染色单体差别染色(简称SCD)技术,特别是姐妹染色单体互换(简称SCE)分析技术,已为细胞遗传学研究提供了一种新手段,在染色体的分子结构,DNA复制过程,DNA损伤与修复,细胞周期动力学以及检测多种致癌剂和突变剂等研究领域中得到广泛应用。     

植物姐妹染色单体交换

本文以蚕豆、洋葱、大麦、黑麦为材料,建立了一个植物姐妹染色单体分染(SCD)新技术。种子萌发后的根在含BrdU(1U~(-4)—10(-3)M),FdU(5×10(-8)M—10(-7)M),Urd(10(-6)M)溶液中生长一个细胞周期,然后转入Thd(10(-4)M),Urd(10(-6)M)溶液再培养第二个细胞周期。初生根或者可以在BrdU溶液中连续培养二个细胞周期。以后经秋水仙素前处理,酒精-冰醋酸固定,酶解压片,冰冻法分离盖片与载片,空气干燥2—7天备用。干燥后的染色体标本在40W UV照射下经2×SSC溶液60—80℃温育40分钟。水冲洗后Giemsa染色。此法具简便、快速、分染效果好的特点。 文章着重研究了化学诱变剂EMS、MMC、MH、苯酚和苯对上述作物SCE频率的诱发效应,并讨论了广泛利用植物SCE为检测诱变因素新手段的可能性。     

用改良的姐妹染色单体分化染色法对白鲢肾细胞增殖动力学和化学药品诱发姐妹染色单体交换频率的初步研究

自Latt首先使用Hoechst 33258对5-溴脱氧尿苷(BrdU)掺入的人淋巴细胞姐妹染色单体分化染色(SCD)以来,一些SCD永久制片法已陆续有报道。我们采用一种改良的SCD法,即硫堇-UV-Giemsa法,对离体短期培养的白鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肾细胞增殖动力学和丝裂霉素C(MMC)、敌枯双(N,N-甲撑-双:2-氨基-1,3,4-噻二唑)在白     

吸烟与姐妹染色单体交换

用荧光加Giemsa(FPG)术区分姐妹染色单体,分析了13名中年男子外周血淋巴细胞的SCE,比较吸烟者和不吸烟者“自发”的和用丝裂霉素(MMC)诱发的SCE频率变化。发现吸烟者的SCE频率(8.33±1.08)显著地高于不吸烟者(4.41±0.72),p<0.001。用MMC诱发后吸烟者各剂量的SCE值也明显地高于不吸烟者(P<0.01),并随着MMC剂量的增加,两者之间的差值增大。由于SCE的形成同DNA损伤后的修复机制有关,SCE频率的不同反映交换产生过程中机体重组修复系统的差异。因此,吸烟者与不吸烟者SCE频率的差异,表明两者在DNA修复机制上存在着差异。吸烟很可能改变了机体DNA损伤后的修复能力。     

小麦的姐妹染色单体交换

用BrdU-Giemsa法和改良的去壁低渗标本制备法,观察了小麦属5个种根尖细胞的SCE。各物种之间每条染色体的平均SCE是不同的。硬粒小麦为0.76±0.82(±S.E.),拟斯卑尔脱小麦为0.70±0.85,普通小麦为0.57±0.69,野生一粒小麦为0.48±0.60,节节麦为0.24±0.47。由于小麦属的某些种有不同的染色体组,它们的SGE的差别可能反映了不同染色体组的SCE不同,B组高于A组,A组高于D组。文章中讨论了造成这种差异的因素。 本文还研究了苯、乙醇、糖精对普通小麦的染色体畸变和SCE的影响。在本实验条件下,上述化合物能显著增加小麦的SCE,但不影响小麦的后期染色体桥的频率。     

蚕豆姐妹染色单体互换的研究

本试验将蚕豆主根浸在BrdUrd(100μM)+FdUrd(0.1μM)+Urd(5μM)溶液中17小时(黑暗中),然后转入dThd(100μM)+Urd(5μM)溶液中19小时(黑暗中)。秋水仙素前处理。固定后酶解压片,冰冻法分离盖片与载片。水合作用后用RNase处理1小时。再在UV照射下以Hocchst 33258溶液处理1小时。2×SSC 80℃温育1小时。 10％Giemsa染色。此法能获得良好的单体差别染色效果,清楚地显示出蚕豆的SCEs。 SCEa在蚕豆各对染色体上的分布除在副缢痕附近外,其分布频率与染色体长度成正比,出现的位置是随机的。副缢痕附近SCEs频率较高,且见到不均等交换现象。推测副缢痕附近异染色质的DNA重复序列可能是在进化过程中通过染色单体不均等交换而逐渐形成。 化学诱变剂EMS对SCE频率有强烈的诱发作用,即使剂量很低(0.01％,25℃,15min)也能显著提高SCE频率。为此可以期望,以植物为材料利用SCE也能作为检测诱变因素的新手段。     

染色质、染色体、染色单体、同源染色体、姐妹染色单体

在真核细胞的细胞核中,有一种分布不均匀的物质,易被碱性染料(如苏木精)所染色,称之为染色质(chromatin)。当细胞进入分裂期(M期)时,染色质就逐渐螺旋化,并反复折叠成为具有一定形态特征的小体,称之为染色体(chromosome)。可见,染色质和染色体是遗传物质在细胞周期中不同时期的描述用语,其物质本原是同一的,但又有差别(在形态上),是两个不同的概念。即当我们描述细胞分裂的遗传物质情况时,称之为染色体,而说明间期的遗传物质情况时,称之为染色质。正常二倍体细胞的染色体经过S(synthesis)期后,     

一种显示姊妹染色单体互换的简易技术BUdR-Giemsa技术

姊妹染色单休互换最早是Talor(1957年） 在植物细胞中使用³.H一放射自显影技术时发现 的^[1].1973年Latt等^[2].发现,在含有5-澳脱氧 尿嚓睫核普(5-Bromodeoxyuridine,以下简称 BUdR）的培养基中,生长两个周期的细胞,其 中期染色体用Hoechst 33258萤光染料染色, 在萤光显微镜下可观察到姊妹染色单体呈现不 同强度的萤光。可以作为研究姊妹染色单体互 换的一个方法。1974年Korenberg等^[3]对上述 方法进行了改进,可以不经Hoechst 33258萤 光染料染色和光照处理,直接将中期染色体标 本放在87-89⁰.C 1 M Na H₂PO₄ (pH 8.0)溶 液中浸泡处理10分钟,经蒸馏水漂洗然后用 Giemsa染色,在普通光学显微镜下,使姊妹 染色单体显示出深浅不同的颜色,从而简化了 Latt的技术,这个方法被称为BUdR-Giemsa技 术。     

显示肥大细胞的一种简易染色法

本文采用染血涂片的瑞特氏(Wright)染色方法,染皮下疏松结缔组织铺片或切片显示肥大细胞,方法简便,背景清晰,不易退色,效果很好,且便于学生制作。并对本法的作用原理进行了探讨。     

姊妹染色单体差别染色(SCD)标本制作方法

姊妹染色单体交换(SCE)是检查致癌物或致突变物的细胞遗传学效应的一种新方法。它具有灵敏、准确和比较简便、快速的优点。近来,在研究染色体的分子结构、DNA复制方式、DNA的损伤和修复等基本问题方面,此法亦逐渐显示了重要性。兹将本实验室的操作技术介绍如下(以人外周血淋巴细胞培养为例):     

真菌细胞核的一种快速简便染色技术—荧光染色法

本文报导了用荧光染料Hoechst Dye 33258在McIlvaine标准缓冲(pH7.26—7.44)对真菌细胞核染色的技术,这是一种广谱真菌细胞核染色技术,已证明在下列真菌中是有效的:双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、向日葵交链孢菌(Alternaria helianthi)、亚麻尖镰孢菌(Fusarium oxysporum f. sp. Iini)、(Penicillium binellure),终极腐霉菌(Pythium ultimum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia Solani)、以及酿酒酵母(saccharomyce cerevisiae)。双孢蘑菇,亚麻尖镰孢以及Penicillium binellum的分生孢子细胞核也能很好着色。     

2BS细胞姐妹染色单体互换研究

十多年中发展起来的姐妹染色单体互换 （简称SCE）显示技术【1,10,11,1$,1y],已实际应用到 许多研究方面。SCE现象可以自然发生,在细 胞培养中,其发生率有一正常值,在某些物理因 素或化学试剂的作用下,可使SCE频率升高,这 一现象可利用作为在环境中,诱变因子和致癌 物质引起的DNA 损伤方面的新的检测指标。     

小麦愈伤组织细胞的姐妹染色单体交换

用BrdU标记,改良的FPG法染色,建立了一种植物愈伤组织细胞姐妹染色单体分染的方法。并对培养基的不同附加成分对SCE的影响进行了研究。所有培养基上愈伤组织细胞的SCE率都显著高于正常根尖分生组织细胞。6-BA,AgNO_3,高浓度的2,4-D,蔗糖均可诱发SCE。     

姐妹染色单体分化染色中IdUrd和BrdUrd的效果比较

自从Taylor用~3H-放射自显影技术首次发现了姐妹染色单体交换以来,已在许多动、植物细胞里观察到姐妹染色单体交换。直到1974年Korenberg等改进了Latt、Wolff等用BrdUrd-33258 Hoechst荧光染料染色的方法,     

姐妹染色单体分化染色中IdUrd和BrdUrd的效果比较

自从Taylorli7用’H一放射自显影技术首次 发现了姐妹染色单体交换以来,已在许多动、植 物细胞里观察到姐妹染色单体交换。直到1974 年Korenberg^[2]等改进了Latt[^[3], Wolff^[4]等用 BrdUrd-33258 Hoechst荧光染料染色的方法, 发展了一种简易的显示姐妹染色单体分化染色 的方法（以下简称SCD法）,之后细胞遗传学实 验才得到了一个新的飞跃。     

介绍一种快速血涂片染色法

生理卫生课本规定学生观察显微镜下红、白细胞形态。迫切要求能有一种实用的快速染色法,血片制成后经过快速染色(仅用3—5秒)教师能立即进行演示、学生也能很快地分组实验。 1.染液的配制取Wright,s’粉0.1mg加甲醇80ml。配制时加适量CH_3OH研磨,使染料溶解。保存于紧塞的棕色玻璃瓶内。     

非诱变剂对姐妹染色单体交换的诱导效应

检测了16种非诱变剂对大麦根端分生细胞姐妹染色单体交换(SCE)的影响及其中9种成份对人外周血淋巴细胞SCE的影响。在大麦细胞中,用高浓度的葡萄糖、氯化钠、维生素、氨基酸及脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)处理均能显著提高SCE频率。维生素、氨基酸和dNTP对人外周血淋巴细胞中的SCE频率也有显著影响。实验结果表明,不只是诱变剂能提高SCE频率,非诱变剂在一定高剂量时也能提高SCE频率。非诱变剂影响SCE具有特殊的S CE增长曲线,SCE频率达一定值后不再随处理浓度的增大而提高。     

非诱变剂对姐妹染色单体交换的诱导效应

检测了１６种非诱变剂对大麦根端分生细胞姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）的影响及其中９种成份对人外周血淋巴细胞ＳＣＥ的影响。在大麦细胞中,用高浓度的葡萄糖、氯化钠、维生素、氨基酸及脱氧核糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰ）处理均能显著提高ＳＣＥ频率。维生素、氨基酸和ｄＮＴＰ对人外周血淋巴细胞中的ＳＣＥ频率也有显著影响,实验结果表明,不只是诱变剂能提高ＳＣＥ频率,非诱变剂在一定高剂量时也能提高ＳＣＥ频率。非诱变剂影响Ｓ