组织灌流与贴壁法体外培养奶牛乳腺组织的比较研究

采用组织灌流和组织块贴壁法体外培养奶牛乳腺组织,通过LDH活力测定、台盼蓝染色、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜技术比较两种培养方法对奶牛乳腺组织活性及组织超微结构的影响,建立奶牛乳腺组织的培养体系。结果表明,以1mL/h的速度灌流培养的奶牛乳腺组织在DMEM 10%小牛血清培养基中12～60h内保持良好的组织活性和超微结构,贴壁培养的奶牛乳腺组织在DMEM 10%小牛血清的培养基中60～108h内保持良好的组织活性和超微结构,两种培养方法各有优缺点。     

五肽胃泌素和胆囊收缩素对血管灌流大鼠离体胃运动的影响

用血管灌流大鼠离体胃制备,研究五肽胃泌素(G5)和八肽胆囊收缩素(CCK8)对胃窦收缩运动的影响。结果表明:(1)血管灌流G5和CCK8都能显著兴奋胃窦收缩运动,并有量效关系;(2)抗胃泌素血清(1:100)可完全取消G5对胃窦收缩运动的兴奋作用;(3)CCK受体阻断剂双丁酰环磷鸟苷和抗CCK8血清(1:100)都能完全取消CCK8对胃窦收缩运动的兴奋作用;(4)M受体阻断剂阿托品能完全阻断G5对胃窦收缩运动的兴奋作用,部分阻断CCK8对胃窦收缩运动的兴奋作用。上述结果提示:(1)G5可特异性兴奋血管灌流大鼠胃窦收缩运动,该作用通过壁内胆碱能神经系统介导;(2)CCK8对血管灌流大鼠胃窦收缩运动亦有特异性兴奋作用,该作用只是部分与壁内胆碱能神经系统有关。     

哺乳动物细胞灌流培养工艺开发与优化

近年来生物药市场需求量激增,高产量、高质量、低成本的哺乳动物细胞灌流培养工艺顺势成为工业界和学术界普遍关注的热点。文中围绕灌流培养工艺特有的操作环节及工艺优化应着重关注的细节展开论述,综述了近年来在灌流培养工艺开发和优化上取得的进步和提出的策略,以期为哺乳动物细胞灌流培养技术的开发提供参考。     

烟草愈伤组织继代培养与分化期间核酸代谢的比较研究

Changes in the contents of DNA and RNA, RNA species, the synthesis rates of DNA and RNA, and the activity of DNase and RNase were investigated in the callus of tobacco (Nicotiana tabacum L. cv. Willow Leaf) during subculture and differentiation. The contents of DNA and RNA were higher in differentiating callus than that in subcultured callus. After day 12, the contents of DNA and RNA in differentiating callus rose continuously while the contents of DNA and RNA in subcultured callus remained constant. Changes in RNA species and its relationship to total RNA level were also analyzed. At the stage of shoot primordium formation in differentiating callus, the activity of RNase increased markedly and the synthesis rate of RNA increased continuously; while the RNase activity and the synthesis rate of RNA in subcultured callus were much lower during the same period. During the period of shoot growth, the synthesis rate of DNA in differentiating callus was elevated compared to that in subcultured callus. The results above suggested that the metabolism of nucleic acids in differentiating callus was more active than that in subcultured callus.     

烟草愈伤组织继代培养与分化期间核酸代谢的比较研究

柳叶烟草愈伤组织在分化和芽原基形成期间,DNA 和RNA 含量均高于继代培养物;在芽原基形成后和幼芽生长期间(12天以后),DNA和RNA 含量持续上升,而同期继代培养物巳进入生长静止期,DNA 和RNA 含量基本不变或略有下降。根据RNA 电泳结果还进一步分析了两种愈伤组织培养物各RNA 组分变化与总RNA 含量变化的关系。分化培养物在芽原基形成时有明显升高的RNase 活性峰和持续上升的RNA 合成速率;而此时期继代培养物的RNase 活性及RNA 合成能力均较低;分化愈伤组织的DNA 合成速率在幼芽生长期间仍维持上升趋势,且显著高于同期继代愈伤组织的合成速率。这些结果表明,烟草愈伤组织分化培养物比继代培养物有更旺盛的核酸代谢能力。     

烟草愈伤组织继代培养和分化期间蛋白质代谢的比较研究

柳叶烟草(Nicotiana tabacum L.)愈伤组织在分化和芽原基形成期间,与继代增殖培养物比较,蛋白质含量与蛋白水解酶活性均缓慢上升;组分Ⅱ(水溶性蛋白与酶蛋白)蛋白质和核糖体组蛋白的合成速率都明显高于继代培养物;分化组织中总核糖体水平,特别是执行蛋白质合成功能的多聚核糖体的构建也都高于继代培养物。显然,分化培养愈伤组织较继代培养物有更高的蛋白质合成作用;而且组织分化和芽原基形成所需合成的新蛋白组分是与继代增殖生长的不同。继代培养后期,蛋白水解酶活性迅速升高,多聚核糖体相对量与蛋白质合成速率均明显下降,蛋白质含量急剧降低,表现出继代培养物开始衰老的代谢特征。此时期的分化培养组织,随着芽原基的继续生长,虽然蛋白质合成速率、多聚核糖体水平与蛋白质含量较前期有所降低,但都明显高于同时期的继代培养愈伤组织。     

青叶胆愈伤组织的诱导与液体继代培养

以青叶胆(Swertia mileensis)幼叶为外植体,在添加不同生长调节剂组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导。结果表明,最有效的生长调节剂组合为IAA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L和NAA 4.0 mg/L+KT 2.0 mg/L+GA₃ 1.0 mg/L,其诱导率分别为96.6%和96.0%。使用以上两种生长调节剂组合进行愈伤组织的液体继代培养,10 d可使愈伤组织增殖率分别达257.3%和310.2%。     

胰蛋白酶消化法和组织块法原代培养人包皮成纤维细胞的比较

小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)是目前国际上公认的人胚胎干细胞(hESCs)体外培养的饲养层细胞,但MEFs存在寿命短、动物源性污染等问题,需要探索适于hESCs体外培养且寿命长的人源性饲养层.采用胰蛋白酶消化法和组织块法分别原代培养人包皮成纤维细胞(hFFs),探索hFFs原代培养的最佳方法,为hFFs作为饲养层在hESCs研究中的应用提供可靠的科学依据;通过倒置显微镜下观察其生长状态和免疫细胞化学染色鉴定,结果显示两种原代培养方法获得的hFFs的形态及生物学特性均符合成纤维细胞;通过测定细胞生长曲线及MTT法检测,结果显示两种原代培养方法获得的不同代数的hFFs均具有较高的增殖活性,传代10余代仍能保持较好的细胞形态,可以制备成饲养层用于hESCs的研究.     

向日葵组织培养研究进展

向日葵(Helianthus annuus)是世界主要的油料作物之一.近几年来有关向日葵的研究很多,其中向日葵组织培养研究越来越受到重视.本文从向日葵外植体培养、植株再生影响因素、组培过程中存在的问题及解决方法等方面进行了综述.     

比利时杜鹃的组织培养研究

以比利时杜鹃 (Rhododendronhybridun)的茎段、叶为材料 ,Read、Anderson和N培养基为基本培养基 ,在 2 3± 0 .5℃ ,光照 12h/d ,光照强度 15 0 0lx下进行培养 ,诱导出芽。结果表明N培养基为比利时杜鹃组织培养的最适培养基     

达摩兰组织培养适宜培养基的研究

以达摩兰的原种苗茎段为外植体进行组织培养研究,筛选出最适培养基(1)原球茎诱导:MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+香蕉肉250 g/L;(2)丛生芽诱导:1/2 MS+6-BA 3 mg/L+NAA 2.0 mg/L+AC 2.5 g/L+蔗糖3%+香蕉肉200 g/L;(3)芽增殖:1/2 MS+6-BA 3 mg/L+NAA 2.0 mg/L+AC 2.5 g/L+蔗糖3%+香蕉肉150 g/L;(4)根诱导:1/2 MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 2.5 g/L+蔗糖3%。采用珍珠岩、细石与树皮的混合物为培养基质,移栽成活率达95%以上。     

黄精种子萌发及组培技术研究

研究了不同的激素对多花黄精种子的萌发及组培的影响。研究结果表明:多花黄精种子萌发的最佳激素条件为6-BA 180.0 mg/L+GA_3 60.0 mg/L,两种激素可能有交互作用;多花黄精块茎外植体的最佳灭菌时间为12 min;最佳诱导外植体愈伤组织培养基为:6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+MS,低浓度的6-BA利于多花黄精块茎愈伤诱导;最佳诱芽培养基为:6-BA 6.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+MS和6-BA 4.0 mg/L+TDZ 0.2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+MS,低浓度的TDZ对不定芽的诱导和生长有促进作用;最佳生根培养基为:IBA 1.0 mg/L+1/2MS,但是过高浓度的IBA会抑制根的诱导。通过多花黄精的繁殖技术的研究,以期为多花黄精的快繁提供技术支持。     

魔芋开放式组织培养技术初探

在培养基中添加抑菌剂,克服非灭菌条件下魔芋组织培养污染问题,可有效的简化步骤,降低生产成本。本试验对抑菌剂及其接种的条件进行筛选和优化,结果表明:抑菌剂H198在稀释400倍、培养基pH值5.5时抑菌效果及分化状况最优,接种需在相对洁净的接种室进行,培养容器以传统组培容器最适合。     

观音莲的组织培养研究

通过观音莲的茎尖培养获得无菌试管苗,研究了生长调节剂和椰乳(CM)组合对芽增殖的影响,探讨了生长调节剂和多效唑(MET)组合对生根的影响,并对移栽基质进行了筛选。结果表明:观音莲增殖的适合培养基为MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+CM 15%~20%;适合观音莲生根的培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+MET 0.5 mg/L;最佳的移栽基质为珍珠岩,移栽成活率达100%。     

连续灌流培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体

自 2 0世纪 70年代以来 ,工程抗体在基础医学研究、临床诊断和治疗 ,以及免疫预防等领域中的广泛应用 ,大大促进了其产业化的进程。目前工业化生产单克隆抗体的主要方法是通过发酵罐、中空纤维和固定床等生物反应器培养系统 ,以微载体、微包囊法在体外大规模高密度培养杂交瘤细胞 ,再通过相关的纯化手段浓缩纯化制备抗体[1 ,2 ] 。就操作方式而言 ,一般采用两个基本策略 :①大容量高密度的悬浮培养 ,最多采用的是搅拌式气升式生物反应器 ,通过微载体依托细胞相对固定化 ,降低了搅拌培养时对细胞的剪切力 ,提高细胞的密度和稳定性及生产率。…     

李组织培养研究进展(综述)

本文介绍李茎尖培养、茎段培养、胚培养、原生质体培养及叶片培养,分析其中的有关影响因子,重点阐述不同碳源和外源附加物对试管苗生长和分化的影响,并提出李组织培养的存在问题及解决途径。     

桤叶唐棣组织培养研究

以桤叶唐棣的带芽茎段为外植体,对桤叶唐棣离体培养技术进行了初步研究,结果表明：初代培养基为MS IAA0．1mg／L 6-BA 0．5mg／L KT 0．5mg／L;增殖培养基为MS IAA 0．1mg／L 6-BA 2.0mg／L,增殖芽数最大,达到5．4;GA3对茎芽长无促进作用;在1／4MS无激素培养基上,生根率达87．9％。